Se evaluó el efecto del quitosan de alto peso molecular (QAPM) y del alginato de sodio (NaAL) sobre la producción de proteinasa ácida por una cepa de colección y cinco aislamientos de Candida albicans. Se indujo la secreción de
proteinasa ácida con y sin agregado de polímeros a distintas concentraciones y se determinó la actividad enzimática. QAPM y NaAL disminuyeron significativamente la actividad enzimática (>76% cepa de colección y >89% aislamientos, p < 0,05). QAPM no modificó la concentración de proteínas y NaAL produjo una disminución. Se concluye que ambos polímeros son
efectivos en inhibir la actividad de proteinasa ácida de Candida albicans.publishedVersio

Azcurra, A.

Barembaum, S.

Bojanich, A.

Calamari, S.

Dorronsoro, S.

Virga, C.

Revista Iberoamericana de Micología

Spanish

Repositorio Digital de la Universidad Nacional de Córdoba

Repositorio Digital  Publicaciones Científicas Facultad de Odontología Universidad Nacional de Córdoba (Argentina) El Repositorio Digital de la Universidad Nacional de Córdoba (RDU), es un espacio donde se almacena, organiza, preserva, provee acceso libre y procura dar visibilidad a nivel nacional e internacional, a la producción científica, académica y cultural en formato digital , generada por los inte-grantes de la comunidad universitaria.  Efecto del quitosan de alto peso molecular y del alginato de sodio  sobre la proteinasa ácida secretoria de Candida albicans Silvia Calamari Alejandra Bojanich Silvina Barembaum Adriana B. Actis Ana Azcurra Carolina Virga Revista Iberoamericana de Micología. Vol. 21, (2004), pp. 206-208 http://www.reviberoammicol.com/2004-21/206208.pdf Cita del documento: Calamari, S, Bojanich, A, Barembaum, S, Actis, A.B, Azcurra, A., Virga, C. Efecto del quitosan de alto peso molecular y del alginato de sodio sobre la proteinasa ácida secretoria de Candida albicans. Rev. Iberoam. Micol. 2004;21: 206-208.   Disponible en:  https://rdu.unc.edu.ar/handle/11086/4883 Este documento está disponible para su consulta y descarga en RDU (Repositorio Digital de la Universidad Nacional de Córdoba) . El mismo almacena, organiza, preserva, provee acceso libre y da visibilidad a nivel nacional e internacional a la producción científica, académica y cultural en formato digital, generada por los miembros de la Universidad Nacional de Córdoba.   Para más información, visite el sitio  https://rdu.unc.edu.ar/ Esta iniciativa está a cargo de la OCA (Oficina de Conocimiento Abierto), conjuntamente con la colaboración de la Prosecretar ia de Informática de la Universidad Nacional de Córdoba y los Nodos OCA. Para más información, visite el sitio  http://oca.unc.edu.ar/   Esta obra está bajo una Licencia Creative Commons Atribución-NoComercial-CompartirIgual 4.0 Internacional. Efecto del quitosan de alto pesomolecular y del alginato de sodiosobre la proteinasa ácida secretoriade Candida albicansSilvia Calamari1, Alejandra Bojanich1, Silvina Barembaum1, Ana Azcurra1,Carolina Virga2 y Susana Dorronsoro11Departamento de Biología Bucal y 2Departamento de Patología Bucal, Facultad de Odontología, Córdoba,ArgentinaSe evaluó el efecto del quitosan de alto peso molecular (QAPM) y del alginatode sodio (NaAL) sobre la producción de proteinasa ácida por una cepa decolección y cinco aislamientos de Candida albicans. Se indujo la secreción deproteinasa ácida con y sin agregado de polímeros a distintas concentraciones yse determinó la actividad enzimática. QAPM y NaAL disminuyeronsignificativamente la actividad enzimática (>76% cepa de colección y >89%aislamientos, p < 0,05). QAPM no modificó la concentración de proteínas yNaAL produjo una disminución. Se concluye que ambos polímeros sonefectivos en inhibir la actividad de proteinasa ácida de Candida albicans.Candida albicans, Proteinasa ácida, Quitosan de alto peso molecular, Alginato de sodioHigh molecular weight chitosan and sodium alginateeffect on secretory acid proteinase of Candida albicansThe effect of high molecular weight chitosan (HMWCh) and sodium alginate(NaAL) on acid proteinase secretion of Candida albicans (one of culturecollection and five isolates) was evaluated. The secretion of acid proteinase wasinduced in the presence and the absence of these polymers in differentconcentrations and their enzymatic activity was determined. HMWCh and NaALsignificantly diminished the enzymatic activity (>76% for the collection strainsand > 89% for the isolates, p < 0.05). HMWCh did not modify proteinconcentrations, but NaAL did. It can be concluded that both polymers caninhibit the proteinase activity of Candida albicans. Candida albicans, Acid proteinase, High molecular weight chitosan, Sodium alginate206 Rev Iberoam Micol 2004; 21: 206-208habiéndose demostrado su papel en la invasión y destruc-ción del tejido del huésped [3,5,6,8]. Las especies delgénero Candida poseen una alta capacidad de secretar pro-teinasa ácida y producir infecciones, especialmente cuandoel pH desciende y hay una disminución del flujo salivalcomo consecuencia del uso de prótesis dentales [8]. El quitosan de alto peso molecular (QAPM) [10] yel alginato de sodio (NaAL) [4], por sus propiedadesfísico-químicas, han demostrado capacidad para agregar yatrapar C. albicans adherida tanto a células epitelialescomo a placas de acrílico in vitro [1,13]. Este estudio sepropuso evaluar el efecto de QAPM y de NaAL sobre laactividad de la proteinasa ácida de C. albicans.Las muestras de saliva provenientes de pacientescon prótesis dental fueron sembradas en agar glucosado deSabouraud suplementado con cloranfenicol al 1% a 37 °Cdurante 48 h [9]. La identificación de las especies se rea-lizó por la morfología de las colonias, ensayo de tubo ger-minativo y asimilación de azúcares con API 32 C AUXSystem, (BioMérieux, Francia). También se utilizó la cepade C. albicans ATCC 10231 (ATCC, EE.UU.).Para incrementar la producción de proteinasa sesiguieron los criterios de Remold [12] y se empleó unResumenPalabras claveSummaryKey wordsEs conocido que Candida albicans es el principalresponsable de la candidiasis bucal de pacientes portadoresde prótesis. Diversos factores contribuyen al desarrollo deinfecciones por C. albicans, entre los que merecen desta-carse enzimas como la proteinasa ácida o carboxilprotei-nasa extracelular. Su secreción está asociada con la capa-cidad de adherirse y colonizar el tejido del huésped,Dirección para correspondencia:Dra. Susana DorronsoroDepartamento de Biología BucalFacultad de Odontología - Ciudad UniversitariaHaya de la Torre S/N, Agencia Postal 4 CP 5016, Córdoba, ArgentinaTel.: +54 351 433 3033Fax: +54 351 433 4178 / 4179Correo electrónico: susu@odo.unc.edu.arAceptado para publicación el 2 de noviembre de 2004©2004 Revista Iberoamericana de MicologíaApdo. 699, E-48080 Bilbao (Spain)1130-1406/01/10.00 EurosNota207Polímeros y proteinasa ácida de Candida albicansCalamari S, et al.medio que contiene 0,5 g MgSO4, 1 g KHPO4, 20 g de glu-cosa, 2 g de suero albúmina bovina o humana y 1,25 g deuna preparación polivitamínica en un 1 l de agua, ajustadoa pH 4 con HCl. Se adicionaron 100 µl de la suspensión decada una de las cepas (1 x 108 células/ml) a 10 ml de estemedio en presencia de los biopolímeros (QAPM Unifarma,90 % desacetilado, 280 cps, PM 300 KD, NaALKimitsu,Chile, 420 cps) (QAPM al 0,25% y 0,5% y NaAl al 0,10%y 0,25%) y en ausencia de los mismos y se incubaron sietedías a 27 °C en un incubador con agitación. Las levadurasfueron centrifugadas a 1.300 g a 4 °C por 30 min, lossobrenadantes se ajustaron a un pH 6,5 con NaOH 1N, sefiltraron mediante filtros estériles (poros 0,2 µm) y seguardaron a –80 °C hasta su uso. Posteriormente, se deter-minó la concentración de proteínas totales según el métodode Lowry [7] y, al final de su purificación, las muestrasfueron separadas por cromatografía (Sephadex G-75,Sigma, EE.UU.) y se determinó la absorbancia a 280 nm.Se adicionó 1,0 ml de tampón 0,2 M citrato de sodio pH4,5 y 750 µl de solución albúmina bovina 1% P/V a 250 µlde las muestras de cada fracción de ensayo. La mezcla fueincubada con agitación a 37 °C por 60 min. Se inhibió lareacción por adición de 500 µl de ácido tricloroacético20% (V/V) y se centrifugó a 1.500 g por 30 min a 4 °C.Se determinó la concentración de proteínas y la actividadenzimática por litro del medio inductor de Remold a unaconcentración de 1 x 108 cél/ml Una unidad arbitraria esdefinida como el incremento de la absorbancia a 595 nmentre 0,100 y 60 min [8,11]. En todos los casos la fracciónde ensayo se trabajó por triplicado. Las fracciones deensayo fueron procesadas estadísticamente mediante laprueba de t de student para muestras apareadas. La croma-tografía con Sephadex G-75 permitió la separación de 15fracciones (Figura 1). La actividad enzimática determinadaen las fracciones de ensayo número 6 para PCB y 7 parala cepa ATCC 10231 fue 1,71 ± 0,95 y 2,74 ± 0,81 U/l,mientras que la concentración de proteínas totales en estasfracciones fue 0,35 ± 0,11 y 0,51 ± 0,12 µg/µl.El agregado de QAPM y NaAL, a ambas concentra-ciones, reveló diferencias estadísticamente significativas enla actividad enzimática al compararlas con los controles. ElQAPM en ambas concentraciones no modificó la concen-tración de proteínas totales en los sobrenadantes, no asíNaAL, el que produjo una disminución de las proteínastotales para ambas concentraciones, según consta en latabla 1. El efecto del QAPM y NaAL sobre la actividad pro-teinasa ácida mostró una inhibición significativa, con unaefectividad que osciló entre 70% y 90% para C. albicansde portadores de prótesis dental como para la cepa ATCC. El mecanismo por el cual el QAPM produciría ladisminución de la actividad enzimática estaría relacionadocon el cambio conformacional que sufren estos polímerosa pH cercano a 7. NaAL, polisacárido lineal con carganegativa, es capaz de interactuar con cationes polivalentescomo Ca2+ formando un gel que sería responsable de lainmovilización de la proteinasa ácida, siendo más evidentea mayor concentración, lo que redundaría en la disminu-ción de la actividad de la enzima [4,10]. El QAPM no incidió en los niveles de proteínastotales del sobrenadante; NaAL disminuyó dichos niveles,con capacidad de retener proteínas de menor peso molecu-lar (40 a 45 KD). Sin embargo, este proceso no se observócon proteínas de mayor peso molecular, como es el caso de IgAs anti-C. albicans de saliva, las que no revelaronvariación en su concentración cuando interactuaron con el QAPM y el NaAL tanto in vitro como in vivo [2], porlo que no estaría afectada la capacidad de defensa delhuésped. Estos resultados, sumados a los ya hallados pornosotros [1,2] sugerirían que estos biopolímeros podríanser utilizados en el tratamiento de la candidiasis bucal.Esta investigación fue subsidiada por Agencia CórdobaCiencia y Secretaría de Ciencia y Técnica de laUniversidad Nacional de Córdoba, Argentina. Absorbancia Candida albicans de pacientecon candidiasis bucal● Candida albicans ATCC 10231Figura 1. Separación por cromatografía de las cepas bajo estudio(Sephadex G-75). Corresponde al fraccionamiento de una muestraproblema representativa de las muestras de ensayo (n=5).Tabla 1. Interacción de QAPM y NaAL sobre la actividad de proteinasa ácida de Candida albicans y proteínas totales.Actividad enzimática U/l % de disminución Proteínas totales µg/mlAislamientos ATCC 10231 Aislamientos ATCC 10231 Aislamientos ATCC 10231clínicos clínicos clínicosC. albicans sin polímero 1,34 ± 0,65 1,16 ± 0,82 0,59 ± 0,18 1,42 ± 0,50C. albicans + QAPM 0,25% 0,12 ± 0,03 * 0,06 ± 0,02 * 91,0 94,7 0,51 ± 0,23 1,34 ± 0,45C. albicans + QAPM 0,50% 0,10 ± 0,03 * 0,04 ± 0,01 * 92,5 96,5 0,56 ± 0,25 1,38 ± 0,36C. albicans + NaAL 0,10% 0,02 ± 0,01 * 0,28 ± 0,01 * 98,5 75,8 0,42 ± 0,07 0,54 ± 0,12C. albicans + NaAL 0,25% 0,14 ± 0,04 * sin actividad * 89,5 100 0,33 ± 0,15 0,62 ± 0,21* Representa las diferencias estadísticamente significativas en la actividad enzimática entre las muestras sin el agregado de polímero y las muestras con el agregado de polímeros adistintas concentraciones.0,40,350,30,250,20,150,10,0500 2 4 6 8 10 12 14 16Fracciones208 Rev Iberoam Micol 2004; 21: 206-2081. Barembaum S, Virga C, Bojanich A, Cornejo S, Calamari S, Pontón J,Dorronsoro de Cattoni S. Effect of quitosanand sodium alginate on autochthonous C. albicans adherence to buccal epithelialcells in vitro study. Rev Med Oral 2003; 8:188-196.2. Bojanich A, Calamari S, Virga C, Cornejo S,Dorronsoro de Cattoni S. Proteínasantigénicas, IgAs Anti-SM y Anti-CA ycapacidad de aglutinación salival de cepasautóctonas de C. albicans y S. mutans.Arch Odontoestomatol 2001; 17: 168-174.3. Cotter G, Kavanagh K. Adherencemechanisms of Candida albicans. Br J Biomed Sci 2000; 57: 241-249 4. Draget KI, Skjak-Braek, Smirsrod O.Alginate based new materials. Internationalbases new materials 1997; 21: 47-55.5. Ghannoum GR, Abu Elteen K. Correlativerelationship between proteinase production,adherence and pathogenicity of variousstrains of Candida albicans. J Med VetMycol 1986; 24: 407-413. 6. Hube B. Candida albicans secreted aspartylproteinases. Curr Top Med Mycol 1996; 7:55-69.7. 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