博士論文 (Doctoral dissertation)doctoral thesi

396412

米田, 尚生

Japanese

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氏名(本籍)学位の種類学位授与番号学位授与日付学位授与の要件学位論文題目審 査 委 員米 田 尚 生(奈良県)博 士(医学)乙第 881号平成 5 年11月17 日学位規則第4条第2項該当Polymorasochain roaction法を用いた男子尿道炎患者の初尿からの仇ねm〝dね加¢ん0〝lαぬの検出(主査)教授 河 田 幸 道(副査)教授 江 崎 孝 行 教授 渡 辺 邦 友論 文 内 容 の 要 旨仇血mッ血加Cん0〝血ぶは男子の非淋菌性尿道炎の約半数を占める病原体である0その特異なライフサイクルから分離同定は剥離上皮細胞を材料とした細胞培養法により行われてきた｡近年C.抽C九omα亡よぶの検出には抗原の免疫学的な検出法や病原体に特異的なDNAの塩基配列を検出するDNAブロープ法などが開発されている｡しかし尿道炎診断においては尿道擦過物を検体とした診断法がはとんどであり,検体採取時に激しい痛みをともなう｡そこで特異性が高く,かつ高感度であるpolymerasechainreaction(PCR)法を応用したC･traChoTnatisの検出法を開発し,C.加Cんomα亡ね菌圭の少ないと考えられる尿道炎患者の初尿からのC.れC九omαとよぶの検出を試み,そのクラミジア性尿道炎の診断における有用性を検討した｡研究方法l.C.tTuChoTnatisDNAの検出には血清型L2のmajoroutermembraneprotein(MOMP)遺伝子の塩基配列の一部に相補的な2種類の01igonucleotideをprimerとして用い,PCR後,電気泳動を行い,塩基配列から予測されるDNAの増幅の有無を観察した｡2.基礎的検討として,本PCR法によるC.加Cんomαぬの特異性の検討,およびC.加Cんomα亡iぶの検出感度の検討を行った｡さらに尿沈造によるPCRの抑制に対して尿沈壇希釈液の検討を行った｡3.臨床的検討として,男子尿道炎患者53例を対象とし,尿道擦過物からのC.加Cんomα亡よぶ培養法と初尿からのPCR法によるC.'trtzchomatisDNAの検出結果の比較を行った｡さらに男子尿道炎患者100例を対象とし,初尿からのC.trachomatis抗原検出が可能なIDEIAクラミジアとPCR法との検出結果の比較を行った｡研究結果1.本PCR法により C.trachomatisの血清型15種すべてからDNAの増幅を認め,C･PSittaci,C･pneuTnOniaeを含めた他菌種からはDNA増幅を認めなかったdまた,C.trachoTnatislX102コのDNA圭まで検出可能であり,特異的で高感度であった｡2.尿沈壇をproteinaseKで処理したDNA溶液ではPCRの反応が抑制を受けるため,当初はフェノール処矧こよるDNAの純化が必要であった｡しかし初尿沈造をChlamydiazyme用検体希釈液に浮遊乱 proteinaseKで処理し,DNAを抽出することでPCR法の簡便化が可能となり,PCR法の臨床応用が可能となった｡3.尿道擦過物の培養法に対する本PCR法の比較では陽性一致率96.8%(30/31),陰性一致率90.9%(20/22),全体では94.3%であった｡また初尿からのIDEIA法に対するPCR法の比較では陽性一致率93.8%(30/32),陰性一致率95.6%(65/餓),全体で95%と高い一致率が得られた｡4.本法は初尿を検体とするため検休採取時に患者に苦痛を与えず,治療効果判定時や無症状患者のスクーリン97グにも応用可能である｡さらにPCR法は特異的なprimerを用いることにより,同一検体から淋菌など他の病原体をも検出可能であり,今後の臨床応用が期待される｡論文辛査の結果の要旨申請者米田尚生は,PCR法を応用したC.tmchoTnatisの検出法を開発し,さらに本PCR法による男子尿道炎患者の初尿からのC.打ⅦCんomαぬ検出法は従来の検出法と比較しても優れた特異性と感度を有し,クラミジア性尿道炎の診断に応用可能な方法であることを明らかにした｡本研究の成果は,クラミジア性尿道炎の診断法に新知見を加えたものであり,泌尿器科学および感染症学の発展に少なからず寄与するものと認められる｡[主論文公表誌]Polymerase chain reaction法を用いた男子尿道炎患者の初尿からの仇IaTnydia tnchoTnatisの検出岐阜大医紀 41(4):692･-703,199398

Polymerase chain reaction 法を用いた男子尿道炎患者の初尿からの Chlamydia trachomatis の検出

https://gifu-u.repo.nii.ac.jp/record/69577/files/350881.pdf

Polymerase chain reaction 法を用いた男子尿道炎患者の初尿からの Chlamydia trachomatis の検出

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