Onderzoek naar de inwerking van pancreatine op ontsloten en natief maismeel volgens concept ontwerp analysemethode van de Normalisatie werkgroep 370.10. 005 voor de bepaling van "vitro verteerbaar ruw zetmeel"

Essers, M.L.

Muuse, B.G.

Vergelijkend onderzoek naar de inwerking van amyloglucosidase (AGS) en pancreatine op ontsloten en natieve zetmeelrijke diervoedergrondstoffen

NARCIS 

Bepaling van het gehalte aan enzymatisch aantastbaar zetmeel in zetmeelrijke diervoedergrondstoffen

Wageningen Yield 

·- .... 
Lab . Akkerbouw 
Verslag 81.22 
1981-02-20 
Pr . nr . 14.427 
Onderwerp: Bepaling van het gehalte aan 
enzymatisch aantastbaar zet-
meel in zetmeelrijke diervoe-
dergrondstoffen. 
Voorgaande verslag(en): 80.73 en 81 . 06 . 

Lab. Akkerbouw 1981-02-20 
VERSLAG 81.22 Pr.nr. 14.427 
Project: Normalisatie/harmonisatie analysemethoden voor diervoeders en 
grondstoffen (ISO/EEG) 
Onderwerp: Bepaling van het gehalte aan enzymatisch aantastbaar zetmeel 
in zetmeelrijke diervoedergrondstoffen. 
Bijlage: I en II 
Voorgaande vers1ag(en): 80.73 en 81.06 
Doel: 
Onderzoek naar de inwerking van pancreatine op ontsloten en natief 
malsmeel volgens concept ontwerp analysemethode van de Normalisatie 
\-lerkgroep 370.10 . 005 voor de bepaling van "vi tro verteerbaar ruw 
ze tmeel". 
Samenvatting: 
De inwerking van pancreatine \-lerd bekeken bij drie verschillende incu-
batietijden namelijk 30 - 45 - 60 min. 
Conclusie: 
De methodebeschrijving is , afgezien van enkele voorstellen tot ver-
betering, goed bruikbaar. De herhaalbaarheid bij de voorgestelde 30 
minuten incuberen noodt tot afronden van de vitro verteringsco~f­
ficiënt op gehele getallen. Het verschil tussen het ontsloten produkt en 
het oorspronkelijke produkt is goed aantoonbaar. 
Verantwoordelijk: drs B.G . Huuse ?:_ 
Hedewerker/Samenste1ler: H.L. Essers. ~. 
8122.0 
Inleiding: 
Dit onderzoek \o~erd opgezet naar aanleiding van de resultaten vermeld 
in verslag 81 . 06. In het oncterhavige onderzoek \o~erd de imo~erking van 
400 mg pancreatine op natief en ontsloten maismeel nagegaan . 
Materiaal: 
Natief en ontsloten maismeel afkomstig van Granaria (januari 1981) . 
Pancreatine van Merck nr. 7133. 
Methoden: 
De monsters werden geanalyseerd volgens bijlage I. Wijziging: er werd 
ook gelncubeerd bij 45 en 60 min. De enzymsterkte \o~erd bepaald volgens 
bijlage II . 
Resultaten: 
ontsloten maismeel 
natief maismeel 
% Totaal zetmeel 
op de \o~aar 
60 , 4 
60,4 
Voch t 
% 
12,7 
12,1 
Incubatietijd 
min. 
30 
45 
60 
30 
45 
60 
De <X-amylase aktiviteit van de pancreatine \-las 39,7 E/mg . 
Bespreking van de resultaten: 
Vitro verterings-
coefficient % 
98,0/97,6 
95,4 
96 , 1 
42 , 7/41,9/38,4 
50,9 
61,8 
1 Daar na dosering van de voorverwarmde buffer , maismeel boven in de 
maatkolf bleef kleven, \-las de zetmeelomzetting niet optimaal. Hier-
door werd bij ontsloten maismeel na 60 min. incubatie minder gevon-
den dan na 30 min . 
8122 . 1 
- 2 -
- 2 -
Om dit tegen te gaan zou men na dosering van de buffer de wand af 
moeten spoelen met water van 40°C. Het voorschrift voorziet hier 
niet in. 
2 Gezien de lage verbruiken van de thio <± 3 ml) bij natief malsmeel 
is het beter om bij verwachte lage concentraties aan vitro verteer-
baar ruw zetmeel voor de titratie meer te inverteren dan de 
voorgeschreven 25 ml. 
3 Daar bij enzymsterkte bepaling in het filtraat na de incubatie 
\.;reinig of geen zetmeel meer aanwezig \.;ras, zal voor de aktivi teits-
bepaling een andere verhouding enzym - zetmeel genomen moeten \mr-
den. 
Verzendlijst: Van Doesburgh, adj. direkteur, sektorhoofden (3x), 
Es/H 
8122.2 
Oir. V.K.A., afdeling Akkerbou\.,r, leesportefeuille (Sx), 
Normalisatie, Projectbeheer. 
Bijlage I 
Ontwerp methode van de Ned . Normalisatie werkgroep "Koolhydraten in 
diervoeders" ~.J .G. 370 . 10.005 . 
BEPALING VAN DE IN VITRO VERTEERBAARHEID VAN RU\4 ZETHEEL 
1. Onderwerp 
Deze norm beschrijft een methode voor de bepaling van he t gehalte 
aan in vitro verteerbare ruwe zetmeel in diervoeders en in plan-
taardige diervoedergrondstoffen . 
2. Toepassingsgebied 
Deze norm is van toepassing bij het onderzoek van enkelvoudige en 
samengestelde voeders voor dieren. 
3. Definitie 
Gehalte aan in vitro-verteerbare ruwe zetmeel: de hoeveelheid zet-
meel en hoogmoleculaire afbraakprodukten hiervan die - zonder voor-
bel~erking - door !X.. -amylase afgebroken kan lWrden, plus de 
reducerende suikers, bepaald als glukose en omgerekend tot zetmeel, 
uitgedrukt in procenten van het in behandeling genomen monster . 
Een alternatieve definitie, die minder zeggend is, zou kunnen 
luiden : Gehalte aan in vitro- verteerbare ruwe zetmeel: de 
hoeveelheid glukoseequivalenten, vermenigvuldigd met 0,9, zoals 
bepaald in de hieronder beschreven methode en uitgedrukt in procen-
ten van he t in behandeling genomen monster . 
4. Beginsel 
Het monster wo r dt ge'incubeerd met het enzympreparaat pancreat ine . 
Het daarin aanwezige enzym amylase breekt zetmeel af tot 
wateroplosbare maltose en dext rinen. Na onteiwitting met Carrez-
oplossingen lWrden maltose en dextrinen gehydrolyseerd door koken 
met zoutzuur en het gevormde glukose bepaald volgens de methode 
Luff-Schoorl . 
Dezelfde bepaling, maar dan na ontsluiting van alle zetmeel onder 
druk, wordt toegepast voor totaal zetmeel. Totaal zetmeel wordt 
bepaald volgens NEN 3574, zonder extraktie van in ethanol 40% (v/v) 
oplosbare s uikers . 
8122 . 3 
- 2 -
- 2 -
5 . Bereid het analysemonster overeenkomstig de richtlijnen vermeld 
in NEN 3328. 
Vermijd \'larmte-ont\o~ikkeling tijdens het malen zoveel mogelijk. 
6 . Reagentia en hulpstoffen 
Alle reagentia moeten van analysekwaliteit zijn. Gebruik 
gedestilleerd water of \'later van tenminste gelijke zuiverheid. 
6.1 Pancreatine (pancreaspoeder type C Diosynth of Merck nr . 7133). 
6 . 1.1 Bepaling van de aktiviteit van pancreatine (zie pag . 4). 
6.2 Buffer/zoutoplossing, pH 6,8. Los daartoe 3,631 g kaliumdi-
waterstoffosfaat (KH2P04), 4,750 g dinatriumwaterstoffosfaat 
(NazHP04.2H20)en 0,934 g NaCl op in 1 1 water. 
6.3 Klaringsoplossingen volgens Carrez. 
6 . 3.1 Carrez-I: Los 21,9 g zinkacetaat (Zn(CH3C00)2.2H20) en 3 g ijsa-
zijn op in \'later en vul aan tot 100 ml. 
6.3.2 Carrez-II: Los 10,6 g kaliumhexacyanoferraat (II) 
(K4Fe(CN)6 . 2H20) op in wate r en vul aan tot 100 ml. 
6.4 NaOH 4 m en 10 m. 
6 . 5 HCL ca. 8 m en 4 m. 
6 . 6 Fenolftalerne-indicator . 
7. Toestellen en hulpmiddelen 
Gebruikelijk laboratoriumglas\'lerk en hulpmiddelen en in het 
bijzonde r: 
- balans met een nauwkeurigheid van 1 rog . 
- schud\o~aterbad of een waterbad in combinatie met een magnetisch 
roerapparaat. 
- autoclaaf of hogedrukpan voor verhitting tot tenminste 120°C. 
8. Uitvoering 
8 . 1 Laat de buffer/zoutoplossing in een waterbad van 40°C + 1°C in 
ca. 20 min. op temperatuur komen. 
8122.4 
- 3 -
- 3 -
He eg af 1, 0 g van het monster op 1 mg nau\o~keurig en 400 mg 
pancreatine in een maatkolf van 250 ml. Voeg hieraan 50 ml van 
de voorverwarmde buffe r/zoutoplossing toe . 
Incubeer het mengsel in het waterbad onder voortdurende be,o~eging 
gedurende 30 minuten, gerekend vanaf het moment van toevoeging 
van de buffer/zoutoplossing. Breng de kolf over in een koud 
waterbad en voeg onmiddellijk 5 ml earrez- I-oplossing toe. Schud 
krachtig gedurende l minuut en voeg daarna 5 ml earrez-II-
oplossing toe. Schud weer 1 minuut. Laat de oplossing verder 
afkoelen. Neutraliseer met 4 m NaOH op fenolftalefne tot licht-
rose. Voeg druppelsgewijs 8 m Hel-oplossing toe tot kleuromslag 
en dan nog 2 druppels extra. Vul de tMatkolf met wate r aan tot 
de maatstreep en homogeniseer de inhoud. Filtreer door een 
vouwfilter . Verwerp het eerste deel van het filtraat en pipetteer 
vervolgens uit het heldere filtraat 25 ml in een erlenmeyer van 
100 ml. Voeg 3 ml 8 m Hel- oplossing toe en kook gedurende l~ uur 
aan een terugvloeikoeler . Laat de oplossing afkoelen, neutra-
liseer met 10 m NaOH tot licht-rose en vervolgens met 4 m Hel 
tot kleurloos. 
Spoel de inhoud van de erlenmeyer k\o~antitatief over in een 
maatkolf van 100 rul e n vul met water aan tot de maatstreep. Homo-
geniseer en bepaal de hoeveelheid glukose volgens Luff- Schoorl 
zoals bes chreven in NEN 3574. Voer een blanko bepa ling uit door 
aan 400 mg pancreatine 50 rul voorvenmrmde buffer/zoutoplossing 
toe te voegen en verder t e werken volgens bovenbeschreven wijze. 
9. Berekening 
8122.5 
Bereken het gehalte aan in vitro ve r t eerbaar ruw zetmeel uit : 
w = 0,9 (a-b) 10 • 102 . 102 
V. m. 103 
waarin: W is het gehalte aan in vitro verteerbaar ruw ze tmeel, 
in % (m/m); 
a en b is respektievelijk de afgelezen hoeveelheden glu-
kose uit de tabel voor de bepaling en de blanko; 
ru is afgewogen hoeveelheid analysemateriaal, in g; 
V is het voor de titratie gepipetteerde volume , in ml. 
- 4 -
- 4 -
Bereken op dezelfde wijze het gehalte aan totaal zetmeel, 
waarbij dezelfde blanko waarde gebruikt kan worden . 
Als A het gehalte in vitro verteerbaar zetmeel en B dat aan 
totaal zetmeel is, dan is ! x 100 de in vitro verteringscoëf-
ficiënt. B 
6.1.1 Bepaling van de activiteit van pancreatine . 
8122.6 
a. Definitie van de activiteit. 
Een eenheid pancreatine is die hoeveelheid enzymmengsel, 
die bij de proefomstandigheden (temp. 40°C, pH 6,8 ) gemiddeld 
per minuut 1A.Ullol maltose- equivalenten uit zetmeel volgens 
Zulkm.;rski vrijmaakt, gemeten over 30 minuten. 
b . Uitvoering 
Pipetteer in een maatkolf van 250 rol 10 ml zetmeel-oplossing 
(30 g per 1) en 50 rol voorverwarmde buffer/zoutoplossing . 
Incubeer het mengsel in het waterbad onder voortdurende 
bel.;reging gedurende 30 minuten, gerekend vanaf het moment van 
toevoeging van de buffer/zoutoplossing. Breng de kolf over in 
een koud lo7a terbad en voeg onmiddellijk 5 ml Carrez-I-
oplossing toe. Schud krachtig gedurende 1 minuut en voeg 
daarna 5 rol Carrez-II-oplossing toe. Schud l.;reer 1 minuut . 
Laat de oplossing verder afkoelen. Neutraliseer met 4 m NaOH 
op fenolftale'ine tot licht-rose. Voeg druppelsgel.;rijs 8 m Hel-
oplossing toe tot kleuromslag. Vul de maatkolf met water aan 
tot de maatstreep en homogeniseer de inhoud. Filtreer door 
een vouwfilter . Ven.;rerp het eerste deel van het filtraat en 
pipetteer vervolgens uit het heldere filtraat 25 rol in een 
maatkolf van 100 ml en vul met l.;rater aan tot de maatstreep. 
Homogeniseer en bepaal de hoeveelheid maltose volgens Luff-
Schoorl, zoals beschreven in NEN 37 54 . Voer gelijktijdig een 
blanka-bepaling uit met ge'inaktiveerd enzym (enzymmengsel 10 
minuten op 100°C verhitten). Het zetmeel volgens Zulkowski 
kan reducerende bestanddelen bevatten. 
Bijlage II 
Bepaling IX - amylase aktiviteit van pancreatine. 
Hiertoe '"erd 10 ml 3% zetmeeloplossing en 50 ml buffer ca. 20 min. 
voorver1o~armd in een maatkolf van 100 ml. 
Er 1o1erd 0,5 ml pancreatine oplossing toegevoegd (150 mg/250 ml 
buffer), waarna precies 30 min. 1o1erd ge'incubeerd. 
Hierna werd 1 ml Carrez I en 1 rol Carrez II toegevoegd en tegelijk 
gekoeld. Na aanvullen en affiltreren werd 25,00 rol filtraat volgens 
NEN 3574 met Luff afgewerkt en afgelezen op de maltose tabel. 
Er 1o1e rd ook een blanco bepaling verricht met ge'inakti veerd enzym. 
Uit het verschil van de bepalingen met aktief en inaktief enzym werd 
de aktiviteit berekend. 
Definitie: <X - amylase aktiviteit is de hoeve elheid,A.UUol maltose -
equivalenten '117elke per minuut worden vrijgemaakt uit zet-
meel volgens Zulkowski, gemeten over 30 minuten onder de 
proefomstandigheden (temp. 40°C pH 6,8) per rog enzym. 
8122.7 


Bepaling van het gehalte aan enzymatisch aantastbaar zetmeel in zetmeelrijke diervoedergrondstoffen

Abstract

Similar works

Full text

Available Versions

NARCIS

Wageningen Yield

Name not available

Name not available

NARCIS