改良的 Trizol 法提取小鼠皮肤 RNA 技术

Abstract

【目的】由于皮肤组织韧性强且存在大量RNA酶，采用经典Trizol法提取的RNA存在易降解质量低等不足。因此，本研究旨在通过改良的Trizol法实现高质量的皮肤RNA提取。【方法】采用不同处理方式（Tri：Trizol包埋；Pro：RNA样本保护液包埋；Cry：先冷冻液氮再冷冻-80℃冰箱；LNG：液氮研磨；Cut：采用剪刀剪碎组织）提取的小鼠正常皮肤RNA为实验组；脊髓组织作为参照组，并以咪喹莫特（IMQ）诱导的小鼠银屑病模型皮肤组织作为保真性验证组。我们采用紫外分光光度法、琼脂凝胶电泳法、定量逆转录PCR法（qRT-PCR）等方法来检测经典Trizol法（1-Tri，Nor）和改良Trizol法（2-Tri，LNG-Tri，Tri-Cut，Pro）提取的RNA浓度、纯度和完整性以及IL-1β mRNA表达的差异性情况。【结果】①与脊髓组织相比，经典Trizol法（1-Tri）获得的正常皮肤组织总RNA量要低，DNA污染和5SRNA条带明显，IL-1β mRNA相对表达偏高，说明经典Trizol法在皮肤组织中提取RNA存在局限性，需要进行改良。②在不同小鼠皮肤样本处理组中，改良的2-Tri法和LNG-Tri法获得的RNA浓度更高，同时RNA降解、DNA污染更低，IL-1β mRNA表达更接近正常水平。更重要的是，在小鼠银屑病模型中，2-Tri法提取的RNA样本能真实反映出正常皮肤与银屑病变皮肤之间IL-1β mRNA的变化趋势。【结论】改良的2-Tri或LNG-Tri法分离的总RNA质量好，能可靠地反映生理或病理条件下的mRNA表达模式