The high tolerance in oxidative stress induced by H2O2 in transgenic plants, capable to overexpress the gene APUMP1: isolation and characterization the maize uncouplin protein(ZmPUMP)

Abstract

Inicialmente descrita no tecido adiposo marrom de mamiferos e posteriormente em outros tecidos, a proteina desacopladora de mamiferos (UCPI) permite a dissipacao do gradiente de protons, criado pelas bombas redox da cadeia respiratoria, gerando calor. A descoberta de uma proteina desacopladora em plantas (PUMP), cujas caracteristicas funcionais e estruturais assemelham-se as UCPs, abriu novas possibilidades para explicar os mecanismos envolvidos no processo de desacoplamento da fosforilacao oxidativa em plantas e protecao contra estresse oxidativo. A obtencao em nosso laboratorio de um clone de cDNA codificando uma PUMP em Arabidopsis thaliana (AtPUMPI), planta dicotiledonea, motivou este trabalho, tendo como principal objetivo investigar o papel fisiologico desta proteina em promover uma reducao da formacao de especies reativas de oxigenio em mitocondrias de plantas. Para tal foram utilizadas plantas transgenicas capazes de superexpressar de forma constitutiva a referida proteina. Analises por northern blot demonstraram a existencia de plantas com niveis altissimos de expressao do gene AtPUMPl (linhagem P07). O correto direcionamento da proteina AtPUMPI, do citoplasma para as mitocondrias, foi confirmado por westem blot empregando-se anticorpo policlonal produzido em nosso laboratorio, direcionado contra a AtPUMP 1 recombinante, expressa em Escherichia coli. O presente estudo demonstrou que plantas que superexpressam o gene AtPUMPl tornaram-se mais tolerantes as condicoes de estresse oxidativo induzido pelo peroxido de hidrogenio exogeno, quando comparadas com plantas selvagens, nao transformadas...(au)BV UNIFESP: Teses e dissertaçõe