Kininogenae activiy by he major cysteinyl proteinase cruzipain from Trypanosoma cruzi

Abstract

Estudamos a liberacao de Lys-Bk pelas cisteino peptidases de Trypanosoma cruzi, cruzipaina e sua forma recombinante, cruzipaina 2, utilizando um substrato sintetico com sequencia analoga aquela hidrolisada no cininogenio humano, contendo as duas ligacoes que no cininogenio sao susceptiveis a clivagem para a liberacao de Lys-Bk. O estudo da simultaneidade da hidrolise das ligacoes Met-Lys e Arg-Ser, foi investigado utilizando-se um fragmento do cininogenio humano sintetizado em nosso laboratorio, contendo a sequencia completa da calidina e pelo menos 3 residuos adicionais de cada lado ( N- e C-terminal). Utilizamos tambem cininogenio humano e plasma humano como fonte de cininogenio e testamos a atividade cininogenasica em ileo isolado de cobaia. Visando estudar a especificidade da cruzipaina, utilizamos substratos fluorescentes derivados da biblioteca de peptideos. A atividade foi comparada com catepsina L. A cruzipaina foi detectada como sendo uma nova cininogenase e os ensaios de especificidade mostraram diferencas relevantes sobre sua especificidade em comparacao com a catepsina L humanaBV UNIFESP: Teses e dissertaçõe