Desenvolvimento de um teste colorimétrico para triagem da atividade leishmanicida de compostos utilizando Leishmania amazonensis expressando a enzima beta-galactosidase
Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Programa de Pós-graduação em Biotecnologia e Biociências, Florianópolis, 2013No presente trabalho transfectamos uma cepa de Leishmania amazonensis com um plasmídeo contendo o gene da ?-galactosidase, visando estabelecer um ensaio colorimétrico para triagem de compostos ativos contra amastigotas intracelulares de leishmania. A transfecção não alterou o crescimento de promastigotas em cultura, a infectividade de células THP-1 e de camundongos Balb/c. A atividade da enzima foi diretamente proporcional ao número de parasitos. A inibição do crescimento dos parasitos intracelulares pelo fármaco de referência Anfotericina B, determinada tanto pelo método colorimétrico quanto por contagem microscópica dos parasitos, produziu resultados semelhantes, validando o ensaio. O teste colorimétrico também foi aplicado com sucesso para avaliar a atividade de uma classe de moléculas análogas e derivadas do ácido gálico. O estudo da correlação estrutura atividade mostrou que estas moléculas possuem uma atividade leishmanicida pouco seletiva. Algumas melhorias como a transfecção integrativa e estável, bem como padronização deste método com outras espécies de Leishmania ainda são desejáveis. Contudo, o ensaio com L. amazonensis expressando ?-galactosidase foi robusto, sensível, reprodutível e rápido na avaliação da atividade leishmanicida de compostos <br
