林, かおる

Osaka City University Repository

氏名
学位の種類
学的記番号
学位授与年月円
学位授与の要件
学位論文名
論文審査委員
[目的]
林 かおる
博士(医学〉
第3435号
平成10年3月21日
学位規則第4条第l項該当者
亜急性硬化性全脳炎(subacutesclerosing panencephalitis: SSPE) 
ウイルス大阪 1株の分離とその性状
主査教授小倉 寄 副土世教授一色 玄
副主査教怪矢野郁也
論文内容の要旨
亜急性硬化性全脳炎(SSPE)は麻疹ウイルス変異株が脳細胞に持続感染している遅発性ワイルス感染症
であるc現在までに10株足らずのSSPEウイルスが分離されているが，そのうち遺伝子レベルまで解析が
なされた株は数株にすぎない。この研究において，著者は，新たに画像診断による病変部位の進展を参考
に， SSPE剖検脳より目本で6株固となる大阪l株の分離に成功しこのワイルス株の性状の解析を試み
Tこ。
[材料と方法]
1 )症例は25歳の女性で 1議時に麻疹羅患照があり. 17歳時にSSPEを発症し. 8年後に死亡した。 1弱者1
検時に採取した前頭葉，後頭葉，脳幹部組織由来の脳細胞とVero細胞， TIG-l細胞， B95a細胞との混合
培養によりウイルスを分離した。
2)赤血球吸着試験はアフリカミドりザル赤血球浮遊液を添加することにより行った。
3)感染院遊離ワイルス産生量はシンシチウムフォーカス形成により測定した。
Ij)ウイルス特異蛋白の検出にはおs-メチオニン標識による放射免疫沈降法とSDS-PAGE法を用いた。
5) ~遺伝子の塩基配列はボリ (A)'RNAをもとにしたRT-PCR法とダイレクトシークエンス法で決定し
Tニ。
6)ウイルス特異的mRNAの検出はノーザンプロットハイプリダイゼーション法により行った。
7) 1¥1 monocistronic mRNAの有無の確認には，プライマーエクステンション法を用いた。
l結果]
1) Vero細胞で前頭葉および後頭葉からウイルスCFr/VおよびOc/V)が.TIG-l細胞で・前頭葉CFr/l1)か
ら分離され.SSPEウイルス大阪l株と命名した。以下の解析にはFr/VとOc/Vを用いた。
2) Fr!V. Oc/Vウイルスともに赤血球吸着反応は陰性であ勺た。
3)両ワイルス感染細胞からの感染性遊離ワイルス産生は極めて低かった。
4)患者血清および髄披中の抗M抗体は選択的に少なかった。大阪l株感染細胞内lこM蛋白は検出されな
かった。大阪l株感染細胞と患者の血清，髄液との反応でも.M蛋白のみが検出されなかった。
5)両ヴイルスのM遺伝子の塩基配列に差はなく，翻訳の開始コドンおよび終止コドンは保存され，途巾
に新たな終止コドンも生じていなかった。
6)両ウイルスともにMのmunocistronicmHNA. N-P. M-FのbicistronicmRNAは検出されず，か
わりにP-Mbicistrunic mH.l¥Aが大量に転'与されていた。
一-(};::・3._..)I 
7)プライマーエクステンション法によっても1¥1monocistronic mRNAは検出されなかった。
[結論]
SSPEウイルス大阪1株は感染性遊離ウイルスを産生しない欠損型のウイルスで，ウイルスRNAボリメ
ラーゼがP-Mjunctionでrcad-throughする結果， M monocistronic mRNAが転写されず.M蛋白の
合成ができないと考えられた。
論文審査の結果の要旨
E急性硬化性全脳炎(SSPE)は麻疹ウイルス変異株が脳細胞に持続感染した遅発性ウイルス感染症であ
る。本研究は.SSPE患者剖検脳より日本で6株自となる大阪1株の分離に成功し，このウイルス株の性
状を分子レベルで解析したものである。
SSPE剖検脳の前頭葉と後頭葉から.Vero細胞を用いて大阪1株(Fr/Vおよび‘Oc/V)が分離された。
大阪1株のサル赤血球吸着能は陰性で，感染性細胞遊離ウイルス産生も極めて少なかった。放射免疫沈降
法とSDS-PAGE法を用いたウイルス特異蛋白の解析では，患者の抗M抗体産生は選択的に少なく，大阪
l株感染細胞内にM蛋白は検出されなかった。そこで変異が予想されたM遺伝子の塩基配列がRT-PCR
法とダイレクトシークエンス法で決定されたが.Fr/VとOc/V聞で差はなし翻訳の開始および終止コ
ドンは保存されていた。次に，ノーザンプロットハイブリダイゼーション法によるウイルス特異的mRNA
の解析において， Mのmonocistror】icmRNA. N-P. M-FのbicistronicmRNAは検出されず. P-:vI 
bicistronic mRNAが大量に転写されていた。さらにプライマーエクステンション法でMmonocistronic 
mRNAの有無が確認されたが，検出されなかった。
以上より.SSPEウイルス大阪1株は感染性遊離ウイルスを産生しない欠損型のウイルスで， ウイルス
R:NAポリメラーゼがP-Mjunctionでread-throughする結果， M monocistronic mRNAが転写されず，
M蛋白の合成ができないと考えられた。
本論文は世界的に数少ないSSPEウイルスの欠損性状を分子レベルで明らかにしたものであり， この研
究成果はSSPE発症機構の解明に一定の寄与をなすものとして博士(医学)の学位を授与されるに値する
と判定した。
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亜急性硬化性全脳炎 (subacute sclerosing panencephalitis:SPPE) ウイルス大阪1株の分離とその性状

http://dlisv03.media.osaka-cu.ac.jp/infolib/user_contents/youshi/3435.pdf

亜急性硬化性全脳炎 (subacute sclerosing panencephalitis:SPPE) ウイルス大阪1株の分離とその性状

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