自从1975年Kompf等发现乙二醛酶Ⅰ(Glyoxalase Ⅰ GLOI)具有多态性以来,作为一种遗传标记,受到广大人类遗传学及法医学工作者的注意。在法医学上应用于亲权鉴定及个体识别。GLOI的表现型有1—1,2—1,2—2三种,由第6号染色体短臂2区1带2亚带(6P212)上的一对共显性等位基因GLOI~1,GLOI~2控制。虽然后来Rittner等,发现GLOI~0“隐性”基因,但非常罕见,尚

李建金

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中山医科大学学报 1 9 8 7年第 8 卷第 2 期广州人群红细胞 G L O I 表型的分布及血痕 G L O I 的可测性研究李建金 伍新尧 郭景元 左孟华*文 涛*( 法医物证学教研室 )自从 2 9了5年 K 6 m p f 等〔` ’发现 乙二 醛 酶 I( e l y o x a l a s e 1 G L o l )具有多态性以 来,作为一种遗传标记,受到广大人类遗传学及法医学工作者的注意。在法医学上应用于亲权鉴定及个体识别。G L O I的表现型有 1 一 1, 2 一 1,2 一 2三种,由第 6 号染色体短臂 2 区 1 带 2亚带 ( 6 P 2 1 2 ) 上 的 一 对 共 显 性 等 位 基 因G L o l` ,G L O I,控制〔 2 ’ 。 虽然后来 R i t t n e r等`“ ’发现 G L O 10“隐性”基因,但非常罕见,尚未达到多态。G L O I 广泛分布于红细胞、精液、、 肌肉、毛根鞘细胞等二十三种以上不同的组织中〔们 , 红细胞中此酶活性尤高。G L O I 以还原型谷胧甘肤作辅酶,催化甲基乙二 醛 转 变为S一乳酞谷胧甘肤〔 5 1。 国外学者对新鲜血中红细胞 G L O I 酶的多态现象已进行了大量的研究。我国高富愿等〔 “ ’报道了北京人群 G L O I 的表型和基因频率 的 分 布 情 况。E.G.E m se 〔” , 和s e o t t 〔 , 〕分别于 z g s e年, 2 9 5 2年检测了 血 痕的G L O I表型。我们最近对 54 5例广州地区正常人群的G L O I进行了表型分型调查,检测 了 室温下血痕 G L o l 表型的可测时限,探讨了某些因素对血痕 G L o l测定的影响,现报道如下:材料和方法一、血标本来源及处理5 45 例血标本均来自中山医科大 学 第一附属医院献血员。静脉采血 l m l,肝素抗凝。1.新鲜血标本的 处 理 置 冰 箱 内 ( O ~, 4 ℃ ) 保存,电泳时直接取红细胞点样。2.血痕标本的处理 取 O.S Cm“大小 的血痕,剪碎,用 O.18 M的卜琉基 乙醇浸泡 2一 3小时,后取浸泡液点样,或用一滤纸片吸附浸泡液后置于凝胶板上进行电泳。二、电泳仪器及方法用 L K B电泳仪 ( 2 0 1 3 p o w e r S u p p l y,S w e -de )n。电泳方法基本上按 s OC t 法汇, ’进行。1.电极缓冲液 o.ZM三经甲基氨 基 甲烷1 0.O2 9 M柠檬酸、P H 7.6。2.凝胶缓冲液 o.ZM三经 甲基氨 基 甲烷I O.02 M氯化镁,用盐酸调 p H 至 7.6,用时稀释 1 0倍。3.凝胶板的制备 0.5% ( w / V )可溶 性淀粉和 1 % (w / V )琼脂糖用凝胶缓冲 液配,制,加热溶解至透明,除去气泡,制成大小 9 5 义 9 0X 。·5~ 的凝胶板。.4 点样及 电泳 条件 在 凝 胶 板 距 负 极10 m m处打七个加样槽,每槽加样 0.7 ~ l m l,在 4 ℃,30 v c/ m 电压下,电泳 25 分钟。5.染 色 酶反应底物—s m s 还原型谷臃甘肪 / 25 % 甲基乙二 醛 。.2m l /。.2M p H 6.8 磷酸缓冲液 4m l。用一滤纸片浸透反应 底 物,覆盖于胶面上,37 ℃孵育 30 分钟取出,除 去 滤纸,再盖上碘凝胶板 〔 1 %琼脂 10 m l 冷 却至6 0 ℃时,加 0.s m l 碘 液 ( i % 碘、1 0% 碘 化钾 ) 制成 〕,5 分钟后看结果,呈兰色处为酶活性谱带。结果和讨论一、G L OI 分型及基因频率广州地区 5 45 名健康成人的 G L O I表型分布及基因频率见表 1。*法医物证学进修班学员DOI : 10. 13471 /j . cnki . j . sun. yat -sen. univ (med. sci ) . 1987. 0028·4 7·. 从表 3可见, 2 0天内在室温下 ( 25 一 30 ℃ )保存的血痕全部可正确分型,随着时间的延长,酶活性逐渐改变。在本实验中,发现超过 20 天的 G L O I Z一 1型 易变为 G L O I Z一 2型,与 Sc o t t等的实验结果相似,推测可能是由于G L O I`基因控制的酶活性较 G L O IZ低所致〔 7 ’ 。故在实际检案中对 20 天 以后室温下保存的血 痕 要 考 虑到G L O I Z一 1错判为 G L O I Z一 2 的可能性。三、某些 因素对血痕 G LOI 测定的影响日晒、或辱天过夜,或用流水冲洗后以及思℃保存下的血痕 G L o l测定结果见表 4。流水冲洗 2 小时的血痕不能分型; 室内腐败血标本 9 天内检测结果可靠。在实际应用时应考虑这些因素。参 考 文 献表 4 某些影影因素对血痕 G L O I测定的影响彤响因素日晒 8 小时露 天过夜流水冲洗 2 小时4 ℃保存 105 天例数 正确率7 / 77 / 71 / 77 /7 7 / 7从表 4 可见,血痕的G L O I在低温条件下,可以保存较长时间 , 而流水冲洗使 之 破 坏 最J决,对 日晒仍有相当耐受力。四、室内 ( 20 ~ 27.5 ℃ ) 血液腐败过程对G L OI 分型的影响功份置于室内的血液标本,任其自然腐败,第三天可见试管内开始有蝇咀出现,取腐败血标本进行分型,9 天内全部可正确分型,随着腐败的发展,细菌进一步繁殖,10 天后的血标本绝大多数不能正确分型。小 结本文报道了广州地区人群的 G L O I 表型分布,基 因 频 率 分 别 为: G L O l = 0.1 7 1 6,G L O I Z = 0.5 2 8 4。室温下 ( 2 5一 3 0 oC ) 保 存的血痕 20 天内全部可正确分型 ; 日晒 8 小时,露天过夜, 4 ℃保存 1 05 天的血痕均可正确分型;〔z〕 K o m P f J, e t a l.P o l y m o r Ph i s m o f r e d e e l lg l y o x a l a s e l ( E e 4.4.1.5 ).A n e w g e n e t i em a r k e r i n m a n.H u m a n g e n e t i k 1 9 7 5 , 2 7 ,1 4 1。[ 2〕 S h o w s T B, e t a l.T h e 1 9 8 3 c a t a l o g u e o fm a p Pe d h u m a n g e n e t i e m a r k e r s a n d r印 o r to f n o m e n e l a t u r e e o m m i t t e e.C y t o g e n e t ieC e ll G e n t 1 9 8 4 ; 3 7 : 3 4 0。〔3〕 R i t t n e r C h, e t a l.E v id e n e e f o r a“ s i l e n t”a ll e l e G L O I a t t h e g l y o x a la s e l o c u s , H u mG e n e t 1 9 7 8 ; 4 2 : 3 1 5.[ 4〕 P S t o h l m a e h e r, e t a l.G l y o x a la s e J (G I O )i n H u m a n t is s u e s.2 R e e h t s m e d 1 98 0 ,8 5 : 1 6 5。〔 5 ] E G 万m e s, e t a l.T h e d e t e r m i n a t i o n o fg l y o X a l a s e 1 P h e n o t y P e s i n h u m a n b lo o -d s t a i n s.F or e n s i e S e i I n t 1 9 8 0 ; 1 5: 2 6 5.6[ 〕 高富愿,等。淀粉 /琼脂糖混合凝胶电泳 方法 研 究 G L O I 的多 态 性。法 医 学 杂 志1 9 8 6 ; 2 ( 1 ) : 3 3。〔7〕 S e o t t A C, e t a l.E l e e t r o Ph o r e s i s t y P in go f g l y o x a la s e l (G I O I ) is o e n z y m e s u s in ga m i x e d s t a r e h a g a r o s e g e l.F o r e n s i e S c iI n t 1 9 8 2 ; 2 0 ( 3 ) : 2 8 7。〔8〕 B E r ik s e n.H u m a n r e d e e l l g l y o x a l a s e lP o l y m o r p h is m j n d e n m a r k a n d i t s a P P l i e a-t ;o n t o P a t e r n i t y e a s e.H u m H e r e d 1 9 7 9 ;2 9 : 2 6 5。〔9 ] 永进信也,等。日本法医杂志 1 9 8 2; 3 6 ( 6 ) :1 0 0 7。[ 1 0 ] N o r t h M L, e t a l·R e d e e l l g l y o x a l a s e lP o l y m o r Ph is m i n a l s a e e.F r a n e e H u mH e r ed 1 9 81 , 3 1 ( 1 ):3 9.·4 8·T h e Phe n o t y P e D is t r ib u t iono f G l y ox a fa s e 1 o f R e d C e l lsi n G u a n g z h o u A r e a a n d T y P i n g G l y ox ta s e 1 O f B l o o d s t a i n sL i J i a n ji n W u X i n y a o K u o J i n g y u a n(众Pa r t men t o f F O r e n s i e M ed i c i n e )T h e p h e n o t y p e s o f g l y o x a l a s e 1 o f h u m a n redc e l l s a r e d e t e c t e d b y m i x e d s t a r e h /a幼r o se g e l e lec t r o P h o re s is a m on g a C h i ne s e P o P u 加 t i o n i n G u a n gz h o u a r e a.I n a l l 5 4 5Unre l a t e d p e r s ons , t h e p h e n o t y p e s o f 1 4 p e r s o n s a r e G Lor l一 i,1 5 9 G L o I Z一 i, 3 7 2 G L o l2一 2.T h e g e n e f er q u e n e y o f G L O l l 15 0.1 7 1 6 a n d G L O IZ0.8 2 8 4.G L O I t y P e s o f b l o o d s-t a i n s a r e de t e r一m i n e d.A l l 3 5 b l o od s t a i n s a m p l e s i n r o o m t e m P e r a t u r e ( 2 5一 3 0 ℃ )e a n b et y P e d e o r r e e t l y w i t h i n 2 0 d a y s.T h e t y P es o f 7 S a m P l e s s t o r e d i n 4 oC f o r 8 h o u r s a n do u t d o o r o v e r n i g h t r e s P ee t i v e ly a r e a l l d e t e c t a b l e.A m o n g 7 b l o o水 s t a i n sa m p l e s r i n s e d b yr un in g w a t e r f o r 2 h o u r s, o n l y O n e s a m Pl e c o u l d b e t y P e d·《 现代临床实验诊断学 》 出版发行本书以阐述现代化检验手段为主要 内容,结合我国国情,选编了有价值的实验项目,所述各项检查的正常值尽量采用国内资料。对于特殊的试验和较新的项 目,除正常值和临床意义外,增加叙述医务工作者必须掌握的具体方法。为开拓诊断思路,本书对于各种常见病的实验检查顺序和选择原则亦予介绍。本书适用于各科临床医师、高年级医学生和广大基层 医务人员使用,也可作为临床教学和检验工作者参考。本书为 16 开本, 4 76 页,过塑封面,定价 6.50 元,精装本 9.30 元。本书已于今年 3 月份出版,欲购者请速汇款至广州中山医科大学《家庭医生》 咨询服务部,也可由银行汇款至中国工商银行广州市白云路办事处,帐号 14 一 4 一。8 73 9 汇款附言请说明购本书数量,并加汇 10 % 包庄邮寄费。

广州人群红细胞GLOI表型的分布及血痕GLOI的可测性研究

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