Molinas i de Ferrer, Ma. Lluïsa

Revistes Catalanes amb Accés Obert

PRUEBAS DE INOCULACION ARTIFICIAL EN EL 
SISTEMA DIANTHUS CARYOPHYLLUS / UROMYCES 
CARÏOEHYLLINUS (SCH) WINT. 
M. Mollnas de Ferrer 
Departaraento de Biologia 

PRUEBAS DE INOCULACION ARTIFICIAL EN EL SISTEMA DIANTHUS 
CARYOPHYLLUS/ UROMYCES CARYOPHYLLINUS (SCHl.) WINT. 
M.Mollnas de Ferrer 
Depattamento de Biologia 
La lnoculacl6n artificial con unos fflétodos ade 
cuados permlte dlstlngulr con segurldad los genotlpos een 
slbles de los reslstentes. 
En estàs pruebas se estudl6 e l efflpleo de tres 
métodos de Inoculaclon a r t i f i c i a l y su apllcacl6n respec 
t lva sobre plantas Intactas cultlvadas en Invernadero, 
esqueies en solucl6n nutrit iva y hojas mantenldas en c4-
fflara húmeda que parecleron los m&s ld6neos para su a p l l -
caclón en e l c lave l . Se rea l lz6 un sondeo de varledades 
y c las l f l cac l6n sagún su senslbll ldad y se estudiaren los 
d l s t ln tos t lpos de reacclón en los tej ldos del huesped. 
Material y técnlcas empleadas 
Todas las pruebas de lnoculacl6n a r t i f i c i a l 
se efectuaren con cuatro varledades medlterr&neas.obte-
nldas por J. Agullfi . especlalmente adaptadas a las con-
diciones eool6glca8 de la oomaraca de *'E1 Maresme"* dos 
conslderadas sensibles "Klruna" y "Bikini" y dos r e s l s t e a 
tes , "Aurora" y "Mireia". En e l sondeo se ut l l l«aron 
velnte varledades en su mayor parte nuevos hlbrldos de 
c lave l . Las plantas se cultlvaron en e l Invernadero de 
la Facultad de Clenclas de la Unlversldad de Barcelona, 
sobre un substrato Ae turba y arena y reclbleron un abo-
nado regular cuya relaclón N7P2O5/ KgO era de 1/1/2, 
La lnoculacl6n de plantas Intactiïs se rea l lz6 
entre los velnte y tre lnta dlas del transplante, ut l l l«à | i 
dose 3 bloques de ocho plantas para cada varledad. Los 
tres prlffleros dlas después de la lnoculacl6n se mantenien 
tapadas con bbisas de po l l e t l l eno . 
Los esquejes procedian de plantas seguramente 
exentas de enfermedad,cultlvadas en los Campos Expérlmen 
t a l e s de la Pacultad de Clenclas. Antes de su InoculaclSn 
se reallzaba un lavado con «M^ ua durante 15 min. 'seguldo 
de e8 ter l l l zac l6n superf ic ia l con alcohol de 70% y a con 
tlnuacl6n cada esqueje era colOcado en un natraz con 50 
ce de soluclón Pfeffer diluïda. Una vez Inoculados se cu 
brlan con bolsas de polletlleno para lograr una c&mara -
saturada de humedad. Se utillzaron tres bloques de ocho 
esquejes para cada varledad. 
Las hojas alsladas, prevlamente deslnfectadas 
cofflo en él caso anterior, se colocaban en c&oara hüjaeda 
y después de la Inoculaclón se dejaban bajo luz difusa y 
a temperatura de 18°C a 20°C, Se reallzaron tres repetl-
clones con velntlcuatro hojas para cada varledad. 
El registro de los resultados se hacla en to-
dos los casos a los 15 y 20 dlas de la Inoculàclón.. Se-
procur6 Inocular culdadosamente ambas oaras de las hoJas 
sln produclr herldas. 
Las esporas formaban un lote homogéneo obten^ 
do à partir de plantas naturalmente Infectadas en diver-
sos puntes de la comarca de "El Maresme" (Mollnas, 1976) 
El contaje de las esporas se reallzd'.con la cimara de -
Thoma ajustando despu^s las diluciones deseadas. Antes-
de cada lnoculacl6n se comproba la çapacldéd germlnatlva 
El prliMr m^todo de lnooulacl6n oonsl8tl6 en 
aplicar una suspenslón de esporas en acelte de parafina-
oontenlendo aprozlmadamente 10^ esporas por mllllltro -
con ayuAa de un plnoel de pelo blando. A contlnuaclón -
se pulverlzaban las hojas con agua. 
El segundo mJtodo conslstl6 en la pulverlza -
cl6n..sobre las hoJas prevlamente humedecidas de una oez-
cla de esporas con talco en proporcl6n de 50 mg de ure— 
dosporas por gramo de talco. 
Con el tercer método se procedia dlreotamente 
a la atomlzacl6n de una suspenglón de esporas en agua — 
contenlendo aprozlmadamente 10^ esporas por ml j gastan-
dose una cantldad aproximada proporcional a 0,125 ml por 
ho Ja. 
Se ha reallzado el control efectuando el con-
taré dlrecto de las lesiones en las plantas, consideran-^ 
do como lesldn el Àrea clor6tlca característica que se -
desarrolla , en la ouAl pueden apareoer m&s tarde una o-
n&B pústulas. 
Resultados de la lnooülacl6n artificial 
Las esporas de Uromyoes caryophylliftus (Sch.) 
Vint, germlnan i»ra produclr un promicello, sln perlodo 
de latencla,tantp en agua como en una suspenslón en aoe^ 
te de parafina. Esta propledad fué utllizada para coapr£ 
bar la facultad germinatlTa de los distintes Iotes de -
uredosporas . 
Los resultado* obtenidos con la inoculacfcfin. de 
plantas Intaotas y de hoias aisladas oantenldas en cAoa-
ra hÜAieda han sldo satlsf actor los. EX numero de pfistuías 
desarrollado en aabos casos es elevado , ver tablas nr 2 
7 3, lAS hoJas alsladas resisten blin el perlodo de in-
oubaci6n e inoluso emiten algunas raices adventicias.Los 
esqueies mantenidos en solucl6n nutritiva presentaron pr^ 
-ble nas de marchltez e Infecclones a cargo de hongoè sa 
profitós (Fusarlum sp., F. roseum . Alternaria sp., Botr^ 
tls sp,) que en muchos casos Impldleron la termlnacl6n 
del experimento. 
De los tres métodos ensayados el que en todos 
los casos ha proporclonado mejores resultados es la Ino-
culacl6n de esporas en una emulsl6n en acelte de parafi-
na y pulvarlzaclón posterior de agua (tabla 1 y 3). No-
sotros expllcamos el efecto favorable del acelte de para 
fina por dos motfcvosi por una parte por favorecer la con 
densaclón de pequefias gotas de agua sobre la superfície" 
de las hojas.necesarlas para la germlnaclón de las espo-
ras y, por otra parte, una poslble extractl6n de Inhlbl-
dores de la germlnaclèn ,de caràcter llposoluble. 
La pulverlzaclón de una mezcHa de esporas con 
talco, método frecuentemente recomendado en la blbllogra 
fia para la lnoculacl6n de otras royas (Dunkle • Maheshwa 
rl y Alien,1969..Zlmmer et al, 1958., Sunderman, Ausemuïï 
1963.,Cammak, 1958) dl-6, en nuestro caso, resultados po 
co favorables. Las esporas en la mayorla de los casos no 
llegaban a germinar y el número de pústulas que alcanza-
ban desarrollo era muy escaso. Probablemente este método 
s6lo resuite adecuado para la Inoculaol-on de grandes su 
pèrfides en condiciones de campo,cuando se Inocula, por 
ejemplo, una superfície de trigo o avena. 
Tampoco se obtuvleron resultados brlllantes -
con la atoffllzacl6n de esporas en agua. El número de pús-
tulas es superior al de la lnoculacl6n con talco però In 
ferlor al obtenldo con acelte de parafina. Los resultados 
en este caso fueron muy Irregulares. 
La utlllzacl6n de una emulslón de esporas en 
acelte de parafina y agua parece ser el método m&s ade -
cuado para la lnoculacl6n artificial del olavel con el -
agente causante de la roya, Uromyces caryophylllnus.y es 
por tanto el método de eleccl6n. Dlsponer de un buén mé-
todo de lnoculacl6n artificial cuyos resultados sean re-
produclbles es un factor Importante en el estudio de los 
mecanlsmos de resistència y de los factores hereditàries 
que la transmlten. 
Estudio de los dlstlntos tlpos de reaccl6n en los tejldos 
del huesiMd. 
El estudio de la reacclón frente a U, caryophy 
lllnus de las varledades seleclonadas para nuestro tr«b« 
Jo se lnlcl6 con un "screenlng" o sondeo preliminar que" 
se llev6 a cabo en plantas en las que se dej6 curso a la 
Infecclón natural , colocando en el momento de la planta 
cl6n dos plantas de olavel de raza americana "Slm" rouy"" 
Infectado por cada dlez plantas del sondeo. A los ^ 5<lias 
de Iniciar el experimento se Iniciaren los recuentoa, en 
núiwro de tres y espaclados \uio8 qulnce dl«s. 
TABLA 1 
Numero de ^ustulas por hoJa en plantas enteras 
Valores medlos de 2k plantas por variedad 
"Klruna" "Mireia" "Aurora" "Bikini" 
método 1 3,52 1,02 - 0 - 3 ,28 
método 2 0,69 o,22 - 0 - 0,06 
método 3 1,97 0 ,51 - 0 - 0 ,61 
TABLA 2 
Nújaero de ^ustulas por esqueje , v a l o r e s medlos ho Ja . 
"Klruna" "Mireia" "Aurora" "Bikini" 
e p/h e p/h e p/h e p/h 
método 1 6 I . 0 3 8 0 ,5 5 - 0 - 7 0,8 
método 2 3 0 ,01 7 - 0 - 6 - 0 - if 0 ,03 
método 3 7 0,20 5 o ,09 9 - 0 - k .K 1,02 
e - n° de esquejes en l o s que se pudo r e a l l z a r e l 
contaje a l f i n a l de l a exper iènc ia 
p/h 11° de pústulas por ho ja 
TABLA 3 
N(&fflero de ^ustulas y lesiones locales en hojas ais-
ladas, valores medlos de 72 hojas por varledad. 
métodol 
fflétodo 2 
método 3 
"Klruna" 
PP 
í+.l 
0 .3 
2 . 5 
11 
-
-
. 
"Mireia" 
PP 11 
0.92 # 
- 0 -
0.32 -
"Aurora" 
PP 
- 0 -
- 0 -
- 0 -
11 
# # # 
-
# # 
"Bikini" 
PP 11 
2 .95 # 
- 0 -
0 ,51 -
PP n® de pústulas por hoJa 
11 n"de lesiones locales 
ausentes 
# fflenos de 5 por hoJa 
## de 5 a 10 por hoja 
### fflAs de 10 por hoJa 
Se repl t ló e l experlemnto medlante Inocula -
cl8n de una emulslón de esporas en acelte de parafina se 
íçún e l método anterlormente descrito.sobre plantas ente-
rae. Se ut l l lzaron d l e c l s e i s plantas para cada varledad. 
Los recuentoB se hlcleron a los qulnce dlas y un més de 
la Inoculaclón. 
Las plantas se dlstribuyeron en cinco «rupos 
según la gravedad de las les iones raedlda en forma de nú-
mero de püstulas v i s i b l e s en las hojas del sexto y sept i 
mo v e r t i c i l o s contando cuatro brotes de cada planta. 
grupo 0 ningún slntoma 
# grúpo 1 entre 0 y 0.5 p'ustulas/hoja 
## grupo 2 entre 0,5 y 1,1 púst./hoja 
### grupo 3 entre 1,1 y 2 púst./hoja 
#### grupo ít ffl&s de 2 pústulas por hoja 
Posterlormente las variedades fueron claslflca -
das en cinco grupos segun su sensibilidad ( - inmunes, # 
resistentes. ## medianamente sensibles, ### sensibles y 
#### muy sensibles). Los resultados se recogen en la ta 
bla ^, condiciones de canpo, y 5 inoculaclón artificail" 
en invernadero. 
Se estudiaren con precisión las reacciones a la ino 
culación de esquejes, plantas de invernadero y hojas al¥ 
ladas, en los tipos inmunes, resistentes y sensibles y 7 
slgulendo las normas aconsejadas por Stakman y Harr,1957 
(cit.Wood,1967), hemos agrupado las distlntas reacciones 
en se is tipos de infeccióni 
tlpo de lnfecci6n 
0 Inmune 
1 Muy resiatente 
2 Resistentes 
3 Susceptibles 
Reacci6n del huesped 
No se desarrollan pústulas 
Pueden aparecer les iones -
necrótlcaa puntlformes de 
color blanco difici lmente 
v i s i b l e s a ojo desnudo. 
Pústulas muy pefuenas ro-
deadas de &rea necr6tlca. 
Púakulas peqiMnaa o media-
naa, generalmente una por 
lesi6ti,rodeada de un halo 
clorfitico o necr6tlco re ia 
tlvamente ancho. " 
Pústulas de tamallo mediano 
ge ne ralme nte se paradaa,aIn 
te j ldos necròtiooa però en 
las que aparecen halos e l a 
rftttcos con re la t iva fre -
cuencia. 
TABLA 4 
r e c u e n t o s 
.çallfXcftfflCfl raza colox 
ALICE 3 3 ^ 
AURORA ROJO 0 0 0 
AURORA ROSA 0 0 6 
BIKINI 2 3 3 
CABALLERO 2 2 2 
CÀNDID 1 2 2 
EVA 1 1 1 
INES 1 1 2 
KIRUNA 3 3 ^ 
MIREIA 1 1 1 
LUX 1 1 2 
PIRINEU 2 2 2 
ROBERTINO 1 1 1 
SATURNO 1 1 1 
SESTRIERE 2 3 3 
SITJES 1 2 2 
TOKIO 2 2 3 
WHITB SIM 4 4 il· 
WILLIAM SIM if ^ if 
CARMEN 1 1 2 
# # # # 
-
-
# # # 
# # 
# # 
# 
# 
# # # 
# 
# # 
# # 
# 
# 
# # # 
# # 
# # 
# # # # 
# # # # 
# 
M/A 
M 
M 
M 
M 
M 
M 
M 
M 
M 
M 
M 
M 
M 
M 
M 
M 
A 
A 
M 
antllo. 
rojo 
rosa 
ammllo. 
rojo 
blanc o 
amllo. 
rosa 
blanc0 
rosa 
fiUBllOi' 
blanc0 
roJo 
roJo 
blanc0 
roJo 
amllo. 
balnco 
balnco 
roJo 
Resultados del sereening preliminar de la res i s tènc ia l'r 
frente a Uroayces oaryophyllinus de veinte Tarledades de 
o lare l inoculados en condiciones de campo, valores medios 
de tre inta plantas p . 0 , 0 5 / 
— grupo 0 
# grupo 1 I ### grupo 3 A americano 
## grupo 2 , #### grupo í* M mediterraneo 
TABLA 5 
ALICE 
AURORA ROJO 
AURORA ROSA 
BIKINI 
CABALLERO 
CÀNDID:; 
CARMEN 
EVA 
INES 
KIRUNA 
MIREIA 
LUX 
PIRINEU 
ROBERTINO 
SATURNO 
SESTRIERE 
SITJES 
TOKIO 
WHITE SIM 
WILLIAM SIM 
recuentos 
1 
í* 
0 
0 
3 
2 
2 
1 
2 
2 
k 
1 
2 
2 
2 
2 
k 
2 
3 
il· 
4 
2 
í^  
0 
0 
3 
2 
2 
2 
2 
2 
i|. 
2 
2 
3 
2 
2 
4 
3 
3 
U 
il· 
callficacl6n 
#### 
-
-
### 
## 
## 
# 
# 
# 
### 
# 
## 
# # 
# 
# 
### 
# # 
## 
#### 
#### 
Resultados obtenidos en la lnoculacl6n artificial oon 
amulslÓn de esporas en acelte de parafina de plantas naQ 
tenldas en invernadero. Valores medlos de dleclsels plari 
tas, pi0,05. (oallflcaclfin ver tabla k). 
^ Muy suscep t ib les Pfistulas grandes a menudo 
confluentes. Las lesiones 
carecen de halo clor6tico 
y nunca aparecen necrosis. 
5 Heteroíi;eneo PlPntas con pústulas de tt 
poloajia varia que a veces 
incluyen a todos los ante-
rlores.en \ma misma planta 
En la tabla 9 se ofrece el resultado de clasifIcar 
de acuerdo con esta escala las dlstintas variedades estu 
diadas y su relaci6n con el número de pústulas por hoJaT 
valor medlo global ponderadòien condiciones de campo y c 
el grada de sensibllidad asignado. 
Se examinaron también cuidadosamente los resui 
tados de la inoculación artificial de hojas escindldas , 
mantenidas en c&mara húmeda a temperatura ambiente, 
Se pudo observar la apariol6n en las varieda-
imunes de unas lesiones puntiformes en las que aparece -
un hajo que no sintetiza almid'on y que se convierte en 
una lesión necrfitica, que no es visible en condiciones de 
campo si no es con ayuda de instrumentes 6pticos. La apa 
rlción del halo suele ser entre las cuarenta y ocho y las 
at-enta y dos horas después de la inoculaci6n en las varle, 
dades inmunes. mientras en las sensibles tarda de cuatro~ 
a ocho dlas en hacerse claramente visible. 
Los resuitados de los distintos tipos de ino* 
culaci6n son concordantes «teniendo en cuenta que el núme 
ro de lesiones siempre es mayor en las plantas de Inver-
nadero o en c&maras húmedas. 
Aparecen distintos grados de reacci6n y, en -
contra de la suposición de Landsade,1961, nosotros hemos 
encontrado dos variedades "Aurora rojo" y "Aurora rosa" 
inaimes, por lo menos en la actualidad a las variedades 
del patèteno existentes en la comarca de £1 Maresme. 
En lineas generales la resistència parece re-
lacionada inversamente con el vigor y la existència de pig; 
mentos antocianos. Las plantas m&s sensibles son, en ge*" 
neral las m&s vigorosas.de creclmiento fapldo,ho3a color 
verde amarillento y flores claras. 
Las obervaciones realizadas sobre plantas en 
condiciones contr ladas manifestaren el efecto de la tem 
peratura y la nutricl6n nitrogenada sobre el desarrollo" 
de las pústulast 
1) En las variedades sensibles la temperatura modi-
fica la exprésion de las pústulas. AsI en la cv. "Bikini" 
durante los meses frios aparecen fSustulas del tipo tres, 
mientras en verano en la misma variedad las lesiones son 
del tipo dos. En la cv. "Klruna" podemos observar duran 
te el verano la formaclon de halo necrfitlco alrededor de 
las lesiones. 
TABLA 6 
Tlpo de Infecclfin 
0 
1 
2 
3 
k 
5 
VARialDES 
Aurora rojo 
Aurora rosa 
RobertIno 
Carmen 
Eva 
Lux 
Mireia 
Caballero 
Plr lneu 
Satumo 
S e s t r l e r e 
Tokio 
Al l ce 
Klruna 
W l l l l a a Slffl 
Vfhlte S ia 
B i k i n i 
Càndid 
S i t g e s 
Grupo 
0 
0 
1 
1 
1 
2 
1 
2 
2 
1 
3 
2 
3 
3 
2 
2 
S e n s l b l l l d a d 
-
# 
# 
# 
# # 
# • 
# # 
# # 
# 
# # 
# # # 
# # # 
# # 
# # 
Dlstrlbucl6n de las varledades segfln los tlpos de Infec-
cl6n y 8U relaol6n al numero de pústulas por hoja y sen-
slbllldad global aslgnada. 
0, Inmunet l»«uy res l s tente i 2, res l s tente i 3,suscep-
t i b l e ! í*^ ,muy susceptible I 5,heterogeneo. 
c las l f lcaoldn atendlendo a l nftmero y t ipologia de las 
l e s iones . 
2) Cuando se fuerzan las dosis del abonado nltroge-
nado se manlflesta un aumento de la sensIbllldad,que se 
traduce no en un aumento del número de pústulas slno en 
un cambio en el tlpo de lnfeccl6n. 
La comparaclón de s l s temas con d l s t i n t o grado de com 
p a t l b i l l d a d , a s l como e l e f e c t o de l a temperatura y d e l ~ 
contenldo en n i trogeno , nos l l e v a a pensar en un mecanl£ 
fflo de h1persensIbl l ldad cono responsable de l a Inmunldad 
de l a s p lantas d e l grupo "Aurora". 
La reacclSn de h lpersens Ib l l ldad se caràcterIza por 
l a muerte ffiplda de l o s t e j l d o s con apar lc l6n de l a ne— 
c r o s l s correspondlente , mucho antes de que enplecen a -
aparecer l o s slntomas en l o s s l s temas compatibles . Las -
prlmeras c^lulas que son Invadldas por l o s haus tor los -
procedentes de l a h l f a radicada en l a v e s l c u l a subestomÀ 
t l c a , mueren Inmedlatamente, por l o que e l parfislto que-
da rodeado de c é l u l a s muertas a p a r t i r de l a s cua l e s e s 
lncai}az de n u t r l r s e . El mater ia l de reserva de l a espora 
se agota durante e perlodo de germlnacíon (Schlpper y 
Mlrocha,1969) por l o que a l f a l t a r e l sumlnlstro e l hon-
go muere. 
Siunarlo 
En e s t à s pruebas se e s t u d i o e l empleo de l a Inocu-
lac l^n a r t i f i c i a l y su a p l l c a c l ó n r e s p e c t i v a sobre p lan-
t a s Intac tas c u l t l v a d a s en Invernaderot e s q u e i e s y hojas 
a l s l a d a s . De entre l o s m^tbdos ensayados, l a lnoculaol6n 
con una èmulsI6n de esporas en a c e l t e de parafina parece 
e l fflAs adecxiado en todos l o s casos y e s e l método de -
e l e c c l 6 n , y e l empleado en todos l o s domAs experimentes . 
Se procedl6 a c l a s l f l c a r un eonjxmto de varledades 
medlterraneas adaptadas a l a s condic iones e c o l 6 g l c a s de 
l a comarca de El Maresme y se Incluyeron dos varledados 
aiMrlcanas t l p o Slm. E l resu l tado de e s t à s prueb s fué 
ev idenc iar l a e x i s t è n c i a de s l s temas con d i s t i n t e s gra -
dos de compatIbll ldad que van desde l a Inmunldad (cv.·'Au 
rora rosa" y "Aurora rojo") hasta d i s t i n t e s grados ds süs 
c e p t I b l l l d a d , " 
El e s t u d i o de l o s mecanismes de reacc i6n en 
s l s temas de d l s t i n t o grado de compatlbl l ldad ha perml t l -
do demostrar que l a Inmunldad y l a r e s i s t è n c i a son d e b l -
das a un fen6meno de h l p e r s e n s i b l l l d a d . 
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Pruebas de inoculación artificial en el sistema Dianthus Caryophyllus / Uromyces Caryphyllinus (Schr.) wint

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Pruebas de inoculación artificial en el sistema Dianthus Caryophyllus / Uromyces Caryphyllinus (Schr.) wint

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