Bakgrunn: ABC-transportøren P-glykoprotein (P-gp) er et ATP-avhengig transportprotein lokalisert i en rekke vev, blant annet lymfocytter. Det er vist at P-gp er oppregulert i lymfocytter ved enkelte sykdomstilstander, som for eksempel inflammatoriske sykdommer. En slik oppregulering kan gi behandlingsresistens for pasienter behandlet med immunsuppressiva, som har sitt virkested intracellulært i lymfocytter. En kvantifisering av P-gp vil være et skritt på veien i forståelsen av transportørens betydning for legemiddelresistens. Hensikten med denne oppgaven var derfor å utvikle en LC-MS/MS metode for kvantifisering av P-gp i lymfocytter. Metode: Perifere mononuklære celler ble isolert fra fullblod til friske frivillige. Som standard ble det benyttet isolerte cellemembraner fra insektceller transfektert med humant ABCB1 (P-gp). Homogenisering av standard og celler ble gjort ved bruk av en "bead-beater", Precellys24, med 0,5 mm glasskuler i 0,5 ml rør og 1,4 mm og 2,8 mm keramiske kuler i henholdsvis 0,5 ml og 2 ml rør. Ulike tider og hastigheter for homogenisering ble studert (3x30 sekunder, 4x30 sekunder og 4x20 sekunder ved 5000 rpm, og 3x15 sekunder ved 5500 rpm). Til metodeutvikling ble prøver uten proteaseinhibitor og prøver med proteaseinhibitor tilsatt på ulike tidspunkt i prosedyren undersøkt. Opprensing av prøven ble utført ved bruk av indirekte immunoekstraksjon med magnetiske kuler dekket med protein G (Dynabeads). Deretter ble proteolyse av P-gp utført ved bruk av trypsin (10 mM dithiothreitol og 50 mM jodeddiksyre). Prøven ble renset opp ved fast-fase ekstraksjon før signaturpeptidet ble målt ved hjelp av LC-MS/MS. Resultater: Av kuletypene som ble forsøkt ga kun 0,5 mm glasskuler i 0,5 ml rør signaler for P-gp, med et utbytte på ca. 50%. Forsøk med ulike betingelser for homogenisering viste at 3x30 sekunder ved 5000 rpm ga godt utbytte av P-gp standard og lite variasjon i utbytte. Ved tilsetting av proteaseinhibitor til prøver før og etter homogenisering ble det ikke målt detekterbare mengder P-gp. I forsøk der proteaseinhibitor ble tilsatt før immunoekstraksjon uten forutgående homogenisering ble det derimot målt signaler for P-gp, med et utbytte på ca. 35%, tilsvarende prøver som ikke ble tilsatt proteaseinhibitor. Det tyder på at proteaseinhibitor ikke forstyrrer immunoesktraksjon og proteolyse. Forsøk der celler ble blandet med P-gp standard ga ikke detekterbare mengder P-gp
