加藤, 実

Osaka City University Repository

 
 
氏     名   加藤 実 
学 位 の 種 類    博士（ 医学 ） 
学 位 記 番 号    第 5896 号 
学位授与年月日   平成 25年 3月 21日  
学位授与の要件   学位規則第４条第 1項  
学 位 論 文 名    DDX39 Acts As A Suppressor Of Invasion For Bladder Cancer 
 (DDX39は膀胱癌の浸潤抑制因子として作用する) 
 
論文審査委員    主 査 仲谷 達也 教授   副 査 若狹 研一 教授  
          副 査 三浦 克之 教授 
 
 
論 文 内 容 の 要 旨 
 
【目的】 
プロテオミクスを利用した膀胱癌の進行を予測できるマーカーの同定 
【対象】 
プロテオミクスでは 6例の膀胱癌部組織と非癌部組織の凍結標本を対象とし、免疫組織染色では
303例の膀胱癌ホルマリン固定パラフィン包埋組織を対象とした。 
【方法】 
凍結標本から蛋白を抽出し、LC-MS/MSによる比較定量解析を行った。6例中 4例以上の癌部組織に
おいて非癌部に比較して過剰発現が認められた蛋白をマーカー候補として選定し、免疫組織染色によ
ってそれらの膀胱癌組織における発現を確認した。その中で、癌組織における発現と臨床病理学的因
子との関連が認められた、RNA ヘリカーゼの 1つである DEAD (Asp-Glu-Ala-Asp) box polypeptide 39 
(DDX39)について、経尿道的膀胱腫瘍切除術を施行された 105例の患者を対象とし、進行予測因子と
しての有用性を評価した。さらに、膀胱癌細胞株を用いて siRNAによる遺伝子発現ノックダウンを行
い、DDX39の機能解析を行った。 
【結果】 
DDX39高発現の腫瘍の割合は、深達度別にpTa: 68.6%、pT1: 43.5%、pTis: 20.0%、 ≧pT2: 5.3%、
異型度別では G1: 65.2%、G2: 60.7%、G3: 19.6%であり、DDX39の発現が膀胱癌の病理学的深達度お
よび組織学的異型度と逆相関することが明らかとなった。また、DDX39低発現の腫瘍を有する患者は
DDX39高発現の腫瘍を有する患者に比較して無増悪生存期間が有意に短いことが示された (HR = 
7.485, p = 0.0083)。 さらに、膀胱癌細胞 T24におけるDDX39の遺伝子発現をノックダウンすること
で細胞浸潤能の亢進が認められた。 
【結論】 
DDX39 は膀胱癌の浸潤に抑制的に作用しており、その発現低下は膀胱癌の浸潤予測因子であること
が示唆された。 
 
論 文 審 査 の 結 果 の 要 旨 
 
膀胱癌は本邦における泌尿器悪性腫瘍による死亡原因としては前立腺癌に次いで多く、とくに筋層
浸潤性膀胱癌は根治的膀胱全摘除術を施行しても、術後 2年以内に約半数が遠隔転移をきたし、予後
不良である。一方、筋層非浸潤性膀胱癌の約 10%程度が筋層浸潤性膀胱癌に進行するとされ、その早
期発見が非常に重要となっている。しかし、膀胱癌の浸潤過程の背景に存在する分子およびその機序
の解明に関しては未だ不十分であり、進行を予測できる分子の発見は喫緊の課題である。 
そこで本研究では、プロテオーム解析により予後予測因子となりうる新規膀胱癌関連蛋白の発見を
目的とした。膀胱全摘除術により得られた 6例の膀胱癌部組織と非癌部組織の凍結標本から蛋白を抽
出した後に、iTRAQ ラベリング法により、膀胱組織における蛋白の発現を定量比較した。LC-MS/MS
により同定された 493個の蛋白の中から、6例中 4例以上の癌部組織で共通して高発現することが認
められた蛋白を 15個まで絞り込み、免疫組織染色により組織中におけるそれらの発現を確認した。
その中で、癌部組織における発現パターンと臨床病理学的因子との関連が認められた、RNA ヘリカー
ゼの 1つである DEAD (Asp-Glu-Ala-Asp) box polypeptide 39 (DDX39)について、さらに注目して解
析を進めた。303例の膀胱癌組織を用いた免疫組織染色では、DDX39 高発現 (腫瘍細胞の 50%以上が
DDX39陽性) の腫瘍の頻度は、病理的深達度別に pTa: 68.6%、pT1: 43.5%、pTis: 20.0%、pT2以上: 
5.3%であり、また組織学的異型度別では G1: 65.2%、G2: 60.7%、G3: 19.6%であることから、DDX39
の発現が膀胱癌の病理学的深達度および組織学的異型度と逆相関することが明らかとなった。また、
経尿道的膀胱腫瘍切除術を施行された 105例の患者を対象とし、組織における DDX39発現の進行予測
因子としての有用性を評価した。DDX39低発現 (腫瘍細胞の 50%未満が DDX39陽性) の腫瘍を有する
膀胱癌患者は、DDX39高発現の腫瘍を有する患者に比較して無増悪生存期間が有意に短いことが示さ
れた (HR = 7.485, p = 0.0083)。さらに膀胱癌細胞株を用いた解析では、膀胱癌細胞 T24における
DDX39の遺伝子発現を特異的にノックダウンすることで細胞浸潤能が有意に亢進することが明らか
となった (fold change = 2.36 – 2.65)。 
以上の結果から、新規膀胱癌関連蛋白である DDX39が膀胱癌の浸潤に抑制的に関与しており、組織
中における発現低下が予後不良因子として有用である可能性が示され、本研究は膀胱癌の浸潤過程の
解明に寄与するものと考えられる。よって本研究は博士（医学）の学位を授与されるに値すると判定
された。 


DDX39は膀胱癌の浸潤抑制因子として作用する

http://dlisv03.media.osaka-cu.ac.jp/infolib/user_contents/youshi/5896.pdf

DDX39は膀胱癌の浸潤抑制因子として作用する

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