Satokari, Reetta

Helsingin yliopiston digitaalinen arkisto

)FIELSN'IGN.I YLiOPISTO - HELStr.IGFORS UNIVERSITET - UNIVERSITY OF I{ELStr{KITv<in laii - Arbetas art - Level-tutkielmaAika-Datum-Monthand vearheinäkuu 1996Tiedekunta/Osasto - Fakultet/Sektion - FacultvMatemaattis -luonnontieteellinen tiedekuntaMuita tietoia - Öwisa uoosifter - Additional informationTyö on tehty VTI:n Bio- ja Elintarviketekniikan osastolla.dos. Atte von a dos. Auli HaikaraSäilvtvsnaikka - Förvarinssstålle - Where denositedYleisen osastonAvainsanat - Nvckelord - Kevwords165 rDNATiivistelma - Referat - AbstractOluessa esiintyy laatuvirheitå aiheuttavina kontaminantteina sekä en Lactobacillus-lajeja(L.brevis, L.lindneri) että anaerobisia Pectinatus- ja Megasphaera-sukujen bakteereja.Laktobasillit l¿ihinnä sament¿vat oluüa, kun taas anaerobit pilaajat aiheuttavat voimakkaansamentumisen lisåiksi makuvirheitå ja epämiellyttävåin hajuisia aineenvaihduntatuotteita. Nämäkontaminantit tulisi pystyä havaitsemaan nopeasti ja hyvin pienissä pitoisuuksissa. Työssäselvitettiin PcR-tekniikan soveltuvuutta tähåin tarkoitukseen.Monistettåvaksi DNA-alueeksi bakteerien genomissa valiü.iin 165 rDNA. Työssä sururniteltiinspesifiset alukked M.cerevisiae-lajille ja Pectinatus-suvulle sekä varmistettiin näiden alukkeidentoimivuus puhdasviljelmistå eristetyllä DNA:lla. Myös kirjallisuudessa esitettyjen L.brevis- jaL.lindneri-spesifisten alukkeiden toimivuus varmistettiin. Työssä kokeiltiin myös kaksivaiheistaPCR-menetelmää, jossa 165 rDNA rikastetaan ensin käyttåmällä yleisalukkeita, ja vasta tämåinjälkeen käytetii¿in spesifisiä alukkeita lajityypillisen sþaalin aikaansaamiseen. Lopuksi testattüntyössä kehitettyä menet€lrnää PCR-monistukseen soveltuvan bakteeri-DNA:n eristiimiseksi oluesta.Sekä tåssä työssä suunnitellut että ki{allisuudessa esitetyt suku- ja lajispesifiset alukkeet osoitetiinspesifisiksi ja näin ollen soveltuviksi þseisten bakteerien tunnist¿miseen. KaksivaiheisessaPCR:ssa myös muista kuin kohdebakteereista monistui hieman oikean kokoista tuotettå toisessavaiheessa. Mahdollisten väärien positiivisten tulosten vuoksi kaksivaiheista PCR-menetehnåiå näilläalukkeilla ei käytetty olutkontaminanttien osoittamiseen. Työssä kehitetty menetelmä bakteeri-DNA:n eristämiseksi oluesta osoittautui toimivaksi, ja kaikki kohdebakteerit pystyttiin osoittamaanoluesta PcR-tekniikalla. Menetelmän herkþys oli <10 laktobasillia, -20 Pectinaøs-bakteeria ja-200 Megasphaera-baktperia ml:ssa olutta. Osoittamisaika oli l0 tuntia.Menetelmä ei ole vielä tarpeeksi herkkii bakteerien osoittamiseksi oluesta hyvin pienissäpitoisuuksissa (<10 bakæeria/pullo). Menetehnåin herkþryüä voidaan parantaa optimoimallaPCR-reaktiot paremmin ja kehittåmällä edelleen menetelmää DNA:n eristämiseksi oluesta.Yksinkertaiselnman, paremmin rutiinikäyttöön soveltuvan DNA:n eristysmeneteknän kehittäminenon myös tarpeen. Lyhyen rikastuskasvatuksen yùdistäminen PCR-menetekn¿i¿in parantaisiherkkyytüi ja varmistaisi, etlä menetelmä perustuu elävien bakteerien osoittamiseen.Sivumâårä - Sidoantal- Numberofnases68Onoiaine - Läroämne - SubiectTvön nimi - Arbetets titel - TitleOlutkontaminanttien osoittaminen PcR-tekniikallaTekiiä - Författare - AuthorReettå SatokariLaitos - Institution - DenartmentBiotieteiden laitos

Olutkontaminanttien osoittaminen PCR-tekniikalla

Abstract

Similar works

Full text

Available Versions

Helsingin yliopiston digitaalinen arkisto