Kettunen, Eeva-Marja

Helsingin yliopiston digitaalinen arkisto

HELSINGIN YLIOPISTO _ HELSINGFORS UNIVERSITETtflMat.-Luonnontiet.l¡arckuntdotr.to - F¡lultrus.{.ti6121BiokemiaAh-reseptori ja vierasaineiden sen välityksellä aktivoimat geenitKettunen Eeva-M aBiokemian laitos-k[lllirll6upfrg¡ltêralueellinenAh-rese n eeniAryylihiilivetyreseptori (AhR) on liukoinen solun sisäinen proteiini. Tasomaistenaromaattisten hiilivetyjen sitoutuminen reseptoriin aktivoi sen signaalia välittäväksitranskriptiotekijåksi ja se välittää monia näiden elimistölle vieraiden aineidenbiokemiallisista ja myrkyllisistä vaikutuksista. Ligandia sitova AhR aktivoi lukuisiavierasainemetaboliaan osallistuvien entsyymien geenejä sekä solujen kasvuun jaerilaistumiseen vaikuttavia geenejä. Näitä kutsutaan Ah-geenipatteriksi.Ah-geenipatteriin kuuluvat sytokromi P-450-entsyymit CYP1A1 ja CYP1A2katalysoivat vierasainemetabolian I vaiheen reaktioita. Niiden on havaittuilmentyvän maksassa aluespesifisestija niiden induktion ß-naftoflavonilla (BNF) tai3-metyylikolantreenilla (MC) tapahtuvan aluespesifisesti ja pretranslaatiotasolla.Glutationitransferaasit (GST) kuuluvat myös Ah-geenipatteriín. Ne vastaavatosittain sytokromi P450-entsyymien katalyysissä muodostuneiden reaktiivistenvålituotteiden detoksikaatiosta.Erikoistyön tavoitteena oli tutkia GST-isoentsyymien Ya1 ja Ya2 aluespesifistäinduktiota BNF:lla tai MC:lla altistettujen rottien maksassa. Altistettujen sekäkontrollirottien maksan periportaali- ja perivenoosisolut hajotettiin ja aluespesifiseteluaatit keråttiin maksasta kaksoisdigitoniinipulssitekniikalla. Eluaattiensisältämien GSTYaI ja GSWa2 mRNA:n semikvantitatiivista määritystä vartensisäänajettiin menetelmä, jossa mRNA:n käänteiskopiointiin yhdistetyllä PCR-menetelmällä monistettiin GSTYaI:lle ja GSTYa2:lle spesifistä cDNA:ta jamonistustuotteiden suhteellÍsia määriä kvantitoitiin korkean erotuskyvynnestekromatografialla. Tavoitteena oli myös selvittäå aluespesifinen GST-kokonaisaktiivisuus käyttäen 1-kloro-Z,4-dinitrobentseeniä substraattina sekäGSTYa-proteiinimäärä Western Blot- tekniikalla.Perivenoosi/periportaali (pv/pp)-suhteita verrattaessa vältetään yksilötasonsuhteellisen ilmentymisen aiheuttaman hajonnan vaikutus tuloksiin. MC-indusoitujen rottien sekä GST-aktiivisuuden että GSTYa:n pv/pp-suhde ei eronnutmerkitsevästi kontrollieläimistä, mutta BNF-indusoiduissa rotissa GST-aktiivisuuden pv/pp-suhde oli merkitsevästi pienempi kuin kontrollirotissa jaGSTYa:n pv/pp-suhde poikkesi merkitsevästi sekä kontrolleista että MC-indusoiduista rotista.GSTYaI mRNA:n kohdalla ei nähdä merkitseviä eroja BNF:n ja MC:nvaikutuksessa verrattuna kontrolleihin, mutta indusorien vaikutuksen keskinäinenero GSTYaI mRNA:n perivenoosi/periportaali (pv/pp)-suhteessa oli merkitsevä.MC- ja BNF-indusoitujen rottien GSTYa2 mRNA-måärät sen sijaan ovatmerkitsevästi korkeammat sekä periportaali- että perivenoosialueella kuinkontrollirotilla. Samoin MC- ja BNF-indusoitujen rottien GSTYa2 mRNA:n määränpv/pp-suhteet poikkesivat merkitsevästi kontrolleista, mutta niiden keskinäinen eroei ollut merkitsevä. GSTYaI:lla ja Ya2lla on ilmeisesti säätelytekijöitä, jotkasäätelevät geenien hieman erilaista indusorispesifistä alueellista ilmentymistämaksassa.

Ah-reseptori ja vierasaineiden sen välityksellä aktivoimat geenit

Abstract

Similar works

Full text

Available Versions

Helsingin yliopiston digitaalinen arkisto