本文用统计学方法,对相同人和不同人的血清痕之交叉免疫电泳泳谱的分析,比较,结果发现;相同人之1日血清痕与不同人10日血清痕之交叉免疫电泳泳谱的变异系数分布无明显重叠,故可进行个人识别

王松

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中山医科大学学报 18 98年第 9卷第 1期交叉免疫电泳对血清痕进行个人识别的实验研究王 松 郭景元(法 医 系 )提要 本文用统计学方法,对相同人和不 同人的血清痕之交叉免疫 电泳泳谱的分析,比 较,结果发现 , 相同人 之 1 日血清痕与不同人 10 口血清痕之交叉免疫电泳泳谱的变异系数分布无明显 重叠,故可进行个人识别。关键词 个人识别 血清痕 交叉免疫电泳血痕的个人识别是法医学实践中最重要的课题之一。目前应用的诸多血型系统都只能进行排除,而交又免疫电泳具有很多优点,用于个人识别大有前景。本实验以血清痕为标本,探讨此法用于个人识别的可能性,为血痕的个人识别打下基础。r十 , 气̀``一一一~ ~_ _二~ 。 “1{}材 杆 与 方 法由我校保健科波一附院血库采 134 名 ( 男98 人,女 36 人 ) 正常人血,年龄为 18 岁 至 43岁。静脉取血,不加抗凝剂,待析出血清后,吸取 o.l m l,滴于滤纸上,任其自然扩 散,干燥。如此标本在24 小时内不使用,便放入硅胶瓶内室温干燥 ( 地下室常温18 ℃ )。使用时,于斑痕近中央部取 ICm“ ,剪 成 碎 屑,放入试管,加 5 0林性理盐水,离心 1 0~ 2 0分钟,得其上清液备电泳用。电极缓冲液的配制: ( p H S.6 )巴比妥纳 1 2.3 7克巴比妥 2.4 68 克蒸馏水 1.0 0 毫升胶缓冲液为将 电极缓冲液稀释一倍。电泳:根据 L a u r e l l 方法稍加改动。用 1%的琼脂糖制 7.5只 6.S X O.1 5 Cm 的胶板,然后在胶板一端 1.s c m 处的中线两侧各打一直径为4m m的孔 〔见图 I A ),分别加入两比较对象匕仪口图 1 交又免疫电泳的样本 20 口以及嗅酚盐 1旧,然后 在 4 ℃,s v /cm 的条件下进行第一向电泳。电泳 1 小 时左右,至结合了白蛋白的嗅酚蓝移动 4Cm为止。取出后按图 1 所示虚线 割 胶,留 取 6.5 x l.5x o.1 5c m的含样品部分之胶板,然后分别将它们移至另外两块玻璃板上。将含样品胶板放在玻璃板的阴极端,另取 3.75 m l l % 的琼脂糖,待其冷却至 50 ℃时,加入。.65 m l 兔 抗 人全血清 ( 本教研室 自制 ),混匀后倒在玻璃板的另一端,制成 6.5 x 4.5 义 0.1 c5 m 的含抗体胶板,其一边与含样品胶板相连接。在 4 ℃,I v c/ m的条件下,向与第一次电泳方向成 90 度角的方向进行第二次电泳 ( 见图 I B ),时间为 16 小时,取出后,用生理盐水和蒸馏水各冲洗 24 小时,干燥后用考马斯亮兰 R 2 50 染色。DOI : 10. 13471 /j . cnki . j . sun. yat -sen. univ (med. sci ) . 1988. 0011泳语的比较。由第一次电泳的阳极端向阴极端选 8个可 以测量其高度的沉淀峰,分别测量它们 的高度。然后根据被测峰的位置,峰的形状 以及染色的深浅等特征在另一比较对象的泳谱上找出与其相对应的 8 个峰,同样测量它们的高度。然后将每两个相对应 的沉淀峰的高度值互为除数和被除数相除,便得出两个商,那么 8 对沉淀峰便可得出 8 对数值,以每组的8 个商为变量,按统计学处理,求其均数和标准差,再按公式 C V= I OO.s .D / M :R 求其变异系数 ( C V:变异系数; S D : 比的标准差; M R比的均数 )。在选择进行比较的 8 对沉淀峰时,不能确定两个沉淀峰是否呈对应关系及高度大小 (低于 o.c4 m )的沉淀峰均不能参入比较。结 果、相同人之间比较的变异系数的分布八拐日曰 . . 如 衫.玲 目口图 2 相同人 比较和不同人 比较之变异系数分布的正 态曲线A 为相同人之间比较的变异系数的分布情况B 为不同人之间比较的变异系数的分布情况图 2 曲线 A 为 4 0人的 1 日血清痕与同一人的 10 日血清痕之交叉免疫电泳泳谱比较,所得的变异系数的分布情况。在这些相同人的泳谱比较时,其变异系数是取两组商所得的两个变异系数中较大的一个。其分布在统计学上可认为是服从正态分布 ( 正态性 D 检验, P> 。.2 )。故此分布的均数为 7.5 6 0 8,标准差为 1.1 9 9 8,其 9 %的分布范围为: x 土 2.58 a 二 7.5 6 0 8 士3。0 9 5 5 = 4。4 6~ 1 0。6 6。二、不同人之间比较的变异系数之分布图 2 曲线 B 为 5 对不同人的 1 月血清痕之交叉免疫电泳泳谱比较所得的变异系数的分布情况。在这组不 同人之间的泳谱 比较中,其变异系数是取两者峰高相互除的两组商所得的两个变异系数中较小的一个。而相互比较的两个人的性别相同,年龄相接近,最多相差不过 3岁,而且这一差别无显著性意 义 ( 配对 t 检验P > 0.05 )。此组变异系数的分布在统计学上亦可 以为服从正态分布 ( 正态性 D 检 验 P >0.2 )。故此分布的均数为 1 9.6 75 3,标准差 为2.5 4 5 1 , 其 9 %的分 布 范 国 为一又 士 2.5 8口 =1 9。6 7 5 3 士 6。5 6 6 4 二 1 3。1 1 2 6。2 4。三、对此两分布的检查 ( 盲测 )取 4个人的血清,札其中 3 人 A、B、c、的血清各制成一份血清痕,另一人 X 的血清则制成 3 份血清痕,将 6 份血清痕放 入 硅 胶 瓶中, 1 8℃存放 5 日,第 5 日再将 X 的血清制成6 份血清痕,先将 5 日前制的 6 份血清痕交他人编号,然后与第 5 日制的 6 份血清痕配对,用前述方法进行交叉免疫电泳、分析、比较求其变异系数。结果这 6 对泳谱比较的变异系数分别 为 2 0.9、6.2 4、5.7 8、5.9 2、2 3.2 7 、 和2 1.3 4 ( 此变异系数为两图谱上峰高相互 比 的两组商所得的两个变异系数的均值 )。根据前述分布,变异索数大于 1 3.1 1 的三对判断为米自不、同人的血清,而变异茶数小于 1 0.6 6 的三对则判断为来自同一个人的血清。判断结果全部正确。讨 论1 9 6 0年, R e s s l e r 〔 ` ’首先报告了一种新方法— 抗原和含缓冲液抗体的双向电泳。1 9 6 5年aL ur el〔“ ’基此理 论研究出抗原抗体交叉免疫 电泳 L a n de l[“ 〕首先用此法识别 39 个 人 的血清。lC ar k仁曦 〕对不 同性别和不 同年龄的人蛋白含 量的差异进行了探讨。在法医学领域内,W hi et h-ae d[5 ’首先进行了血痕泊勺交叉免疫电泳,探讨了H p 的遗传差异。Sw e e t 和 E l v i n s 〔“ ’ 则 进 一步将交叉免疫电泳应用于个人识别。他们用重叠比较法和 t 检验法找出不同人的差别。其后怡野节子` 7 ’等人提出了方差分析法来分析交叉免疫电泳泳谱。柏村征一「a ’等人则发明用变异系数法找出不同人之间的差异。本实验所用的分析方法则为根据柏村征一的方法加以改动。.9 3·其基本原理为:如果所比较的两个泳谱是来自同一个人的血清,那么其蛋白成份及含量应几乎相等,从理论上说,两者的泳谱上沉淀峰数和高度均应相等。故比较时 几无差异。相反,如果血清是来自不 同人的,那么其蛋白成分及含量就会有一定差异。比较时变异系数就会随之增大。因此变异系数的大小可反映两比较对象是否为同一人的。那么变异系数究竟要大到怎样的程度我们才能说它是来自相同人或不 同人的呢 ? 本实验比较了5 对不 同人的血清痕和40 对相同人的血清痕,分别得出相同人比较和不同人比较的变异系数的分布。且这两分布无明显重叠。因此如果我们在现场提一份 10 日内的血痕,将之与嫌疑人的血痕同时电泳、比较、求其变异系数。如果变异系数大 于 1 3.1 1 , 那么可排除嫌疑人,如果变异系数小于 1 0.6 6 , 那么可认为它们有 9 %的可能是来自同一人的。如果变异系数大于 1 0.6 而小于 1 3.1 1 , 则不能判别,因为它们来自相同人与来自不同人的机率各为 1 %。s w e e t 〔 “ , 等叭和 C l a r k〔` ’等人曾提出有些峰的高度在不同年龄和不同性别的人之间在显著差别。本实验由于样本有限,无力论证这一差异,但为避免这一影响,作者控制了不同人组的年龄和性别因素。此外本实验由于受多种因素的影响,诸如蒸馏水质量、琼脂糖凝胶的浓度、缓冲液的 p H 值和离子强度、电泳的时间及电压梯度等等。虽然这些因素自耘一地对本实验无很大影响,但如果各因素的影响叠加,那将会影响结果的判断。所以本实验也控制了变异系数的取舍,以避免这些因素造成系统误差增大。虽然这样使曲线的灵敏度下降,但却提高了准确度以适应法医学实践。当然随着自动分析仪和 电子计算机的普及,系统误差将大大地减小。交叉免疫电泳用于血痕的个人识别有着广阔的前景。参 考 文 献〔 i 〕 R e s s l e r N , T w o d im e n s i o n a l e l e e t r o Ph o r e s i s o fa n t i g e n s w i th a n ti b o d y e o n t a l n i n g b u f f e介C li n : C h i m·A e t a , 1 96 0 ; 5 , 7 9 5 (未见原文,见I n t e r n a t i o n a l A b s t r a e t s o f B i o l o g i e a l S e i e cn e,1 9 6 0 ; 1 9 , 4 55 ) ,〔2」 L a u r e l l C B呀 A n t主g e n/ a n t l b o d y e r o s s e d e l e e t or-P h o r e s i s A n a l刃 B i o e h e m . 1 9 6 5 ; 1 0 : 3 5 8。[ 3」 L a n d e l A F,G r a u n b a u m B W a n d K i r k P L;I n d i v i d u a l i t y o f h u m a n s e r u m b y i m m u n o e le-e t r o P五o r e s i s呀 S e i e n e e 2 9 6 2 , 13 7 : 8 6 2.[ 4〕 C la r k H G M a n d F r e e m a n T , Qu a爪 i at t i v eim m u on e l e e t r o Pho r e s i s o f hu ma n s e r u m P r o t e i·.n s诬 C li n·S c i , 1 96 8 ; 3 5 : 4 0 3.〔 5二W h i t e h e a d P H,K i n d 5 5,M o r i s P A,D a v i e sM a n d C l e e v l e y R 三 T h e e x a m i n a t i o n o f b l o o-d s t a i n b y L a u r e l一 e l e e t r o p h o r e s i s ( a n t i g e n/ a -nt i b o d y一e r o s s e d e l e e t r o p h o r e s i s ), J : F o r e n s里 S e i叮S o e, 1 9 7 0 ; 1 0 , 8 3.〔6」 Sw e e t H G a n d E l v i n J W, S t u d i e s b y e r o s s e de l e e t r o i m m u n o d i f f u s i o n o n t h e i n d iv i d u a l i t ya n d s e x u a l o r i g i n o f b l o o d s t a i n 里 J , F o r e n s , S e i`1 9 7 6 ; 2 1: 4 9 8。〔门 怡野节子 石津日出雄 何川凉 交叉免疫电气泳动法忆 止乙 匕 卜血痕的个人识别。日法医志。1 9 3 3 , 3 7 : 6.〔 8〕 S e i主e il i K a s h im u r a, e l a l三 A n e x p e r i m e n t a ls t u d y o f t h e i d e n t i f i e a t i o n o f t h e P e r s o n o fo r i g i n o f a b l o o d s t a i n b y e r o s s e d i m m u n o e l e e-t r o P h o r e s i s : F o r e n s亏 S e i I lt e r n 1 9 8 4 ; 2 5, 1 4 7.· 4 0·I n d i v i d U a l I d e n tif i Ca t i o n o f H U m a n S e r u m S ta i nb y C r o s s e d I m m u n o e le e t r o P h o r e s i sWa n g S o n g G u o J i n g y u a n(De Pa r tm e n t o f F O r e n si e M e di e i n e)A b s rt a C tT o es ta b li sh t h e i n di v i du a l c ha r a e t e r s,t h e e r o s s e d i m m u n o e l e c t r OPh o r e s i s ( C I E P ) w a su s e d t o f i n d t h e d i fer e n e e o f s e r u m P r o t e i n s b e t w e e n t w o P e r s o n s.F o r e o m Pa r i s o n t h e h e i g h tof P e a k s o f C I E P P a t t e r n w a s m e a s u r e d a n d t h e r a t i o of h e i g h t o f t w o e o r r e s P o n d i n g,P e a k sw as e a l e u l a t e d.T a k i n g t h e r a t i o s o f e i g h t P a i r s of e o r r e s P o n d i n g P e a k s a s t址 v a l u e o f v a r i a n t,e o e肚i e i e n t o f v a r i a t i o n ( C V ) w a se a l e u l a t e d b y P r i n e i P l e o f s t a t i s t i cs.F o r t y p a i r s of C I E P P a·t t e r n s o f t h e s a m e o r i g i n a n d f i f t y 一 f i v e P a i r s o f t h o s e f r o m d i f fe r e n t o r ig i n w e r e e om Pa r e d·T h e r e s u l t s i n d l e a t e t h a t t h e r e 15 n o l a P b e t w e e n t h e d i s t r i b u t i o n s of C V o f t w o g r o u P s of s a m ea n d d i f f e r e n t o r i g i n w i t h 1 0一 a y一 o l d s t a i n s·K e y W o r d s: I n d i v id u a l id e n t i f i e a t i o n一C r o s s e d im m u n o e l e e t r o Ph o r e s i s笋找讨泛补芝手荃安沈安莽落之摊芝李莽妥洪安舞 (舞:芝淤资李找舞注莽卜乏翔芝翔安李鉴花知若舞戈舞注李手芝翔笼笋落芝沁菠沐:乏林:乏洛乏汁笼羚减摊簇舞笼食长沐芝沙王饭沐花沛芝李参妥沙长李王搜舞:乏斗妞妻̀ 提左后分支阻滞掩盖急性隔面心肌梗塞心电图改变一例邓昭文 叶慧膺 曾群英( 附属第一医院心内科 )孤立存在的左后分支阻滞 ( L P H ) 甚 为少见 “’ ,因此有关它对心肌梗塞心电图影响的文献资料极少。本文报道一例急性脆面心肌梗塞( IM )I 患者,在发生暂时性 L P H 时其梗塞图形消失,L P H 消失后梗塞图形又再出现,说明LP H能掩盖 IM I 心电图 ( 图见封 4 ),兹报道如下。病 例 报 告患者男,7 岁,以反复发作上腹部不适于86 年 8 月 2 日入院。8 月、n 及 2 5日曾两次作心电图检查除偶发室性早搏及轻度电轴左偏 ( 图A ) 外未见其他异常。9 月)16 日出现右侧轻瘫及神志模糊,心电图 ( 图 B ) 示窦性心律,电轴 一 4 0“ ,PR O.z g秒,QR S O.o g 秒,导联 l 及avF 呈 q sr 型,导联 l 呈 qs 型,s T 皿、址、avF弓背抬高。.1毫伏,T 波倒置。V 3、V 。 T 波深倒达 1.。~ 1.2毫伏。Q T 明显延长。V:可见间歇性完全性右束支阻滞。心 电图诊断为急性隔面心肌梗塞,急性前壁心内膜下心肌缺血。血C KP z 6 o U, L D H 4 4 7 U,S G O T z g o U。转入冠心监护病室,按急性心肌梗塞治疗,病情未见好转。9 月 21 日出现明显左心功能不全,心律不整,心电图 ( 图 C ) 示心律为房颤伴频发室性早搏,QR S 电轴右偏 + 1 0 5。 ,QR s 轻 度增宽0·1 0~ 0.1 1 秒,互、皿、a V F 为 q R 型,互、( 下转封 4 )

交叉免疫电泳对血清痕进行个人识别的实验研究

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