Karakterizacija podjedinice β (rpoB) RNA polimeraze vrste Ehrlichia canis izdvojene iz pasa i krpelja Rhipicephalus sanguineus u području Cebu na Filipinima.

Abstract

Ehrlichia canis, a canine tick-borne pathogen with wide geographic distribution, has been serologically and molecularly detected in the Philippines. The present study aimed to characterize E. canis detected from Rhipicephalus sanguineus ticks and dogs in Cebu, Philippines, using the RNA polymerase sub-unit Beta (rpoB), a gene that has been used for disease diagnosis and resolution of phylogenetic relationships between closelyrelated species. Using a 16S rRNA gene-based PCR that screens Ehrlichia spp., DNA samples obtained from the blood of 10 dogs, confirmed to be serologically positive for E. canis, were tested and found positive for E. canis after subsequent DNA sequencing. DNA from infected ticks and the 16S rRNA-E. canis-positive canine blood samples from the present study were further analyzed using the rpoB gene. All registered Ehrlichia spp. rpoB gene sequences were aligned to design specific primers that can amplify a partial 1572-bp length sequence of E. canis. The obtained sequences revealed 99.8-100 % identities with each other, and 99.8-100 % and 87.8-89.1 % identities with registered E. canis and E. chaffeensis sequences from the USA, respectively. Phylogenetic analysis revealed that the obtained partial rpOB sequences formed a clade with E. canis strains from the USA. The present study is the first rpoB characterization of E. canis in the Philippines, and apparently in Asia, and provides additional evidence of the presence of the pathogen in the country. It also adds information on the high conservation of the rpoB gene in E. canis.Ehrlichia canis, geografski vrlo proširena rikecija u pasa, dokazana je serološki i molekularno na Filipinima. Određena su obilježja E. canis dokazane u krpelja Rhipicephalus sanguineus i pasa u pokrajini Cebu na Filipinima. To je učinjeno analizom podjedinice β (rpoB) RNA polimeraze, gena koji je rabljen za dijagnosticiranje bolesti i otkrivanje filogenetske srodnosti između usko srodnih vrsta. Upotrebom lančane reakcije polimerazom temeljene na genu 16S rRNA pomoću kojeg se razlikuju vrste roda Ehrlichia, u krvi 10 pasa serološki pozitivnih na E. canis dokazana je DNA specifična za E. canis. DNA iz zaraženih krpelja i uzorci krvi pasa pozitivnih na 16S rRNA-E. canis bili su dalje analizirani na osnovi gena rpoB. Sve dokazane sekvencije gena rpoB rikecija roda Ehrlichia bile su poravnate radi sinteze specifičnih početnica s kojima se može umnožiti slijed specifičan za E. canis dužine 1572 bp. Umnožene sekvencije pokazivale su 99,8-100 % identičnosti međusobno, 99,8-100 % identičnosti s vrstom E. canis iz SAD-a i 87,8-89,1 % identičnosti sa slijedovima E. chaffeensis iz SAD-a. Filogenetska analiza je pokazala da se sekvencije rpoB nalaze u skupini sa sojevima E. canis iz SAD-a. U istraživanju je prvi put analiziran rpoB vrste E. canis na Filipinima i u Aziji. Ono pruža dodatni dokaz prisutnosti te vrste na tom području. Također pruža informaciju o visokoj konzerviranosti gena rpoB vrste E. canis