CFTR通过调控二磷酸腺苷受体P2Y₁₂影响血小板活化

Abstract

目的二磷酸腺苷受体P2Y12介导的血小板活化是血小板活化及血栓形成的核心机制，本研究探讨囊性纤维化跨膜转导调节子（CFTR）对P2Y12介导的血小板活化的影响。方法应用8~16周龄CFTR全基因敲除（Cftr-/-）小鼠及野生型（Cftr+/+）小鼠，分别制备胶原蛋白和肾上腺素诱导的肺栓塞小鼠模型。分离Cftr-/-和Cftr+/+小鼠外周血的血小板， 采用免疫印迹技术检测P2Y12、PI3K以及AKT 总蛋白及磷酸化蛋白的表达。采用二磷酸腺苷（ADP）孵育人巨核细胞株Meg-01，检测ADP对CFTR和上述蛋白表达的影响。进一步应用特异性CFTR氯通道抑制剂CFTRinh-172与Meg-01细胞共孵育，检测其对CFTR和上述蛋白表达的影响。结果与Cftr+/+小鼠肺栓塞模型组相比，Cftr-/-鼠肺栓塞组织切片栓塞显著增加。Cftr-/-显著增加小鼠外周血血小板P2Y12、磷酸化PI3K和AKT 蛋白表达。P2Y12全基因敲除小鼠血小板CFTR蛋白表达无明显改变，上述结果提示CFTR负性调控P2Y12维持正常血小板活化功能。Meg-01细胞实验结果表明 ADP浓度依赖性地诱导Meg-01细胞P2Y12蛋白和PI3K以及AKT蛋白磷酸化增高，而CFTR蛋白表达水平逐渐降低。CFTR 特异性阻断剂CFTRinh-172显著诱导Meg-01细胞P2Y12蛋白表达增高。结论本研究揭示了血小板活化的一个新机制，即CFTR通过调控血小板P2Y12蛋白表达影响血小板活化