Bonet i Marull, Sergi

Molinas i de Ferrer, Ma. Lluïsa

Revistes Catalanes amb Accés Obert

SCIENTIA gerundensis, 12:27-34 (1986) 
FAGOCITOS EN LOS CONDUCTOS EPIDIDIMARIOS DE 
Dina lineata (Hirudinea, Erpobdellidae) 
S. Bonet y M. Molinas 
Departament de Biologia Cel.lular i Fisiologia. Col.legi Universitari de Girona (UAB). 
Hospital, 6. - 17071 Girona. 
RESUM 
Aquest treball tracta de I'estructura, l'ultrastructura i la funció dels fagocits presents en 
els conductes epididimaris de Dina lineata, sangonera d'aigiies dolces, hermafrodita i 
proterindrica, de fecundació traumatica hipodbrmica. 
Les mostres han estat fixades en formol i incloses en glicol metacrilat per a la seva 
observació al microscopi bptic; i fixades en líquid de Karnowsky, postfixades en tetraoxid 
d'osmi, i incloses en resina Spurr per a la seva observació al microscopi electronic de 
transmissió. 
Els fagbcits de I'epididim són cel-lules lliures, rnonucleades. intensament actives en 
la funció macrofagica. Es troben relativament abundants entre els feixos d'espermato- 
zoides. A diferencia dels fagbcits lliures dels sacs testiculars, no s'observa el nucli 
bilobulat característic ni la presbncia de ctl~lules plurinucleades. La funció dels fagbcits 
de I'epididim esta limitada a eliminació d'esperrnatozoides, en els quals no s'han obser- 
vat morfologies aberrants. 
RESUMEN 
Este trabaio trata de la estructura, la ultraestructura y la función de 10s fagocitos 
presentes dn 10s conductos epididimarios de Dina lineata, sanguijuela de agua dulce, 
hermafrodita y proterándrica, de fecundación traumática hipodérmica. 
Las muestrk han sido fijadas en formol e incluidas en glicol metacrilat0 para su 
observación al microscopio bptico; y fijadas en liquido de Karnowsky, postfijadas en 
tetraóxido de osmio e incluidas en resina Spurr para su observación al microscopio 
electrónico de transmisión. 
Los fagocitos del epidídim0 son células libres mononucleadas y de función macro- 
fágica. Se encuentran regularmente entre 10s haces de espermatozoides. A diferencia de 
10s fagocitos libres de 10s sacos testiculares no se observa el núcleo bilobulada caracte- 
r í s t ic~ ni la presencia de células plurinucleadas. Su función está limitada a la elimina- 
ción de espermatozoides en 10s que, si bien no se han observado aberraciones morfoló- 
gicas, no puede descartarse la presencia de anomalias funcionales no detectables en un 
estudio morfológico. 
28 S. BONET Y M. MOLINAS 
ABSTRACT 
This paper describes the structure, ultrastructure and function of phagocyttes in epidi- 
dimary ducts of Dina lineata, a freshwater leech, proterandric and hermafrodite with 
traumatic hipoderma1 fertilization. 
The specimens have been fixed with formaldehide and included in glycol metacrilate 
for observation by optical microscopy; and fixed with Karnowsky solution, postfixed 
with osmium teraoxide and included in Spurr for observation by electron microscopy. 
Epididimary phagocytes are mononucleated cells actively immersed in macrophagic 
function. They are found mixed with sperm inside the ducts. In contrast with testicular 
phagocytes the characteristic bilobated nucleus and the binucleated cells are not obser- 
ved. The role of the macrophagic cells seems to be the phagocytosis o i  gametes in wich 
no morphological anomalies have been detected. 
Key words: Phagocytes, phagocytosis, ultrastructure, epididymis, spermatozoa, hirudinea, 
leeches. 
La presencia de fagocitos libres en el interior de 10s sacos testiculares de 
Dina lineata y su relación con el proceso de espermatogénesis y espermio- 
génesis han sido descritas por 10s autores en un trabajo anterior (Bonet y 
Molinas, 1985). La función principal atribuida a estas células es la elimina- 
ción del citóforo y de 10s restos celulares de la espermatogénesis, encargán- 
dose también de la fagocitosis de células germinales, probablemente inne- 
cesarias o funcionalmente defectuosas, en las que no se han observado 
anomalias morfológicas. 
Brumpt (1900), en su estudio sobre la reproducción de 10s hirudineos, 
describe junto con el contenido espermático de 10s conductos epididimarios 
unas células ameboides a las que denomina células instersticiales responsa- 
bles de procesos de fagocitosis. Muy posteriormente Damas (1968), en sus 
estudios en Glossiphonia complanata (Hirudinea, Rynchobdellae), cita tres 
tipos de células instersticiales en el conducto epididimario a las que atribuye 
la secreción de substancias mucoides neutras de carácter aglutinante e hi- 
dratante; el trabajo se 1imita.a 10s datos aportados por la microscopia óptica. 
En 10s oligoquetos, la presencia de células somáticas libres entre el 
esperma del llamado canal eyaculador ha sido citada por Richards (1981) en 
Sparganophyllus tamesis y por Block (1981) en Limnodrillus hoffmeistrei. 
Ambos autores coinciden en su actividad macrofiitica pero, mientras Ri- 
chards (1981) observa morfologias aberrantes en 10s productos germinales 
fagocitados, Block encuentra células de morfologia normal. 
En 10s conductos epididimarios de Dina lineata (Hirudinea, Erpobdelli- 
dae) se pueden observar células ameboides con capacidad fagocitaria cuya 
descripción se realiza en este trabajo. Las caracteristicas ultraestructurales 
de estas células y su relación con las células germinales del epidídim0 son 
FAGOCITOS EN LOS CONDUCTOS EPIDIDIMARIOS DE D. LINEATA 29 
interesantes para conocer su función, mas aún cuando pueden observarse 
diferencias morfológicas con respecto a 10s amebocitos testiculares de esta 
misma especie (Bonet y Molinas, 1985). 
Ejemplares de Dina lineata capturados en el rio Ter a su paso por Campro- 
dón (Girona) durante 10s meses de octubre a diciembre, es decir, con el 
aparato genital masculino maduro, fueron anestesiados en agua ,de Seltz. 
Para la microscopia Óptica, fragmentos de la región epididimaria, com- 
prendidos entre 10s segmentos XIX i XI, fueron fijados en una solución de 
formalina al 5% tamponada a pH 7,2 y, previa deshidratación en serie 
alcohólica, incluidos en glicol metacrilat0 (GMA) (Bonet y Molinas, 1983). 
Los cortes semifinos obtenidos fueron teñidos con diversas técnicas histoló- 
gicas e histoquimicas adaptadas al material de inclusión (Bonet y Huguet, 
1985). 
Para la microscopia electrónica, fragmentos del conducto epididimario 
fueron fijados en liquido de Karnowsky (Santander, 1968), postfijados con 
tetraóxido de osmio e incluidos en resina Spurr ERL. 4206 (Spurr, 1969). 
Los cortes ultrafinos fueron contrastados con acetat0 de urani10 y citrato de 
plomo (Reynolds, 1963), y observados en un HITACHI HV 12A del Servi- 
cio de Microscopia Electrónica de la Universidad Autónoma de Barcelona. 
OBSERVACIONES 
Dina lineata es una sanguijuela dulceacuicola, hermafrodita y proterándrica, 
que se reproduce por fecundación traumática hipodérmica mediante la in- 
yección del contenido de 10s espermatóforos en el tejido conjuntivo dérmico 
de la pared del cuerpo de la pareja. Su aparato genital masculino esta 
formado por la región testicular en la que se encuentran 10s sacos testicula- 
res y 10s conductos eferentes y deferentes; la región epididimaria formada 
por 10s dos conductos epididimarios; y la región atrial responsable de la 
síntesis y expulsión del espermatóforo. 
Los conductos epididimarios discurren con un recorrido helicoidal dex- 
trógiro a ambos lados de la cadena nerviosa, extendiéndose desde el metá- 
mero XIX al XI. Estan revestidos de un epitelio glandular con estereocilios 
y dotados de una vaina músculo-conectiva muy desarrollada. En su interior 
se almacena progresivamente el esperma procedente de sendos conductos 
deferentes hasta el momento de la formación de 10s espermatoforos durante 
el apareamiento. 
En la luz del conducto se acumulan 10s haces de espermatozoides, entre 
10s cuales se disgregan 10s granos de secreción liberados por las célu- 
las glandulares del epitelio, observándose además la presencia de células 
fagocitarias. 
30 S. BONET Y M. MOLINAS 
Microscopia óptica 
Los fagocitos epididimarios son células redondeadas o alargadas de unos 25 
por 6 micr6metros de diámetro, distribuidas de un modo bastante homogé- 
neo entre 10s haces de espermatozoides. 
Su núcleo es redondeado, de unos 5 micrómetros de diámetro, la cro- 
matina es fina y difusa, y el nucleolo, Único, toma una posición central o 
paracentral. 
El citoplasma ligeramente acidófilo, tiene un aspecto fibro-granuloso 
muy característic0 con algunas zonas vacuoladas de intensa basofilia. En 
ocasiones se observan zonas cianofilas que se corresponden con 10s nú.cleos 
de 10s espermatozoides fagocitados. 
Microscopia electrónica 
Los fagocitos epididimarios son células libres de función macrofágica muy 
activa cargadas de elementos gaméticos en distintos estadios de digestión 
enzimática. (Fig. 1) 
El núcleo, generalmente oval, puede presentar alguna lobulación estre- 
cha con una o más escotaduras de profundidad variable. La cromatina, 
Figura 1. Aspecto general de dos fagocitos epididimarios. El núcleo (N) 
presenta una cromatina granular, fina y homogéneamente distribuida, y 
un nucleolo redondo muy prominente. El citoplasma (C)  esta muy va- 
cuolizado y en 61 se encuentran elementos gaméticos en distintos estadios 
de digesti6n. (6000 X). 
FAGOCITOS EN LOS CONDUCTOS EPIDIDIMARIOS DE D. LINEATA 31 
Figura 2. Aspecto general del núcleo. Obsérvese la característica distri- 
bución homogénea de la cromatina (Cr). El núcleo puede presentar 
alguna lobulación (Lo) inconstante de tamaño muy variable. (12000 X). 
finamente granular, esta homogénamente distribuida por todo el nucleoplas- 
ma, y la heterocromatina, muy poc0 abundante, aparece formando peque- 
ños gránulos dispersos o asociados a la envoltura nuclear y al nucleolo. El 
nucleolo, redondo y muy electrodenso, alcanza un diámetro de unos 1,5 
micrómetros y ocupa una posición paracentral. (Fig. 2). 
El citoplasma esta muy vacuolizado y emite gran cantidad de pesudópo- 
dos filiformes dirigidos a englobar elementos gaméticos circundantes. En 61 
abundan vesiculas del reticulo endoplasmatico rugoso, ribosomas libres, 
dictiosomas, mitocondrias bacilares y filamentosas y, especialmente, todos 
10s orgánulos directamente relacionados con la función fagocitica: lisosomas 
primarios, heterofagosomas, lisosomas secundarios y cuerpos residuales. En 
el interior de las vesículas fagocíticas pueden verse abundantes espermato- 
zoides en 10s que no se han observado morfologias aberrantes. (Figs. 3, 4 y 
5) 
Hemos llamado epidídim0 a la porción del tracto genital masculino que se 
extiende desde 10s conductos deferentes al atrio. Esta misma región ha 
recibido otras denominaciones: para Brumpt (1900) y Damas (1968) es el 
canal eyaculador, Van Dame (1974) le da el nombre de vesícula seminal, 
32 S. BONET Y M. MOLINAS 
mientras Mann (1962) 10 denomina epidídimo. La presencia de un epiteli0 
secretor y de una vaina muscular potente nos han inclinado a adoptar esta 
última denominación. 
Las observaciones realizadas confirman el caracter fagocitari0 de las 
células libres del epididimo tal como deducia Brumpt (1900) en sus traba- 
jos. Se trata de células macrofagicas muy activas, cargadas de elementos 
gaméticos en el interior de sus vesiculas fagociticas, cuya abundancia y 
homogeneidad de distribución hacen suponer que realizan su función de 
manera regular. 
El espermatozoide de Dina lineata es un gameto altamente modificado 
y extraordinariamente adaptado al peculiar modo de fecundación de esta 
especie: la fecundación traumatica hipodérmica en la que 10s espermatozoi- 
des, inyectados en la dermis por via subcutánea, deben atravesar 10s tejidos 
para alcanzar las células femeninas en el ovario. Estos espermatozoides 
seran almacenados en el epididimo desde el momento en que tiene lugar la 
espermatogénesis hasta la formación del espermatóforo, un periodo supe- 
rior a 10s tres meses. El conducto epididimario debe garantizar la supervi- 
vencia de estas células masculinas tan sumamente diferenciadas y a esta 
finalidad obedece la abundante secreción de las glándulas epiteliales. 
Figura 3. Citoplasma perinuclear del fagocito en el que abundan las 
mitocondrias (M) y las cisternas del reticulo ergastoplásrnico. (14000 X). 
FAGOCITOS EN LOS CONDUCTOS EPIDIDIMARIOS DE D. LINEA TA 33 
Figura 4. Citoplasma del fagocito. Se trata de un citoplasma denso, 
debido a la abundante población ribosómica y de vesiculas del reticulo 
endoplasmático rugoso, en el que pueden hallarse mitocondrias bacilares 
y filamentosas, lisosomas (L), vacuolas heterofagicas (V) y cuerpos resi- 
duales (Cr). (14000 X). 
Figura 5. Citoplasma de un fagocito epididimario en el que pueden 
hallarse elementos gaméticos capturados. La microfotografia muestra, en 
sección transversal, 10s niveles axonemático (Ax) y nuclear (N) de 10s 
espermatozoides fagocitados. (16000 X). 
34 S. BONET Y M. MOLINAS 
Los espermatozoides englobados por 10s fagocitos del epididimo no 
presentan anomalias estructurales, al igual que ocurria con 10s elementos 
germinales capturados por 10s macrófagos testiculares (Bonet y Molinas, 
1985). Sin embargo, la función mas razonable que se puede atribuir a estos 
fagocitos es la eliminación de 10s gametos defectuosos que se producen 
durante el largo periodo de almacenamiento y cuya disfunción no se detecta 
morfológicamente. 
Al comparar la morfologia de 10s fagocitos del epididimo con las células 
macrofagicas libres de 10s sacos testiculares se observan algunas diferencias. 
El núcleo bilobulado característic0 del fagocito testicular, tan frecuente en 
10s macrófagos, no aparece, al menos de modo especifico y constante. El 
núcleo es oval y, s610 ocasionalmente, presenta alguna lobulación reversible 
de dimensiones variables. Tampoco se observan células plurinucleadas pa- 
recidas a las células gigantes que pueden encontrarse en los sacos testicula- 
res. Estas observaciones confirman el polimorfismo que caracteriza al ma- 
crófago que, por otra parte, es una célula bien definida por su función y por 
10s organulos caracteristicos de su citoplasma. 
Bibliografia 
BLOCK, E.M.; MATHEWS, J y GOODNIGHT, C.L.V. (1981). Spermiogenesis in Lim- 
nodrillus hoffmeistrei (Oligochaeta, Tubificidae): the role of phagocytes in the 
sperm sac. Int. J .  Inv. Pathol. 42: 8-19. 
BONET, S y MOLINAS, M. (1983). Utilitat del Glicol metacrilat en l'obtenció de talls 
semifins per a histologia. Ann. Sec. Cien. Col. Univ. Girona (UAB). 9: 21-29. 
BONET, S. y HUGUET, G. (1985). Tkcniques habituals de coloració per a seccions 
semifines de material inclds en glicol metacrilat. Scientia gerundensis 10: 23-32. 
BONET, S y MOLINAS, M. (1985). Estudio utraestructural del fagocito testicular de 
Dina lineata (Hirudinea, Erpobdellidae). Scientia gerundesis 11: 29-37. 
BRUMPT, E. (1900). Reproduction des Hirudinées. Mem. Soc. Zool. Fr. 13: 286-430. 
DAMAS, D. (1968). Histochimie des canaux éjaculateurs de Glossiphonia complana- 
tu (Hirudinée, Rhyncobdelle). Ann. Histochim. 13: 111-122. 
MANN, K.H. (1962). Leeches (Hirudinea): their structure, physiology, ecology and 
embrygology. Ed. Pergamon Press. 
REYNOLDS, E.S. (1963): The use of lead citrate at high pH as an electron opaque 
stain in electron microscopy. J .  Cell. Biol. 17: 208-216. 
RICHARDS, .; FLEMING, T.P. y JAMIESON, B.G.M. (1981). Aberrant spermatozoa 
and spermatids and observations of phagocytosis in Sparganophyllus tamensis 
(Sparganophillidae, Oligochaeta): Ultrastructura1 study. Int. J. Inv. Reprod. 4: 
181-191. 
SANTANDER, G. (1968). Técnicas de Microscopis Electrónica. Ed. Aguilar. 
SPURR, A.R. (1969). A low viscosoty epoxi resin embedding medium for electron 
microscopy. J. Ultras. Res. 26: 31-43. 
VAN DAMME, N. (1974). L'organogénése de I'appareil génital chez la sangsue Er- 
pobdella octoculata L. (Hirudinée, Pharyngobdelle). Arch. Biol. (Bruxelles) 85: 
373-397. 


Fagocitos en los conductos epididimarios de Dina lineata (Hirudinea, Erpobdellidae)

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