抗体依赖性细胞毒性ADCC是机体重要的抗肿瘤免疫机制之一。作者用干扰素对20例放疗后的NPC（鼻咽癌）患者的ADCC作用进行了探讨。实验中,靶细胞为低分化NPC细胞株（CNE-2）,效应细胞为患者外周血淋巴细胞,靶细胞抗体为兔抗CNE-2细胞抗体,用51Cr释放法测定。结果表明经干扰素预孵的效应细胞比未经干扰素预孵的效应细胞的细胞毒平均增加33.5％（P<0.001）,表明干扰素有促进ADCC的作用

刘庆伦

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中山医科大学学报 1 9 8 8年第 9卷第 1期干扰素对放疗后鼻咽癌 (N P C)患者A D C C作用的影响刘庆伦 蔡体育 陈爱珍(肿瘤研究所免疫室 )孙振权 范顺发 董家权 梁培根(肿瘤医院 )提要 抗体依赖性细胞毒性 A D C C 是机体重要的抗肿瘤免疫机制之一。作者用干扰素对 20例放疗后的 N P C (鼻咽癌 )患者的 A D C C作用进行了探讨。实验中,靶细胞为低分化 N P C细胞株 ( C N E一 2 ),效应细胞为患者外周血淋巴细胞,靶细胞坑体为兔抗 C N E一 2细胞抗体,用“ ` C r释放法测定。结果表明经干扰素预孵的效应细胞比未经干扰素预孵的效应细胞的细胞毒平均增加 3 3.5 % ( P < 。.0 1 ),表明干扰素有促进A D C C的作用。关键词 干扰素 鼻咽癌 抗体依赖性细胞毒性 靶细胞 低分化鼻咽癌细胞株 效应细胞放射治疗是 目前治疗鼻咽癌的一种最常用有效的方法之一。经放射治疗后,患者 5 年生存率可达招%〔 ` 〕。但放射治疗在杀伤肿瘤细胞的同时亦损伤了机体的某些免疫功能:如:由于射线对造血干细胞的杀伤而造成多形核白细胞、巨噬细胞、T 细胞、B 细胞等相应的机能的下降〔“ ’ , N k、k细胞的功能亦下 降〔 3 〕 。我们过去的资料表明免疫功能的强弱、是影响鼻咽癌患者预后的重要因素之一〔` ’ 。 因而如何使放射治疗造成的免疫功能的一下降减少到最低限度,如何尽快地恢复放射损伤了的免疫功能就成了当前提高N P C综合治疗效果的重要课题之一。为此,我们对 20 例放疗后的N P C患者进行 了研究:用干扰素孵育患者外周血淋巴细胞,观察干扰素对 k细胞活性的影响,现报告如下。材 杆 与 方 法1.实验对象 初诊未经任何抗癌治疗的鼻咽癌患者,年龄为 3 0一 6 9岁,男 性 18 例,女性 2 例。经一个疗程 ( 时 间三周 ) 的放射治疗后取患者外周血进行实验。2.靶细胞 体外培养的低分化鼻咽癌上皮细胞株 ( C N E: )取自中国医学科学院病毒研究所3. “ ’ C r 铬酸钠一” ,rC 注射液,放射浓度Z o m ic / m l左右,中国科学院原子 能 研究所提供。4.千扰素注射液 5 0万 卜L/ m l ( 广 州 市 医药卫生所产品 )。5.兔抗 C N氏细胞抗血清 常规制备,5G ℃灭 活半小时备用,使用浓度 1: 1 0 0 0 0。6.效应细胞制备 用比重 1.0 7 7一 1.0 7 8 1于勺淋巴细胞分离液分离淋巴细胞,然后用贴壁玻璃法除去粘附细胞。将效应 细胞分成两组,一组加入千扰素并使其最终浓度为 2 0叩 / m l,另一组作对照,均置于 37 ℃温箱孵育 2 小时,然后用 R P M I一 1 6 4 0洗三次,除去千扰素。最后,两组效应细胞均配成 1.5 x 1 o “细胞 / m l 浓度备用。7.靶细胞的标记 取足够量的 C N E:细胞,用 0.5 %胰酶消化,然后用R p M I一 1 6 4 0洗三次,每 1 0“个 靶 细 胞 加“ ’ C r 1 0 0林C I及 0.s m l R p M I一 1 6 4 0,37 ℃孵育一 小时,每 15 分 钟轻轻摇匀一次。然后用 R P M I一 16 4 0 洗四次,除去未掺入细胞内的6 , C r,最后配 成 lx l 。 ” 细 胞 /毫升备用。8. 石 ’C r释放法 AD C C试验 多考 M ac l e n n a nDOI : 10. 13471 /j . cnki . j . sun. yat -sen. univ (med. sci ) . 1988. 0006的方法￡ 5’ ,使用 4 。孔培养板,实验孔与对照孔( 各设三个平行孔 ) 主要内容物如下表所示:表 1 实 验 设 计效应细胞对照组 <1 >对照组 <2 )实验组义扮实验组 <2>{蚕龚态韶服靶细胞 }雄翼探1霖表一 十 一 +拢_一:.-.{_一公~引~ :讨堵养板置含 5 % C o:的湿空气内, 3 7 ℃孵育 1 4小时,收获。取上 清 液 测定 cP m 数。0.结果 细胞毒按下式计算:绷地;攀%二买验组5` C r 释放一效应细胞对照组“ ` C r 释放最大5 ` C r释放 一效应细胞对照组5 ’ C r释放只 1 0 0 %鼻咽癌患者放疗后,其外周血的淋巴细胞经 i二扰素处理后,A D C C 活 性 明显提高 ( P <0.0 0 1 )。注: + 号表示有, 一 号表示无表 25 1 C r 从 靶 细 胞 的 释 放 ( 20 例 )对 照 组 细 胞 毒 % 实 验 组 细 胞 毒 % 干扰素孵育后对 照 组 < l > 对 照 组 ( 2 实 验 组 ( 1 ) 实 验 组 < 2 > 细胞毒坛加 %1。9 土 迁。6 一 0。2 士 6。4 2 2。2 士 7。2 2 〔) 。 2 士 9 . 9 3 3 。 5 士 2 3 。 1讨 论1 9 7 9年 M.G ir id “ 等报道,肺癌、直肠癌、食道癌患者照射 6 0。。拉德后以及乳脉癌患者接受 4 5 0 0拉德的照射后,可引起患者 A D C C 功能的下降,尤以乳癌及直肠癌下降明显。他们还报道,这种下降在放射治疗的第一周并不表现出来,而在第二周开始下降,第四周降至最低点,放疗后 1G周逐渐恢复。他们认为这种现象表明, k 细胞对照射是不敏感的,而照射可 能只是影响 k 细胞的前体川。我们过去的实验亦观察到N P C 患者放疗三周之后,A D C C 活性平均由 3 5.6降至 2 2.2。放疗造成 的 A D C C 活性下降的自然恢复过程是缓慢的,因而有必要寻找一种加速其恢复的药物。干扰索是一种具有多种生物学功能的蛋 白质。多年米,干扰素的抗病毒作用得到了较 J` -泛应用。近年来还发现了干扰素的多种非抗病毒生物学效应,特别是对免疫反应的效应,如:对免疫反应的调控,对抗体形成,细胞免疫、吞噬效应,补体生成等的影响,及其对肿瘤免疫的作用等「” ’ 。本实验中,我们对干扰素对外周血淋巴细胞的A D C C 作用的影响进行了观察:日前,有人认为干扰素对 A D C C 作用无影响〔 7 J ,亦有人报道干 扰 素 促 进 A D C C 作 用〔卜, 。 , 。R.W ar er n 等认为,当抗靶细胞抗体的浓度合适时, 二卜扰索表现出促进 A D C C 的作用,所谓的干扰索对 A D C C 不 发生影响,可能是由于实验系统中使用的抗靶细胞抗体浓度过高而造成的〔 ’ ` ’ 。 我们的实验支持干扰素促进 A D C C作用灼报道; 2 0例鼻咽癌患者放疗三周后,外周血淋巴细胞经干扰素处理后,A D C C 作用增强,细胞毒性由平均 2 2.2增加至 2 9.2 , P < 0.0 0 1。在我们设计的实验中,除了粘附细胞、淋巴细胞纯 度 达 98 % 以上,而且我们发现,鼻咽癌上皮细胞株 ( C N E:)对 N k 的杀伤作用不敏感,( 效应细胞对照组5 ` C r 释放平均低于 2 % )。所以,可 以认为 在 本 试 验 中,干 扰 素 增加A D C C 作用是 由于作用于 k 细胞而引起的,其机制可能是千扰素增加 gI G一 F“受体的表达或通过影响细胞代谢而促迸 A D C C 作用。我们的结果进一步提示,在鼻咽癌患者 的综 合 治疗中,干扰素有可能成为一种有效的促进 A D C c作用,提高免疫功能及改善患者预后的药物。参 考 文 献潘国英,等。鼻咽癌的放疗。中华 医学 杂志1 9 7 4 ; 5 4 ( 1 1 ), 6 8 7。刘树铮。辐射免疫学。第一版。北京:人民卫生出版社,1 9 8 5年 3 月。t 7〕 H e r o n l, e t a l , T h e e f f e e t o f i n t e r f e r o n o nl y m Ph o e y t e一 m e di a t e d e f f e e t o r e e l l f u n e t i o n :s e l e e t主v e e n h a n e e m e n t o f n a t u r a l k l l l e r e e l l,C e l l l m m uno l 1 9 7 9 ; 4 2: 1 8 3。〔8」 D r o l l e r M J, e t a l.I n v i t r o e n h a n e e m e n t o fn a t u r a l a n d a n t i b o d y 一 d e P e n d e n t I y m Ph o c y t e一m e d i a t e d e y t o t o x i e i t y a g a i n s t t u m o r t a r g e te e l ls b y i n t e r f e r o n 经 C e l l Im m u n o l 1 9 7 9 ; 4 7 ,2 4 8。〔 9〕 H e r b e r m a n R B, e t a l.A u g m e n t a t i o n byi n t e r f e r o n o f h u m a n n a t u r a l a n d a lt i b o dy-d e p e n d e n t e e l l m e d i a t e d e y t o t o x i e iyt,N a t u r e1 9 7 9 , 2 7了名 2 2 1〔 1 0〕 W a r r e n R, e t a l.E n h a n e e m e n t o f h u m a nA D C C w i t h i n t e r f e r o n 三 C l i n e x P I m m u n o l1 9 8 2 ; 5 0 : 1 8 3。J任一)日ǐJl .J-, Lg曰.rLr口[ 3〕 J o h n A M e C r e d i e, e t a l : E f f e e t o f o P e r a t i o na n d r a d主o t h e r a p y o n a nt i b o dy一 d e Pe n d e爪e e l l ul a r e y t o t o x i e i yt 亘 Ca cn e r 1 9 7 9 , 4 4: 9 94[ 〕 刘庆伦,等, 。鼻咽癌病人细胞免疫状态与 预 后的关系。癌症 1 9 8 4 ; 3 ( 2 ), 1 0 1。〔5〕 M a e l e n n a n L C M, e t a l三 Qu a n t i t a t i o n Ke e l l,I n: B l o o m B R,( e d s ): I n v i t r o m e t h o d si n e e l l 一m e d i a t e d a n d t u m o r i m m un i t y,N ewY o r k,A e a d e m i e P r e s s I n e.1 9 7 6 , 5 1 1一 5 2 2〔6 ] T o y J L三 T h e i n t e r f e r o n 三 C l i n e x p Im m uno l1 9 8 3多 5 4: 1。T h e E f f e c t of I n t e r f e r o n o n A D C C i n N P C P a t i e n t s a ft e rR a d i o t h er a P yei n v i t r o S t u d yL i u Q i n g l u nS u n Z h e n q u a n F a naC i T i yu C h e n A i z h e n( C a n e e r I n s t i t u t e )S h u n f a D o n g J a q u a n L i a n g eP i g e n( T u m o r H o s P i t a l )A b s t r a C tW e h a v e s t u d ie d t h e a b i l i t y of a P u r i f i e d P r e P a r a t i o n of i n t e ferr o n ( I F N ) t o a u g m e n th u m a n A n t ib o d y 一D e P e n d e n t C e l l一 M e d i a t e d C y t o t o x i e i t y ( A D C C ) b y u s i n g“ I C r l a b e l e d P o o rd i f fe r e n t i a t e d n a s o p h a r y n g e a l c a r e i n o m a e e l l l i n e ( C N E : ) fo r t a r g e t e e l l s w h i e h w e r e i n e u b a t e di n a l : 1 0,0 0 0 d i l u t i o n o f im m u n e r a b b i t a n t i一 t a r g e t a n t i b o d y, a t t h e o P t i m a l e fe e t o r t ot a r g e t r a t i o o f 1 5 : 1.T h e e fee t o r e e l l s w e r e o b t a i n e d f r o m 2 0 N P C P a t i e n t s r e e e i v e d r a d i o t h e,r a P y。I t w a s s h o w n t h a t P u r i f i e d P r e P a r a t i o n o f i n t e r f e r o n i n e r e a s e d A D C C a e t i v i t y o f e f e e t o re e l l s t r e a t e d w i t h I F N b y m e a n 3 3.5 % ( p ( 0.0 0 1 ) o v e r t h a t of e f f e e t o r e e l l s n o t t r e a t e d w i t hI F N。s i n e e t h e ^ D e e 15 a n i m p o r t a n t m e e h a n i s m f o : a n t i一 t u m o r i n , i , o,t h 。 e n h a n e e她a n t o rh u m a n A D C C w i t h i n t e r f e r o n s u g g e s r s t h a t i n t e r fe r o n m a y be a n e fe e t i v e P r e P a r a t i o n f o rim m u n o t h e r a P y i n N P C P a t主e n t.K e y w o r d s : I n t e r介 r o n A D C C K i l l e r e e l l s

干扰素对放疗后鼻咽癌(NPC)患者ADCC作用的影响

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