Atividade inibitória dos extratos das espécies vegetais Tocoyena bullata e Vernonia crotonoides coletadas na Restinga de Jurubatiba (Macaé), sobre a desgranulação de mastócitos ex vivo e a linfoproliferação in vitro

Abstract

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro (FAPERJ)A alergia pode ser definida como uma resposta exacerbada do sistema imunológico aos alérgenos, que resulta da resposta das células T auxiliares tipo 2. Esta reação é chamada de hipersensibilidade imediata envolvendo anticorpos do tipo IgE, os quais se ligam ao seu receptor de alta afinidade (FcεRI) presente na superfície do mastócito. A ativação de FcεRI nos mastócitos, resulta na liberação de mediadores inflamatórios e na reação alérgica. O objetivo deste trabalho foi investigar o efeito dos extratos das espécies vegetais Tocoyena bullata (TB) e Vernonia crotonoides (VC) da Restinga de Jurubatiba sobre a desgranulação de mastócitos ex vivo e a linfoproliferação in vitro. Primeiramente, a citotoxidez foi avaliada pelo ensaio de liberação da enzima lactato desidrogenase por macrófagos peritoneais, in vitro, após tratamento com os extratos. Os extratos brutos não apresentaram toxidez nas concentrações de 0,5 mg/mL e 0,1 mg/mL, em comparação com a liberação máxima de LDH(Triton 10%). Membranas do mesentério de ratos Wistar foram sensibilizadas com IgE anti-DNP (0,001 mg/mL) e tratadas com os extratos de TB (caule, flor e folha) e VC nas concentrações de 0,5 mg/mL; 0,25 mg/mL e 0,125mg/mL. A desgranulação foi induzida pela adição do antígeno DNP (0,0001 mg/mL) e a contagem de mastócitos desgranulados ou intactos foi feita após coloração com Azul de Toluidina e visualização em microscópio ótico. Observou-se que apenas os tratamentos com TB inibiram significativamente a desgranulação dos mastócitos, sendo o controle positivo= 87,2±1,0% e 93,1 ±1,4% de mastócitos desgranulados, TBcaule= 6,5±0,7; 8,8±1,6 e 9±1,4, TBflor= 4,5±0,7; 7,5±0,7 e 9,5±0,7, TB folha= 6 ± 2,8%; 9±1,4%; 21±1,4% para as concentrações de 0,5 mg/mL; 0,25 mg/mL e 0,125 mg/mL respectivamente. Para avaliar o efeito dos extratos sobre a inibição da proliferação de linfócitos, células de linfonodos inguinais de camundongos suíços (4x105 células/poço) foram estimuladas com concanavalina A (2,5µg/mL) e tratadas com os extratos de TB e VC nas concentrações de 0,25 mg/mL e 0,5 mg/mL. A linfoproliferação foi medida pela técnica de MTT. Os extratos de TB (caule, flor e folha) apresentaram valores de 62,7±16,5 e 141,6±5,5; 73,3±22 e 57,7±18,8; 79,4±5,5 e 148,8±22, nas concentrações de 0,25 mg/mL e 0,5 mg/mL respectivamente. Já a espécie VC apresentou 101,1±6,2 e 156,1±5,5 para as concentrações de 0,25 mg/mL e 0,5 mg/mL respectivamente. Ambas as espécies demonstraram efeitos significativos sobre a inibição da linfoproliferação, em relação ao grupo controle positivo (40,5±14,9). Os resultados obtidos são promissores e podem contribuir para o direcionamento de testes futuros com as espécies estudadas em modelos experimentais de respostas alérgicas