Se examinan 60 muestras de agua provenientes de 30 sitios del territorio salvadoreño donde se ubican reservorios de agua utilizados por la población de cada muestra incluyó: fecha de colecta, ubicación del lugar, toma de superficie o profundidad, y condición clorada o no clorada. Se sedimento cada muestra y éste se estudio entre lámina y laminilla, utilizando objetivos 10X y 40X del microscopio, en busca de formas móviles de amibas

Castillo de Mena, Marta Esperanza

Cerna de López, Mirna Maricely

Portillo de Juarez, Alexandra Manoela

Rosales Quintanilla, Rogelio Isaac

Santos Herrera, René Guillermo

Torres de Castillo, Elia Gicela

Crea Ciencia Revista Científica

Repositorio Digital de la Ciencia y Cultura de El Salvador REDICCES

6CREA CIENCIAARTÍCULOS ORIGINALESMarta Esperanza Castillo de Mena 1René Guillermo Santos Herrera 2Mirna Maricely Cerna de López 3Elia Gicela Torres de Castillo 4Alexandra Manoela Portillo de Juarez 5Rogelio Isaac Rosales Quintanilla 6 1 Licenciada en Laboratorio Clínico. Universidad de El Salvador. 1982; Master en Administración y Docencia Universitaria. Universidad Evangélica de El Salva-dor.1992. Comentarios: martamena4@gmail.com2 Doctor en Medicina. Universidad Evangélica de El Salvador. 2003; Master en Docencia Universitaria. Universidad Evangélica de El Salvador.2007.3 Licenciada en Laboratorio Clínico. Universidad de El Salvador.1985.4 Doctor en Medicina. Universidad Evangélica de El Salvador.2004; Master en Docencia Universitaria. Universidad Evangélica de El Salvador.2010.5 Doctor en Medicina. Universidad Evangélica de El Salvador.2004; Master en Parasitología. Instituto Pedro Kouri. Habana Cuba.2007; Master en Docencia Universi-taria. Universidad Evangélica de El Salvador.6 Doctor en Medicina. Universidad de El Salvador.2007.RESUMENEn este trabajo se examinaron 60 muestras de agua provenientes de 30 sitios del territorio salvadoreño donde se ubican reservorios de agua utilizados por la población para su diversión. La identificación de cada muestra in-cluyó: fecha de colecta, ubicación del lugar, toma de superficie o profundidad, y condición clorada o no clorada. Se sedimentó cada muestra y éste se estudió entre lámina y laminilla, utilizando ob-jetivos 10X y 40X del microscopio, en busca de formas móviles de amibas. Adicionalmente, del se-dimento se sembraron cuatro placas de agar-agar sembradas con Escherichia coli vivas o muertas. Los cultivos se examinaron utilizando objetivo 4X del microscopio. De las colonias se realizaron prepa-raciones al fresco y se observaron al microscopio con objetivos de 10X y 40X. A las preparaciones que mostraron trofozoitos de amibas se les fijó con PVA (alcohol poli vinílico)  y les tiñó con coloración tricrómica. Se consideraron AVL (amibas de vida libre) los trofozoitos que presentaron dos o más de estas características: tamaño de 13 a 30 micróme-tros, seudópodos redondeados, y núcleo con un cariosoma prominente rodeado por un halo claro. Se encontraron AVL en dos muestras de agua to-madas del fondo de piscinas con agua clorada, y en una muestra tomada del fondo de otra piscina de agua no clorada.Palabras clave: Amibas de vida libre (AVL), reser-vorios de agua, piscinas cloradas, pozas naturales, piscinas no cloradas, El Salvador.Amibas de vida libre en pozas, piscinas y lagos de El SalvadorAmibas de vida libre en pozas, piscinas y lagos de El SalvadorCastillo de Mena, Marta Esperanza, Santos Herrera, René Guillermo, Cerna de López, Mirna Maricely, Torres de Castillo, Elia Gicela, Portillo de Juarez, Alexandra Manoela, Rosales Quintanailla, Rogelio Isaac CREA CIENCIA77ARTÍCULOS ORIGINALESINTRODUCCIÓNExisten AVL (amibas de vida libre) que son proto-zoos del grupo Rhizopodos del orden amoebida (Acanthamoeba) y del orden Schizopyrenida (Nae-gleria y Balamuthia) que viven en la naturaleza 1 y están distribuidos mundialmente en diferentes reser-vorios de agua como pozas 2,3, piscinas, estanques, ríos, aguas salobres, aire4 etc.Estas AVL, son llamadas anfizoicas, porque son ca-paces de vivir en la naturaleza y actuar como pa-rásitos en el humano, produciendo infecciones que revisten mucha seriedad. Beltrán de Estrada2 hace mención que Fowler y Carter en 1965 fueron los pri-meros en descubrir la patogenicidad de las amibas de vida libre, al describir una infección fatal de me-ningoencefalitis por Naegleria fowleri en un austra-liano5 En el año de 1974 se han descrito casos de queratitis con úlcera corneal en pacientes que usan lentes de contacto6. En año 2001 se reportó un caso de infección cerebral por género Sappinia4.Las AVL pueden atacar el sistema nervioso central produciendo meningoencefalitis amibiana primaria (MAP) por el género Naegleria; encefalitis granulo-matosa amibiana (EGA) por los géneros Acantha-moeba, Balamuthia y Sappinia; además, a Acantha-moeba y Balamuthia se les ha relacionado con lesiones oculares como queratitis y úlceras cornéa-les, así como lesiones primarias de la piel 3,4.El género Naegleria produce cuadros de encefa-litis, con elevada mortalidad en personas jóvenes con antecedentes de zambullirse en piscinas o en aguas temperadas, lo que provoca la entrada de las AVL a través de la lámina cribosa del etmoides7,8, El género Acanthamoeba afecta principalmente a pacientes inmunocomprometidos y puede provocar meningoencefalitis granulomatosa, precedida de manifestaciones respiratorias sin estar expuesto a aguas contaminadas 9,10.Los casos de pacientes con problemas de menin-goencefalitis y queratitis están distribuidos por todo el mundo. Muchos de estos casos han tenido en común haber nadado en pozas, piscinas u otro re-servorio de agua templada2,1,11,12,7, de ahí la impor-tancia de determinar si esos reservorios de agua en El Salvador, están contaminados con éste tipo de amibas de vida libre.En El Salvador existen todas las condiciones epi-demiológicas necesarias para que se desarrollen estos tipos de AVL2,1,13,14, además ha habido poca difusión de estas patologías de etiología amibiana y cuando ocurren casos, como los antes menciona-dos, no se piensa que pueden ser causados por estos microorganismos, dificultando el diagnóstico y, por lo tanto, el tratamiento oportuno1. Esta situación de poco conocimiento dio origen a la inquietud de realizar este estudio, de carácter exploratorio, con el único objetivo de determinar si hay presencia de AVL en el agua de reservorios utilizados por la po-blación salvadoreña para diversión y esparcimiento.METODOLOGÍALas muestras de agua se colectaron de forma alea-toria y de acuerdo con el mapa de El Salvador, que ubica los diferentes lugares en que se encuentran los reservorios de agua, utilizados por la pobla-ción para recreo y esparcimiento (figura No.1) .Se analizaron 30 reservorios de agua, de las cuales se colectaron 60 muestras. Las muestras se colecta-ron en frascos de vidrio con capacidad de 1,000 ml, tapadera de rosca, previamente esterilizados. Para muestras de agua de superficie, se destapó el fras-co e inmediatamente se sumergió a una profundi-dad aproximada de diez centímetros permitiéndole llenarse a su capacidad. Se retiró, se colocó la ta-padera, sé enviñetó y se identificó indicando: fe-cha de la colecta, ubicación del reservorio, tipo de muestra (superficie o profundidad), agua clorada o no clorada.Revista CREA CIENCIA Año 7, Nº 11 ISSN 1818-202XUniversidad Evangélica de El Salvador 8CREA CIENCIAEn forma similar, se colectaron las muestras de profun-didad, con la diferencia que se sumergió el frasco a una profundidad aproximada de uno a dos me-tros15, las muestras se llevaron al laboratorio para su estudio, dentro de la mayor brevedad que permitió la ubicación del lugar de dónde se obtuvieron las muestras.Estudio de las muestras de aguaEn todo momento se tuvo el cuidado de proteger las muestras de agua de la contaminación ambien-tal. Las muestras se dejaron sedimentar durante toda la noche, se decantó el sobrenadante y se conser-vó el sedimento. Del sedimento de cada muestra, se realizaron cuatro preparaciones directas al fresco entre lamina y laminilla y se observaron al microsco-pio con objetivos 10X y 40X5,16; además se inocu-laron cuatro gotas de sedimento en cada una de cuatro placas de agar-agar, previamente sembra-das con Escherichia coli vivas o muertas. Dos placas fueron incubadas a 37°C y las otras dos a 42°C. Se examinaron los cultivos cada 24 horas, bajo el microscopio de luz a un aumento de 4X o con una lupa estereoscópica, hasta por siete días.En los cultivos que mostraron resultados positivos se observaron colonias de amibas, las cuales fueron purificadas pasando una colonia de ellas a una nueva placa de agar-agar, preparada como las anteriores. Este proceso se repitió hasta obtener colonias puras, lo cual se alcanzó en aproximada-mente 30 días17,2,16 .Se realizó un lavado con solución de Page´s a la superficie de los cultivos positivos y se hizo una pre-paración directa al fresco de dicho lavado, la cual fue observada al microscopio con objetivos de 10X y 40X. Cuando se observaron trofozoitos de amibas en las preparaciones, se les quitaron las laminillas a las preparaciones, se les fijó con PVA (alcohol polivinili-co) se les tiñó con coloración tricrómica6, 17, 2, 3 para observar sus características morfológicas y determinar si son las típicas de las AVL.Si el trofozoito observado presentó dos o tres de éstas características: a) tamaño de 13 a 30 micró-metros, b) seudópodos redondeados y c) núcleo con un cariosoma prominente rodeado por un halo claro, se concluyó que dicho trofozoito correspon-día a uno de AVL.RESULTADOSTabla 1. Presencia de AVL en pozas, piscinas y lago.Reservorio de AguaNúm. muestras tomadasNúm. muestras positivasTipo de muestraEstadio del parásito6 Pozas naturales120 Superficie --------0 Fondo --------14 Piscinas(cloradas)280 Superficie --------2 Fondo Trofozoito9 Piscinas naturales (no clorada)180 Superficie --------1 Fondo Trofozoito1Lago 20 Superficie --------0 fondo --------Total 30 60 3Tabla 2. Porcentaje de positividad a AVL en muestras de aguas pro-venientes de diversos reservorios.Núm. de reservoriosNombre del reservorioPorcentaje de reservorios positivos a AVLPorcentaje de reservorios negativos a AVL6Pozas naturales(no cloradas)0.00 100.0014 Piscinas cloradas 14.28 85.729Piscinas naturales(no cloradas)11,10 88.901 Lago 0.00 100.00Tabla 3. Porcentaje de positividad al AVL en reservorios de aguas con fines recreativos.Total de reservorios de agua (pozas, piscinas y lago)Positivas a AVL Negativas a AVL30 3 27100% 10% 90%Amibas de vida libre en pozas, piscinas y lagos de El SalvadorCastillo de Mena, Marta Esperanza, Santos Herrera, René Guillermo, Cerna de López, Mirna Maricely, Torres de Castillo, Elia Gicela, Portillo de Juarez, Alexandra Manoela, Rosales Quintanailla, Rogelio Isaac CREA CIENCIA99Tabla 4. Porcentaje de positividad al AVL en reservorios de aguas encontrados en los departamentos estudiados.DepartamentoNúm. de reservorios de agua estudiadosNúm. de reservorios de agua positivos a AVLPorcentaje positividad a AVL por DepartamentoLa Libertad 9 3 33%La Paz 3 0 0Santa Ana 9 0 0San Salvador 5 0 0San Vicente 4 0 0 Figura 1. Mapa de ubicación de los reservorios de agua.Muestras tomadas    Muestras positivas a AVL DISCUSIÓNEste estudio mostró que hay presencia de AVL en algunos reservorios de agua, advirtiendo que di-cha presencia es poca. Cabe señalar que la ubi-cación de las AVL fue únicamente en aguas pro-fundas, posiblemente por la diversidad de factores que intervienen en su biología, y que condicionan su lugar de hábitat. Algunos de estos factores son: tipo de recirculación del agua, material utilizado para la construcción de la piscina y tiempo de uso, frecuencia con que acuden los bañistas y acúmu-lo de substancias orgánicas de diversos orígenes. No se tiene una clara explicación para el hecho de encontrar, aunque mínimo, un mayor porcentaje de presencia de AVL en aguas previamente clora-das que en aguas no cloradas. Sin embargo, debe indicarse que en la literatura se menciona que los agentes desinfectantes como el cloro son eficaces para disminuir la población bacteriana y micotica, pero no existe una definición inequívoca sobre el efecto que dichos agentes producen en la pobla-ción amibiana, y otros protozoarios.CONCLUSIONESDe este estudio se puede afirmar lo siguiente:1. Se encontró presencia de AVL en tres de treinta reservorios estudiados2. La presencia de AVL en el agua de reservorios para uso recreativo de la población, no fue generalizada en el país, sino únicamente en el departamento de La Libertad.3. La cloración de las aguas de balnearios, no es garantía absoluta para eliminar la presencia de AVL.RECOMENDACIONESEntre las recomendaciones sugeridas a partir de la investigación, están las siguientes:1. Sugerir a los diferentes centros de estudio e investigación, la realización de trabajos simila-res al presente a fin de determinar, el género y la especie de las AVL que se encuentren. Esto permitirá establecer si las AVL detectadas, tie-nen correspondencia con aquellas que otros autores, en diferentes países, han encontrado y las han relacionado con patologías como la meningoencefalitis y úlceras de la córnea.2. Se recomienda a las autoridades del Ministerio de Salud Pública y Asistencia Social, elaborar y difundir entre la población, las medidas de pre-vención del caso, para personas que utilizan diferentes reservorios de agua como diversión y esparcimiento.3. Adicionalmente la información que arriba se menciona contribuiría a optimizar el conoci-miento de las patologías ocasionadas por AVL, su diagnóstico, tratamiento oportuno y preven-ción para las personas que hacen uso de estos reservorios.AGRADECIMIENTOSA las autoridades de la Universidad Evangélica de El Salvador, por su apoyo incondicional para Revista CREA CIENCIA Año 7, Nº 11 ISSN 1818-202XUniversidad Evangélica de El Salvador 10CREA CIENCIA10llevar a cabo este estudio. A las autoridades de cada lugar de donde se recolectaron las muestras de agua. Al Dr. Efraín Mena, por la asesoría técnica brindada, y a la Dra. Elizabeth Pérez, por su impor-tante apoyo, durante el proceso de investigación.REFERENCIAS1. Botero, D. y Restrepo, M. Parasitosis Humanas. 3ª ed. Colom-bia. Corporaciones biológicas. C.I.B.1998.2. Cubero Menéndez, O. y Cubero Rego, D. Meningoence-falitis amebiana primaria. Reporte de un caso. V Congreso Virtual Hispanoamericano de anatomía Patólogica.UNI-NET.2002.3. Gallegos Neyra, EM. Las peligrosas amebas. Investigación y desarrollo. Universidad Nacional Autónoma de México 2002.4. Schuster F, Visvesvara G. Free-living amoebae as oppor-tunistic and non-opportunistic pathogens of humans and animals. Int J Parasitol;34:1001-27.2004.5. Beltrán de Estrada, M. Y Uyema, TN. Amebas de vida li-bre en muestras de agua de piscinas del departamento de Lima. Rev. Perú. Med. Exp. Salud Pública. Ene/jul, vol.14, No.1, p.29-33. ISSN 1726-4634.1997.6. 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Balamuthia mandrillaris, an opportu-nistic agent of granulomatous amebic encephalitis, infects the brain via the olfactory nerve pathway. Parasitol Res; 94-52.2004.10. Narván Soto, Joaquin. Encefalitis amebiana primaria granu-lomatosa. Diagnostico (Peru); 35(2): 13-19.1996.11. Visvesvara GS, Balamuth W. Comparative studies on rela-ted free-living an pathogenic amebae with special refe-rence to Acanthamoeba J. protozool; 22: 245-56.1975.12. Primary amebic meningoencephalitis. North Carolina, MMWR; 41(25): 437 – 440.1992.13. Muñoz, V., Reyes, H., Toche, P. Cárcamo, CY Gottlieb, B. Ais-lamiento de amebas de vida libre en piscinas públicas de Santigo de Chile. Parasitol. Latinoam. 58; 106-111.2003.14. Visvesvara GS, Stehr-Green JK. Epidemiology of free-living ameb infections. J protozool. jul – aug; 37 255-335.1994.15. Casero, R.D. Amebas patógenas de vida libre. Infect. Micro-biol. Clin; 6(4): 107-13.1994.16. Barrio, B., Pereda Soriano. M., Minués Muro, E., Cristóbal Bescós, J. 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Cap 33, en parasitología clínica de Atias – Neghme, tercera edición Mediterráneo Ltda.. Santiago de Chile 1991.22. Gualdo Neves, MG., Bonasse, J., Wilson Castro, E.Encefalitis amebiana granulomatosa en una paciente no inmuno-comprometida. Arch. Med. Interna (Montevideo); 18(4): 171-4.1996.23. Intalapaporn, P., Suan Kratay, C.,Shuangshoti, S., Phantum-chianda, K., Keelawat, S., Wilde, H. Balamuthia mandrillaris meningoencephalitis: the first case in southeast Asia. Am. J. Trop. Med. Hyg; 70(6): 666-9.2004.24. Reyes, E., Herrera, M., Alvarado, QFB., et al. (1997). Infec-ción por amebas de vida libre. Reporte de un caso. Rev: Hosp... Jua. Mex 64(4). 68-69. Primary amebic meningoen-cephalitis. Georgia . MMWR. 52(40); 692-964.2003.25. Se M. Human pathology caused by free-living amoebae. Ann Ist Super Sanita. 33: 551-66.1997.26. Schuster, FL. Cultivation of pathogenic and opportunistic free-living amebas. Clinical Microbiology Reviews. 15(3); 342-354.2002.27. Uribarren, Berrueta. Naegleriotosis, Acanthamoebosis, Ba-lamuthiosis. Depto. de Microbiología y Parasitología. Fac.Med. UNAM, México DF.2004.Figura:1. Disponible en: www.viajejet.com Directorio: URL:http//mapa-de-el-salvador/mapa-san-salvador-y-sus-departamentos con-sultado el 2 de abril de 2010.Amibas de vida libre en pozas, piscinas y lagos de El SalvadorCastillo de Mena, Marta Esperanza, Santos Herrera, René Guillermo, Cerna de López, Mirna Maricely, Torres de Castillo, Elia Gicela, Portillo de Juarez, Alexandra Manoela, Rosales Quintanailla, Rogelio Isaac 

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En este trabajo se examinaron 60 muestras de aguas provenientes de 30 sitios del territorio salvadoreño donde se ubican reservorios de agua utilizados por la población para su diversión. La identificación de cada muestra incluyó: fecha de colecta, ubicación del lugar, toma de superficie o profundidad, y condición clorada o no clorada

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