太田, 忠信

Osaka City University Repository

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氏名 太田忠信
学位の種類博 士(医学)
学位記番号
学位授与年月日
学位授与の要件
学位論文名
論文審査委員
第 3844号
平成12年 9月29日
学位規則第4条第 2項該当者
A Practical Quick Staining Method Using Hydrochloric Acid-fast 
Metachromatic Dye for Megakaryocytes 
(酸抵抗性異染性色棄を用いた巨核球の実用的迅速染色法)
主査教授巽 典之 副主査教授北川誠一 l 
副主査教授 西沢良記 | 
論文内容の要旨
【目的】 1995年 kassにより巨核球の特殊染色法 (VPM染色)が考案されたが、その染色件が不安定であっ
たことと非特異的染色が生じ易いことから、臨床険査室ではほとんど利用されていなかった。そこで我々
は本染色法に改良を加え巨核球を特異的かつ安定して染色されるようにした。次いでその有用件を骨髄異
形成症候群、造侃器悪性疾患等のほか、巨核芽球性白血病細胞由来の細胞株 (Mo7eとUT-7)や造血幹細胞
にD34陽性細胞)で検討した。
[h"?去】 VPM染色の緩衝液条件を最適化し、ついで骨髄標本および培養細胞に対する至適染色法を開発
した。正常対照として1例、造血器疾患56例と牌種による二次性血小板減少症2f9IJの計6919IJのスメア標本
を用い巨核時を染色した。培長細胞は、 Mo7eでは20%FCS及び5ng/ml GM-CSFを含むRPMI1640液で、 UT-7
では20%FCS及び5ng/ml TPOを含むIMOM液で培養したものを用いた。造血幹細胞では化学療法後の回復期
の患者からPenwallCS 3000 Plus (Baxter)を用いてapheresisしimmuno-magneticmethodによりC034陽性
細胞を単離精製しlO%FCS及び 5ng/m 1 GM-CSFを含むRPMI1640液で、そのまま又はさらにサイトカイ
ン (5ng/ml，IL-3， SCF， TPO)で培養した7日目の培養細胞を染色に用いた.
【結果】 ( L ) VPM色素を原法の蒸留水ではなく、 pH6.4リン酸緩衝液で溶解したVPM色素溶液の方が原
法より鮮やかで安定した染色性が得られた。(2 )骨髄異形成症候群 (MDS)症例においてVPM染色変法の
染色性及び形態異常の分布をFeinendegen分類を参照に調べた。正常に比して幼若な形態TypeJ H JIへ
シフトしており小林らの報告と同じ傾向が認められた。(3 )急性白血病痕例(L1， L2， L3， MO. MI. M2， 
M3， M5， M6， M7)ではM7以外の白血病細胞は染まらなかった。(4 )巨核芽ー 球s性白血病細胞由来株Mo7e、
UT-7とも本染色法により薄くrose-pinkに染色された。(5 ) C034陽性細胞をIL-3，SCF. TPOを添加し
て巨核球へ分化を促したところ、 C04lb抗原陽性率は増加したが、いずれの培養細胞も染まらなかった。
【結論】染色条件を最適化することで高コントラストで安定した染色性が得られた。急性巨核芽性白血病
症例や巨核芽球性白血病細胞株でその有用性が証明された。本染色法は簡便かつ知.時間(1時間以内)で
でき、これまでM7などの診断においてギムザ法では観察に技術的困難さがあったが、それらの簡易診断法
としての実用性が非常に高いと判断された。さらに幹細胞 (C034陽性細胞)の巨核球様分化培養細胞で染
まらなかったものの、巨核芳球性白血病.細胞由来株では染色されたことから、本染色法が細胞分化の研究
にも応用できることが不された。
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論文審査の結果の要旨
巨核球は多倍数体核を有し細胞径が大きく識別し易いと考えられている。しかし臨床検査玄で分析する
標本は病的試料であり、巨核球は極めて多数の細胞に埋もれているだけでなく、分布は均一ではない。さ
らに病的細胞は細胞径・形態・染色性において非定型的である。本論文は、巨核球を特異的・選択的に染
色する方法を開発しその臨床的有用性を検討したものである。本染色の原法はKassの提唱したVPM染色
であるが、染色結果の不安定性が問題であり臨床検査の現場では実用化されていなかった。本論文では
VPM色素を各種の緩衝液で溶解し検討をかさね、リン融緩衝液(至適条件 pIl6.4.lI1S(O.067)mol/lリン
酸二水素ナトリウム)で溶解し、これで染色(至適染色時間 5分)することで染色安定性を確保しただけ
でなくコントラストをも飛躍的に向上させている。そして本染色法を正常骨髄試料、 FAB分類でM7(急
性戸核芽球性白血病)症例を含む各種造血器扶患59例の試料のほか、 2種類の倍畳細胞株に対して検討し
評価した。方法対照は、解析に時間がかかるロマノフスキー法である。その結果、正常骨髄標本において
他の骨髄細胞は染色されず、巨核球のみを選択的に鮮やかに染め出し、さらに病的巨核球の出現する骨髄
異形成症候群 (MOS)症例において検討し本染色法により巨核球の迅速な同定評価が可能であることが
示された。急J性白血病症例(1.1， L2. 1.3. MO. Ml， M2. M3， M5， M6， M7)では、 M71J.例のみ染色され、そ
れ以外の白血病細胞は染まらなかったこと、また巨核芽球性白血病細胞由来の細胞株Mo7e、tiT-7とも本染
色法によりrose-pinkに染色されたことよりM7などの診断においてギムザ法では鑑別に技術的困難さが
あったが、それらの診断法としての実用性が非常に高いと判断された。 CD34陽性細胞を用いた実験ではサ
イトカインで同核球への分化を促したところ、 t3'差経過とともに形態的に巨核球様を示しCD41b抗原陽
件半は贈加したが、いずれの培養細胞も染まらなかったなどの成績がえられた。
以上の研究は、本染色法が巨核球の特殊染色法としての有肘性を不し、白血病鑑別診断やド核球系細胞
分化の研究に有用であることが見出されたといえる。したがって著者は博士(医学)の学位を授与される
に値するものと判断された。
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酸抵抗性異染性色素を用いた巨核球の実用的迅速染色法

http://dlisv03.media.osaka-cu.ac.jp/infolib/user_contents/youshi/3844.pdf

酸抵抗性異染性色素を用いた巨核球の実用的迅速染色法

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