Development of methodology for measurement of hyaluronic acid in biological fluids: application in prostatic diseases

Abstract

O acido hialuronico (AH) e um glicosaminoglicano presente na matriz extracelular. O acido hialuronico tem papel relevante em diversas patologias como doencas do flgado, doencas articulares, bem como doencas especificas como esclerose sistemica, mielofibrose, mixedema pre-tibial, uremia e cancer, entre outras. Isso nos levou a desenvolver um metodo para sua dosagem. Neste estudo comparamos amostras de urina e soro de pacientes com hiperplasia prostatica benigna (HPB) e com cancer de prostata, usando um novo metodo fluorimetrico de dosagem, ultrasensivel. Metodo: As placas foram pre-incubadas com proteina de ligacao (PL,) preparada a partir de cartilagem de septo nasal bovino e depois incubadas, respectivamente, com amostras de AH presente em diversos fluidos biologicos (soro e urina), PL biotinilada e estreptavidina marcada com europio, seguida de medida da fluorescencia. Foram coletadas amostras de 25 pacientes com HPB e 8 com cancer de prostata, que foram admitidos para tratamento. Urina e soro foram coletadas na manha antes da cirurgia, preparados e armazenados -20ºC ate serem testados. Resultados: O metodo e bastante especifico para o AH, mesmo na presenca de condroitim, dermatam, heparam sulfato, heparina ou mesmo proteinas contaminantes. E possivel quantificar AH entre 0,24 e 500 mg/L. A dosagem de acido hialuronico nos mostrou que houve diferenca estatisticamente significante entre pacientes com cancer de prostata e com HPBBV UNIFESP: Teses e dissertaçõe