Contexte: Le centrosome est un petit organite bien connu pour
son rôle dans l'établissement du fuseau bipolaire pendant la
division cellulaire. Les déficiences de la fonction du centrosome
donnent souvent lieu à des maladies humaines, y compris le
cancer et la formation de kystes rénaux. Nous sommes intéressés
à étudier la fonction d'une nouvelle protéine centrosomale
nommée CEP78, identifiée dans un criblage protéomique pour de
nouveaux composants centrosomaux. Méthodes et résultats : Le
traitement des cellules avec le nocodazole, un agent qui
dépolymérise spécifiquement les microtubules cytoplasmiques
mais pas les microtubules stabilisés du centrosome, a montré que
CEP78 est un composant centrosomal stable. La colocalisation de
cette protéine avec d'autres marqueurs centrosomaux tels que
CEP164, SAS6, Centrine, tubuline polyglutamylée et POC5, à
différentes phases du cycle cellulaire a indiqué que CEP78 est
précisément à l'extrémité distale des centrioles, mères et filles. Il
existe deux pointts CEP78 au cours de l’interphase et les cellules
passent par la mitose, procentrioles maturent, et le nombre de
points de CEP78 augmente à 4 par cellule et, à la fin de la
télophase chaque cellule fille possède 2 points CEP78. La
caractérisation des domaines fonctionnels de CEP78 a montré que
des répétitions riches en leucine sont nécessaires pour la
localisation centrosomale de la protéine. En outre, nous avons
constaté que la surexpression de CEP78 ne change pas le nombre
de mères/procentrioles mais diminue le nombre et l'intensité des
points de CEP170 (protéine d'appendice sous-distal) sans
diminution du niveau d'expression de cette protéine. D'autres
études ont montré qu'il n'y a pas d'interaction entre ces deux
protéines. Enfin, la surexpression de CEP78 protège des
microtubules contre la dépolymérisation en présence de
nocodazole, ce qui suggère qu'il possède la capacité de lier les
microtubules. Conclusion : Nos résultats suggèrent que CEP78 est
destiné à l'extrémité distale des centrioles matures par ses
répétitions riche en lecuine, où il pourrait être impliqué dans la
maturation ou la régulation de l'assemblage ou de la rénovation
de l'appendice sous-distal centriolaire, une structure connue dans
la nucléation des microtubules et d'ancrage. Comprendre la
fonction de Cep78 contribuera à éclaircir le rôle du centrosome
dans le cycle cellulaire.Background: The centrosome is a tiny organelle well-known for its
role in establishing the bipolar spindle during cell division. Defects
in centrosome function often give rise to human diseases
including cancer and kidney cyst formation. We are interested in
studying the function of one novel centrosomal protein named
CEP78, identified in a proteomic screen for novel centrosomal
components. Methods and results: Treatment of cells with
nocodazole, a microtubule-depolymerizing agent that specifically
depolymerizes cytoplasmic microtubules but not the stabilized
centrosome microtubules, showed that CEP78 is a stable
centrosomal component. Colocalization of this protein with other
centrosomal markers such as CEP164, SAS6, Centrin,
Polyglutamylated tubulin and POC5 at different phases of the cell
cycle indicated that CEP78 specifically localizes to the distal end of
the mother and daughter centrioles. There are 2 CEP78 dots
during the interphase and as the cells go through mitosis,
procentrioles mature, and the number of CEP78 dots increases to
4 dots per cell and by the end of telophase each daughter cell has
2 CEP78 dots. Characterization of CEP78 functional domains
showed that Leucine-rich repeats are necessary for centrosomal
localization of the protein. In addition, we found that
overexpression of CEP78 did not change the number of centrioles
and centrosomes but decreased the number and intensity of
CEP170 dots (sub-distal appendage protein) without a decrease in
the expression level of this protein. Further studies showed that
there is no interaction between these 2 proteins. Finally,
overexpression of CEP78 protects microtubules from
depolymerization in the presence of nocodazole, suggesting its
ability to bind microtubules. Conclusion: Our findings suggest that
CEP78 is targeted to the distal end of mature centrioles via its
lecuine-rich repeats, where it could be involved in centriolar
maturation or regulation of sub-distal appendage assembly
and/or remodeling, a structure known to nucleate and anchor
microtubules. Understanding the function of CEP78 will shed light
on the role of the centrosome in cell cycle
