Antikainen, Jenni

Helsingin yliopiston digitaalinen arkisto

Helsingin yliopisto Helsingfors universitet University of HelsinkiTyön laji Arbetets art LevelPro graduAika Datum Month andyearLokakuu 1999Tiedekunta/Osasto FakultelSektion FacultyMatemaattis-luonnontieteellinentletoJaSäilytyspaikka Förvaringsställe WheredepositedYleisen mikrobiologian osaston käsikirjastoAvainsanat Nyckelord KeywordsLactobacillus, S-kerros, kollageeniAbstractTyössä luonnehdittiin Lactobacillus uispatus JCM 5810 -kannan S-kerros -pintaproteiinin, CbsA:n,kollageenin sitoutumiskohtaa. Lactobacillus crispatus kuuluu maitohappobakteerien ryhmään. Ne ovat Gram-positiivisia kokki- tai sauvabakteereita, joiden aineenvaihdunta tapahtuu kåiymisenåi. Käymisenlopputuotteena on aina ainakin maitohappo. Lactobacillulrs¡¿ on maitotuotteissa, lihassa, ja hedelmissä sekälisåiksi ne kuuluvat ihmisen normaaliflooraan suolistossa, suussa ja vaginassa. Joidenkin laktobasillien onhuomattu aiheuttavan hammaskariesta tai sydäntulehdusta, vaikka yleisesti Lactobacillutsia pidetäänprobioottisina.Bakleerien tarth¡minen epiteelisoluihin ja soluväliaineeseen lisåili kolonisaatiota suolistossa. MonienLactobacillusten onkn todettu tarttuvan epiteelisoluihin ja soluväliaineeseen. S-kerros -proteiinit voivattoimia tarttumisproteiineina epiteeliin ja soluvåiliaineeseen.S-kerrokset ovat yksi yleisimmistä bakteerien pintarakenteista niin Bacteria- kuin Arohaea-ryhmissä.S-kenokset koostuvat yhdestli proteiinista, joka kiteytyy solun pinnalle. Niille on esitetty monia eri tehtavia.S-kerrokset voivat toimia estlilinä solun ja sen ympäristön välillä suojaten solua. Arkkibakteereilla S-kerrostoimii myös solurakenteen ylläpitäjlinåi ja solun jakautumisessa. S-kerrokset voivat toimia myöstarttumisproteiineina is¿intäsolun kudoksiin. Aeromonas salmonicidan S-kerroksen on huomattu voimistavankannan virulenssia.Aikaisemmissa tutkimuksissa on todetnr Lactobacillus crispatuksen JCM 5810 -kannan sitoutuvankollageeniin. Kannasta eristettiin S-kerros -proteiini, CbsA, ja sen todettiin olevan kollageenia sitovaadhesiini. CbsA on hyvin homologinen (73 %) toiselle S-kerros -proteiinille, SlpnB:lle. SIpnB on kannasta Z.crispatus LMG 12003 ja se on kannan hiljainen geeni. SlpnB ei sido kollageenia. Tässli tutkimuksessakarakterisoitiin CbsA:n kollageenia sitovaa aluetta. CbsA:sta ja SlpnB:sta tehtiin hybridiproteiinejarekombinantti-PCR:n avulla ja sen listiksi CbsA:han tehtiin useita pistemutaatioita. TyOssa tehtiin myösCbsA:sta lyhyempiä peptideitä. Geenit kloonattiin pQE-30 -vektoriin, jossa proteiinin alkupäåihän liittyykuuden histidiinin håintll. Proteiinit puhdistettiin histidiinihännän avulla nikkeli-affiniteettikromatografialla janiiden sitoutumista t25jodi -leimattuun tyyppi IV- kollageeniin mitattiiin autoradiografialla. Proteiiniensakkaisuutta tutkittiin sentifugoimalla ja S-kerros -rakenteen muodostumista katsottiinelektronimikroskopialla.Työssåi voitiin rajata kollageenin sitoutumiskohta proteiinin 287:ään ensimmäiseen aminohappoon.Tfimåin osoittaa hybridiproteiinin His-cbsAl-287/SlpnB288-410 ja peptidin His-l-287 sitoutuminenkollageeniin. Konstruktien sakkaisuutta määritettiin sentrifrrgoimalla. Kaikki kollageenia sitovat konstnrktitolivat hyvin sakkaisia. Myös elektronimikroskoopilla huomattiin kollageenia sitovien konstrukfienmuodostavan S-kerroksen. Sen sijaan konstruktit, jotka eivät sitoneet kollageenia eivåit myöskälinmuodostaneet S-kenosta eivätkä ne olleet sakkaisia. Ilmeisesti kollageenin sitoutuminen vaatii proteiinilta S-kerros -rakenteen muodostumisen.Sivumäärä Sidoantal Number ofpages4lYleinen mikrobiologiaLäroämneLactobacillus crispatuksen S-kerros -proteiinin, CbsA:n, kollageenia sitovan alueen karakterisointinlmlTekijä Författare AuthorJenni AntikainenLaitos Institution DepartmentBiotieteiden laitos, yleisenmikrobiologian osasto

Lactobacillus crispatuksen S-kerros -proteiinin, CbsA:n, kollageenia sitovan alueen karakterisointi

Abstract

Similar works

Full text

Available Versions

Helsingin yliopiston digitaalinen arkisto