University of Yamanashi (山梨大学)博士(医学)医工博4甲第204号thesi

23405

松澤, 高光

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University of Yamanashi Academic Repository

学 位 論 文 内 容 の 要 約   氏名   松澤 高光                   論文題目 Immunological function of Langerhans cells in HIV infection     （HIV感染におけるランゲルハンス細胞の免疫学的機能） 学位論文内容の要約  （研究の目的） 粘膜・皮膚表皮内ランゲルハンス細胞（以下LC）は、HIVの初期標的細胞の一つであり、所属リンパ節に遊走しHIVをCD4陽性T細胞に伝播しHIV播種に関わっている。 一方、HIV感染においてHIV特異的CD8陽性T細胞や制御性T細胞（以下Treg細胞）はHIV感染の進行を抑制することにおいて重要な役割を担っており、LCと同じくHIV感染標的細胞の一つである樹状細胞（以下DC）によるそれらの細胞の誘導能に関しては報告が散見される。しかしながら、LCがHIVに感染後、どのように免疫を調節するかは現在まで明らかにされていない。 我々はLCがHIVに感染後、HIV特異的CD8陽性T細胞を誘導し、さらにTreg細胞の誘導能が変化することで抗HIV免疫応答を調節すると考えており、この仮説を実証するため以下の実験を行った。  （方法）  本研究においてLCとして、採血検体から分離したヒト単球をGM-CSF/IL-4/TGF-β存在下で培養し作製した単球由来LC-like DC（以下mLC）と、ヒト表皮水疱蓋より得た表皮シートから培養液へ遊走した表皮LCを用いた。コントロールとしてヒト単球をGM-CSF/IL-4存在下で培養し作製した単球由来DC（以下mDC）を用いた。  1. Naive CD8陽性T細胞をHIV曝露自己mLC、mDCと共培養後、HIV曝露mLC、mDCによるHIV抗原特異的CD8陽性T細胞誘導能をHIVgagテトラマー染色によりフローサイトメトリーを用い比較検討した。  2. Naive CD8陽性T細胞をHIV曝露自己mLC、mDCと共培養後、各々分離した CD8 陽性 T 細胞によるHIV抗原特異的IFN-γ産生能をHIV抗原刺激下にてIFN-γELISPOT assayを用い比較検討した。一方、共培養後誘導されるHIV抗原特異的CD8陽性T細胞のIFN-γ産生能を、PMA/ionomycin刺激後にHIVgagテトラマー染色、IFN-γ染色によりフローサイトメトリーを用い比較検討した。  3. Naive CD8陽性T細胞をHIV曝露自己表皮LCと共培養後、HIV曝露表皮LCによるHIV抗原特異的CD8陽性T細胞誘導能をHIVgagテトラマー染色によりフローサイトメトリーを用い検討した。さらに、誘導されるHIV抗原特異的CD8陽性T細胞のIFN-γ産生能をHIVgagテトラマー染色、IFN-γ染色によりフローサイトメトリーを用い検討した。  4. Naive CD4陽性T細胞をHIV非曝露、HIV曝露自己mLCと共培養後、HIV非曝露、HIV曝露mLCによるTreg細胞誘導能を比較検討した。表皮LCでも同様の実験を行った。  学位論文内容の要約（続紙）         氏名   松澤 高光             5. HIV非曝露、HIV曝露mLCにより誘導されたTreg細胞をallo-MLR cultureに様々な比率で加えin vitro suppression assayを行い、Treg細胞のT細胞増殖抑制能を比較検討した。  6. HIV非曝露、HIV曝露mLCにより誘導されたTreg細胞のIL-10, TGF-βなどの抑制性サイトカインやPD-1, ICOS, CTLA-4, CD39, GITR, HVEMなどの抑制性分子の発現をフローサイトメトリーを用い比較検討した。  7. HIV曝露mLCにより誘導されたTreg細胞のHIV感染の有無をHIVp24染色によりフローサイトメトリーを用い検討した。  （結果） mLC、表皮LCはHIV感染後、IFNγ産生能を有するHIV特異的CD8陽性T細胞を誘導した。さらに、mLCはmDCより有意にHIV特異的CD8陽性T細胞を誘導した。 一方、mLC、表皮LCはHIV感染後、effector Treg細胞誘導能が低下した。mLCのHIV感染の有無に関わらず誘導されるTreg細胞のT細胞増殖抑制能は同等であり、さらに誘導されるeffector Treg細胞上の抑制性サイトカイン/分子の発現も同等であり一貫した結果が得られた。 誘導されるTreg細胞はHIV感染していなかった。  （考察） 現在までにHIV、CMV、EBV、influenza virusなど種々のウイルス感染において、ウイルス特異的T細胞によるIFN-γ産生と 51Cr-release assayにおける細胞傷害性活性が相関すると報告がある。また近年、ヒトFoxp3陽性T細胞をeffector Treg細胞、naive Treg細胞、non Treg細胞に再分類する方法が報告され、effector Treg細胞が最も強い抑制能を有する。 本研究において、LCはHIV感染後、DCよりも強力な抗HIV免疫応答を惹起し、さらに、effector Treg細胞誘導能が低下することでより強力な抗HIV免疫応答が惹起されることが示唆された。 effector Treg細胞の低下はHIV感染が原因ではないことが示唆された。  （結論） HIV感染後LCによる抗HIV免疫応答の誘導は新しい知見である。LCはHIVの初期標的細胞の一つである一方で、強力な抗HIV免疫応答を惹起し、HIV感染の進行を抑制し後天性免疫不全症候群の発症を遅延させている可能性がある。この新知見を取り入れたワクチン開発も期待できる。   

Immunological function of Langerhans cells in HIV infection

https://yamanashi.repo.nii.ac.jp/record/4535/files/Summary_2017KD4_204.pdf

Immunological function of Langerhans cells in HIV infection

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