Instituto de Medicina Tropical de São PauloUniversidade Federal de São Paulo (UNIFESP)UNIFESPSciEL

Carneiro, Celia Regina Whitaker

Nakhle, Maria Cristina

Revista do Instituto de Medicina Tropical de São Paulo

Carneiro, Celia Regina Whitaker [UNIFESP]

Repositório Institucional UNIFESP

Services on DemandArticleArticle in xml formatArticle referencesHow to cite this articleCurriculum ScienTIAutomatic translationSend this article by e­mailIndicatorsCited by SciELOAccess statisticsRelated linksShareMoreMorePermalinkRevista do Instituto de Medicina Tropical de SãoPauloOn­line version ISSN 1678­9946Rev. Inst. Med. trop. S. Paulo vol. 39 no. 6 São Paulo Nov./Dec. 1997http://dx.doi.org/10.1590/S0036­46651997000600008 BRIEF COMMUNICATIONSchistosoma mansoni: DESCRIPTION OF A POTENTIALLYUSEFUL MONOCLONAL ANTIBODY THAT RECOGNIZESSOLUBLE EGG ANTIGEN (SEA) Maria Cristina NAKHLE(1) & Célia Regina Whitaker CARNEIRO(2)  KEYWORDS:  Schistosoma  mansoni;  Monoclonal  antibodies;  Soluble  eggantigen (SEA); Carbohydrate epitopes.  Many  research  groups  have  obtained  monoclonal  antibodies  (MAbs)  thatreact with SEA derived from Schistosoma mansoni. Most of them recognizecarbohydrate epitopes  that are shared by different developmental stages of  the parasite5, 6, 9. Some of  thesereagents  were  shown  to  be  useful  to  quantitate  egg  circulating  antigens  and  can  be  considered  a  goodassessment  of  infected  individuals​  egg  load.  As  a  consequence,  these  assays  are  a  potential  diagnosticparameter for morbidity7. Also, they can be used to study the fate of the antigen in the host1.One of us have previously reported the production of an IgM MAb (3C6) that reacted with schistosomula, eggsand the inner layer of the gut from adult worms of S. mansoni3. It has been raised by immortalization of spleencells  of  a  seven­week­infected  mouse.  As  a  consequence,  it  represents  an  antibody  produced  under  normalcircumstances of infection, and the recognized epitope deserves investigation. The hybridoma 3C6 was recentlyre­cloned by limiting dilution generating a stable cell line called 3C6H6. Gel filtration­purified MAb was obtainedfrom ascitic fluid and used in all experiments.Immunoperoxidase reactions over liver tissue sections of infected hamsters showed a strong reactivity with eggantigens both inside and outside the egg shell (Fig. 1). When tested on adult worm sections MAb 3C6H6 bound tothe  digestive  tract  and  tegument  as  previously  shown3.  ELISAs  using  purified  SEA2  and  adult  worm  antigen(AWA)4 showed a saturable reaction with SEA, and almost no recognition of AWA (Fig. 2).      Fig.  1  ­  Immunoperoxidase  of  MAb  3C6H6  (5  µg/ml)  on  an  infected  hamster  liver  tissue  section  showingrecognition  of  SEA  diffusing  from  the  egg  shell.  The  aecond  biotinylated  antibody  as  well  as  avidin­biotin­peroxidase  complex were  from  Vector  Labs.  (Vecstatin  ABC  kit).  Diaminobenzydine  diluted  in  PBS  containing0.005% H2O2 (v/v) was used as substrate, and hematoxylin as counterstain (400x magnification) Fig. 2 ­ ELISA of MAb 3C6H6 tested in serial dilutions on solid phase coated with SEA (10 µg/ml)(t) and AWA (10µg/ml)(  ).  5mM  ()  and  20 mM  (x)  NalO4­  treated  SEA  were  also  tested.  Second  antibody  was  a  goat  anti­mouse  IgM  from  Sigma,  and  the  substrate  employed  was  orto­phenylenediamine  in  citrate­phosphate  buffercontaining 0.03% H2O2 (v/v). In order to partially characterize the chemical nature of the recognized epitope, SEA was treated by the sugaroxidant  sodium  periodate  in  different  concentrations,  according  to  WOODWARD,  19858.  Figure  3  depicts  animmunoblotting assay of MAb 3C6H6 recognition of SEA transferred to nitrocellulose sheets and treated or notwith NaIO4. These results were confirmed in ELISA, as shown in figure 2. Fig. 3 ­ Immunoblotting of MAb 3C6H6 (10µg/ml) on SEA (10µg/slot) submitted to SDS­PAGE in a 10% gel usingreducing conditions and transferred to nitrocellulose membrane. Before incubation with MAb 3C6H6, membranestrips were  treated or  not  (lane 1) with NalO4  using  the  following  concentrations:  5 mM  (lane  2)  and 20 mM(lane  3).  The  second  antibody  and  the  substrate  employed  were  goat  antimouse  IgM  alkaline­phosphataseconjugate and BCIP/NBT (from Sigma), respectively. Taken together, these data demonstrate that the epitope recognized by MAb 3C6H6 presents a glycidic nature,and  can  be  similar  to  one  of  the  already  described  MAbs5,  6,  9.  This  reagent  shows  its  usefulness  in  therecognition  of  antigen  deposits  trapped  in  glomeruli  of  infected  experimental  animals  (DE  BRITO,  T.  et  al.;manuscript  in  preparation).  Also,  its  previously  shown  reactivity  with  adult  worms  digestive  tract  andschistosomula opens the possibility of studies on protection immunity and/or its potential utilization on detectionof circulating antigens. REFERENCES1. BOGERS, J. J. P. M.; NIBBELING, H. A. M.; DEELDER, A. M. & VAN MARCK, E. A. E. – Immunohistochemicaland ultrastructural  localization  of Schistosoma mansoni  soluble  egg  antigens  processed  by  the  infected  hosts.Parasitology, 112: 537­543, 1996.         [ Links ]2.  BOROS, D.  I.  & WARREN,  K.  S.  – Delayed  hypersensitivity­type  granuloma  formation  and  dermal  reactioninduced and elicited by a soluble factor isolated from Schistosoma mansoni eggs. J. exp. Med., 132: 488­507,1970.         [ Links ]3.  CARNEIRO,  C.  R.  W.  &  LOPES,  J.  D.  –  Surface  antigen  detected  by  a  Schistosoma  mansoni  monoclonalantibody in worm extracts and kidney deposits of  infected mice and hamsters. Infect. Immun., 52:  230­235,1986.         [ Links ]4. DEELDER, A. M.; KLAPPE, H. T. M.; VAN DER AARDWEG, G. J. M. & VAN MEERBEKE, E. H. E. M. – Schistosomamansoni:  demonstration  of  two  circulating  antigens  in  infected  hamsters. Exp.  Parasit.,  40:  189­197,  1976.        [ Links ]5.  KÖSTER,  B.  &  STRAND,  M.  – Schistosoma  mansoni:  immunolocalization  of  two  different  fucose­containingcarbohydrate epitopes. Parasitology, 108: 433­446, 1994.         [ Links ]6. NOUR EL DIN, M. S.; KORNELIS, D.; VAN ZEYL, R. J. M. & DEELDER, A. M. – Immunological characterizationof two monoclonal antibodies reactive with repetitive carbohydrate epitopes of circulating Schistosoma mansoniegg antigen. Amer. J. trop. Med. Hyg., 50: 487­498, 1994.         [ Links ]7.  NOUR  EL  DIN,  M.  S.  A.;  NIBBELING,  R.;  ROTMANS,  P.  et  al.  –  Quantitative  determination  of  circulatingsoluble egg antigen in urine and serum of Schistosoma mansoni­infected individuals using a combined two­siteenzyme­linked immunosorbent assay. Amer. J. trop. Med. Hyg., 50: 585­594, 1994.         [ Links ]8. WOODWARD, M. P.; YOUNG, W. W. & BLOODGOOD, R. A. – Detection of monoclonal antibodies specific  forcarbohydrate epitopes using periodate oxidation. J. immunol. Meth., 78: 143­153, 1985.         [ Links ]9.  YI,  X.;  OMER­ALI,  P.;  KELLY,  C.;  SIMPSON,  A.  J.  G.  &  SMITHERS,  S.  R.  –  IgM  antibodies  recognizingcarbohydrate epitopes shared between schistosomula and miracidia of Schistosoma mansoni that block in vitrokilling. J. Immunol., 137: 3946­3954, 1986.         [ Links ]  Recebido para publicação em 04/09/1997Aceito para publicação em 07/11/1997  (1) Instituto de Medicina Tropical de São Paulo, São Paulo, SP, Brasil(2)  Departamento  de  Microbiologia,  Imunologia  e  Parasitologia  da  Universidade  Federal  de  São  Paulo/EscolaPaulista de Medicina (UNIFESP/EPM), São Paulo, SP, Brasil.Correspondence  to:  Célia  Regina  Whitaker  Carneiro,  Universidade  Federal  de  São  Paulo  (UNIFESP/EPM),Disciplina de Imunologia. Rua Botucatu, 862, 4º andar, 04023­900 São Paulo, SP, Brasil. Phone: 5511­549­6073.Fax: 5511­572­3328. e­mail: crwcarneiro.dmip@epm.br Av. Dr. Enéas de Carvalho Aguiar, 47005403­000 ­ São Paulo ­ SP ­ BrazilTel. +55 11 3061­7005revimtsp@usp.br

Schistosoma mansoni: Description of a Potentially Useful Monoclonal Antibody that Recognizes Soluble Egg Antigen (SEA)

Maria Cristina NAKHLE

Célia Regina Whitaker CARNEIRO

Directory of Open Access Journals

NAKHLE, Maria Cristina

CARNEIRO, Célia Regina Whitaker

Scientific Electronic Library Online - Brazil

http://doaj.org/search?source=%7B%22query%22%3A%7B%22bool%22%3A%7B%22must%22%3A%5B%7B%22term%22%3A%7B%22id%22%3A%22704d2f1a4c8b43d09c0e2bb05a0f8a4a%22%7D%7D%5D%7D%7D%7D

Schistosoma mansoni: Description of a Potentially Useful Monoclonal Antibody that Recognizes Soluble Egg Antigen (SEA)

Abstract

Similar works

Full text

Available Versions

Repositório Institucional UNIFESP

Directory of Open Access Journals

Scientific Electronic Library Online - Brazil