Determinación de los linajes presentes en distintos aislamientos de Trypanosoma cruzi y su distribución en sangre, corazón y músculo esquelético del huésped durante la etapa aguda de la infección experimental.

Abstract

Tesina (Grado en Ciencias Biológicas)--Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Exactas, Físicas y Naturales. Lugar de Trabajo: Cátedra de Física Biomédica. Facultad de Ciencias Médicas. U.N.C. 2016. 84 h.; grafs.; tabls. Contiene Referencias Bibliográficas.Diversos estudios han demostrado alta incidencia de infecciones mixtas (con varias cepas o aislamientos de Trypanosoma cruzi en un mismo individuo) en humanos, reservorios y vectores, parámetro que podría influir en la evolución de la enfermedad de Chagas. Así, la amplia gama de signos clínicos que caracte- rizan a esta enfermedad puede explicarse en parte por la heterogeneidad genética del parásito y por la distribución de estos diferentes clones en un mismo individuo. Una de las diferencias que presentan las distintas cepas del parásito es un marcado tropismo tisular diferencial en los órganos del huésped que puede variar en los distintos momentos de la infección. En el presente trabajo se determinó la presencia y distribución de una cepa (Tulahuen) y tres aislamientos naturales de T. cruzi (SGO Z12, Lucky y Casibla) en sangre, corazón y músculo esquelético, durante la etapa aguda de la infección experimental (35 días post infección). Se infectaron ratones albino suizos (n=100) con 50 parásitos de cada cepa/ aislamiento o con una combinación de dos de ellos. Su presencia en los diferentes tejidos (sangre, corazón y músculo esquelético) se determinó por PCR específica para T. cruzi. Su distribución diferencial se analizó determinando el linaje del parásito presente en cada muestra (mediante tipificación molecular de los mismos) y las diferentes subpoblaciones se detectaron por el polimorfismo en la longitud de los fragmentos de restricción (RFLP) utilizando la enzima Bce AI. Las alteraciones en corazón y músculo esquelético se analizaron mediante estudios histológicos. El parásito se encontró presente en todas las muestras analizadas (PCRs positivas). El análisis histológico mostró la presencia de infiltrados inflamatorios más severos en músculo esquelético que en corazón en todas las muestras, además se observó la presencia de nidos de amastigotes en la mayoría de las muestras de músculo esquelético. La cepa Tulahuen demostró estar formada por parásitos correspondientes al linaje TcV; los tres aislamientos naturales por su parte mostraron estar compuestos por una mezcla de TcII y TcVI. En los ratones infectados con la cepa Tulahuen, todas las muestras presentaron el linaje TcV; esta homogeneidad fue confirmada por el RFLP. En los ratones infectados con el aislamiento SGO Z12, en circulación y en las muestras de corazón se encontraron los linajes TcII y TcVI, mientras que en las muestras de músculo esquelético sólo se encontró el linaje TcVI. La presencia de un tipo de parásito diferente en estas muestras de músculo esquelético fue corroborada por los patrones de restricción (RFLP). La mayoría de las muestras correspondientes a los ratones infectados con los aislamientos Lucky y Casibla presentaron los linajes TcII y TcVI. Las muestras de sangre, corazón y músculo esquelético de los ratones infectados con una mezcla de la cepa Tulahuen y el aislamiento SGO Z12, presentaron solo el linaje TcVI. TcII y TcV no se encontraron presentes en ningún caso en las muestras de este grupo. En los grupos que fueron infectados con el resto de las combinaciones de cepas/aislamientos, se observó la presencia de los linajes TcII y TcVI en la mayoría de los casos. Los grupos infectados con solo una cepa/aislamiento presentaron mayor variabilidad en la distribución de los parásitos que aquellos grupos infectados con combinaciones de ellos. Los presentes resultados demuestran la distribución de los parásitos en los tejidos del huésped desde etapas tempranas de la infección: la presencia de parásitos en corazón confirma el cardiotropismo de T. cruzi y su presencia en los cortes de músculo esquelético evidencia la importancia de este órgano como reservorio de parásitos. Los aislamientos naturales utilizados están formados por una mezcla de los linajes TcII y TcVI que corresponden a dos de los linajes de T. cruzi más frecuentemente asociados al ciclo domiciliario de infección en nuestro país. TcV no fue encontrado en ninguna de las muestras provenientes de los grupos coinfectados, sugiriendo que este linaje sería más susceptible a la respuesta inmunológica del huésped. Cada linaje puede mostrar tropismo diferencial por los tejidos del huésped, lo que resalta la importancia de los presentes resultados para aquellos pacientes de área endémica que pueden tener infecciones mixtas. El tropismo de las subpoblaciones de parásitos sin embargo, estaría influenciado por la presencia de una mayor cantidad de subpoblaciones o por interacciones entre parásitos de diferentes linajes. La presencia de un linaje determinado dependerá del “repertorio” de parásitos infectantes en cada caso. Estos resultados pretenden contribuir al entendimiento de las variabilidades clínicas y facilitar el establecimiento de un pronóstico y posterior elección del tratamiento de la enfermedad de Chagas, teniendo en cuenta la variabilidad genética del parásito y la presencia de subpoblaciones en los diferentes tejidos del huésped