Avaliação da atividade citotóxica in vitro do óleo de rã-touro (Rana catesbeiana Shaw) frente ao câncer de pele

Abstract

Bullfrog oil, an animal oil extracted from the adipose tissue of Rana catesbeiana Shaw, showed promising cytotoxic activity against melanoma cells and, therefore, potential to become a pharmaceutical active compound. However, there is a lack of information regarding the pathways involved its pharmacological activity. Thus, the aim of this study was to investigate and elucidate the cytotoxic effect of this oil against human melanoma cells (A2058). The cytotoxic potential was evaluated by the MTT assay, the cell cycle analysis and the cell death assay. In addition, the apoptotic potential was investigated by (i) the DNA fragmentation using propidium iodide (PI) staining analysis, (ii) the evaluation of mitochondrial membrane potential and (iii) the determination of intracellular reactive oxygen species (ROS) level. The results showed that the bullfrog oil was able to promote a time-dependent cytotoxic effect, decreasing cell viability in 38 % after 72 hours of treatment without affecting the cell cycle. Additionally, the bullfrog oil induced the apoptosis in A2058 cells, increasing up to 50 ± 13 % the intracellular ROS level, maintaining the DNA integrity and promoting an approximate decrease of 35 ± 5 % in the mitochondrial membrane potential. It can be concluded that the in vitro cytotoxic effect of the bullfrog oil in human melanoma cells is mediated by oxidative stress that induces mitochondrial dysfunction, triggering the apoptosis. These unprecedented results highlight the pharmacological potential of bullfrog oil and provide important information to support studies on the development of new pharmaceutical products for complementary and alternative treatments for melanoma.O óleo de rã-touro (OR) é um óleo animal obtido a partir do reaproveitamento biotecnológico do tecido adiposo do anfíbio Rana catesbeiana Shaw e que apresenta biocompatibilidade frente à fibroblastos murino (3T3) e toxicidade em células de melanoma murino (B16F10). Baseado nisso e na atual necessidade de novas alternativas de tratamento contra o melanoma, esse trabalho teve como objetivo avaliar a potencial atividade citotóxica in vitro do OR in natura frente à linhagem celular de melanoma humano A2058. Assim, foram realizados os ensaios de avaliação da atividade mitocondrial (MTT), ciclo celular e morte celular para avaliar o atividade citotóxica do OR, enquanto que o potencial apoptótico foi investigado por meio da avaliação de alterações na morfologia celular, pelo potencial de membrana mitocondrial e avaliação da indução de estresse oxidativo. Os resultados obtidos demonstram que o OR (100 µg/mL) após 72 horas foi capaz de reduzir a atividade mitocondrial em 40 ± 9 % no ensaio de MTT. Adicionalmente, no ensaio de morte celular foi verificado que a citotoxicidade do OR está relacionada à indução de apoptose sem interferências no ciclo celular. Além disso, foi verificado que o processo apoptótico pode ter sido estimulado pela capacidade que o OR apresentou em induzir o estresse oxidativo, visto que foi capaz de aumentar em 51 ± 13 % os níveis intracelulares de espécies reativas de oxigênio, gerando, desta forma, uma redução do potencial da membrana mitocondrial (35 ± 5 %). Finalmente, os resultados obtidos nos permitiram elucidar, pela primeira vez, uma das vias de citotoxicidade do OR, a qual está relacionada a indução de estresse oxidativo intracelular associado a danos mitocondriais, resultando, assim, na indução da apoptose. Assim, estes resultados evidenciam potencial citotóxico do OR e permitem sugerir que este óleo pode vir a ser utilizado como matériaprima bioativa no desenvolvimento de novas alternativas de tratamento contra o câncer de pele.2020-05-1