T细胞在免疫监视和抗肿瘤中的重要作用已有较深入的研究。近几年来又发现天然杀伤细胞(NaturaI Killer CeII,NK细胞)不依赖抗体或补体,也不需预先致敏就能溶解多种的肿瘤细胞。因此,人们提出了NK细胞在抗肿瘤中的独特作用——免疫监视功能。动物实验发现肿瘤生长旺盛时,宿主NK细胞活性降低。在NK细胞活性高的受体内接种肿瘤,肿瘤的生长情况较在NK细胞活性低的受体内差。在人类的一些癌肿患者NK细胞活性也是低下的。提示了NK细胞的功能与肿瘤发生发展的关系

蔡体育

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第 5 卷 第 2 期 中 山 医 学 院 学 报1 9 8 4年 A C T A A C A D E M I A E M E D IC I N A E Z H O N G S H A NV o l。5,N o Z1 9 8 4鼻咽癌免疫抑制因子对N K细胞功能的影响蔡体育 区大卫 黄 迪 李 端 陈爱珍 陈丽珍 简志瀚( 肿瘤研 完所 )T细胞在免疫监视和抗肿瘤中的重要作用已有较深入的研究。近几年来又发现天 然杀伤细胞 ( N at u r al K il l e r C e l,N K 细胞 ) 不依赖抗体或补休,也不需预先致敏就能溶解多种的肿瘤细胞。因此,人们提出了 N K 细胞在抗肿瘤中的独特作用— 免疫监 视功能 〔` ’ 2 一; 。动物实验发现肿瘤生长旺盛时,宿主 N K 细胞活性降低。在 N K 细胞活性高的受体内接种肿瘤,肿瘤的生长情 况较在 N K 细胞活性低的受体内差。在人类的一些癌肿患者 N K细胞活性也是低下的 〔“ 二。提示了 N K细胞的功能与肿瘤发生发展的关系。我们曾报告了鼻咽癌免疫抑制因子能抑制 T 细胞的某些功能,但它对 N K 细 胞 功 能有何影响 ? 我们尚未见到有关这方面的文献,故此我们初步报告了这方面的实验结果。实 验 材 升 与 方 法一、鼻咽瘩组织液制备 把鼻咽癌颈部转移手术切除的新鲜癌组织,剪为碎块,按1 : 2 0 ( 克 / 毫升 ) 放在 3M ke l ( p H 7.4 , o.o o 5M P B S ) 溶液中,用 捣 碎 机 ( 2 0, 0 0 0转 /分 x 6`) 制成匀浆,液氮冻融 2次后置冰箱 4℃ 24 小时,高速离心 1, 4 0 0 0转 /分 x 60 分,吸上清液对 20 倍 。.I M N a CI 溶液透析 ( 4℃ ),然后在冰库里冷风吹干浓缩,过滤除菌,紫外分光光度计测蛋白含量。二、扁桃体组织液制备 方法同上。三、鼻咽癌免疫抑制因子的分离 癌组织液在 C K B层析仪通过 So p l: ade x G 2 0 层析柱,用 。.05 M,P工仃.4 T r is 一 H c l 缓冲液洗脱,分部收集器收集,紫外检测仪在 波 长80 毫微米显示洗脱液有 续个不同峰形 ( 工 l 班 万峰 ),最后将洗脱液浓缩,过滤除菌,紫外分光光度计测蛋 白含量。四、 5 ` C r释放试验测定鼻 咽庙组织液对K N细胞活性的影响、、 “ 一 。( 1 ) 检测对象:来自输血员 28 名,取静脉血肝素抗凝。( 2 ) 用淋巴细胞分离液 ( 上海试剂二厂,比重 1.0 7 士 0.0 02 ) 按常规方法分离淋DOI : 10. 13471 /j . cnki . j . sun. yat -sen. univ (med. sci ) . 1984. 00202 4 中山医学院学报 5卷巴细胞业孵育 1小时去除贴壁的单核巨噬细胞。( 3 )” ` C : 标记靶细胞,以髓性自血病 K 5 62 为靶细胞,每 1 x 1 0e 细胞 加 入 国产N oZ ” ’C r C 4 l o o u e i,再加入含 5%小牛血清,’ 1 6吐。 , 培养液 0.5毫升,温育 1 小时 ( 每 1 5分钟振摇一次 ) 后用 t’l 6 4 c, 结养浓洗 次,最后把标记了的靶细胞调配为 1 x 1 05/毫升。( 4 ) 用生理盐水分别调配扁桃体组织液,鼻咽癌颈部转移组织液及其经 Se p h : dexG 2 0 o 层析洗脱液中的第 1 1 1 那峰的蛋白含量为 0.5毫克 /毫升。( 5 ) 吸上述各组份适量,0.5毫克 /毫升原液以不同比例分别与淋巴 细 胞孵 育 1 小时。( 6 )5 ’C : 释放 试验,我们设癌组织液、层析液为实验组; 扁桃体组织液及正常八淋巴细胞空白为对照组,另设自发释放组和最大释放组。经过测试发现效应细胞与靶细胞之比为 1 0: 工时裂解效应较高因此我们按 E / T l o o: 1吸经孵育处理后的淋巴细胞与靶细胞各。.1毫升于 40 孔的塑料板内 ( 对平底孔底略加改进成为U型 )。另外,吸培养液和标记的靶细胞各0.1毫升为自发释 放组,吸 6 %聚乙二醇辛基苯基醚 ( O P和 ) 标记的靶细胞各 0.1毫升为最大释放组。塑料板经 3 0 x g离心 5分钟,置含5 % C O:潮湿空气的玻璃器内,在 37 ℃培养箱孵育 4小时,取出经 60 x g 离心 10 分钟,每孔吸上清液 。.1毫升,用 : 计数器测释放 到 上 清的“ `C r的 C P m,每组5 `C r 释放实际值为 ( 测定值 C尸m均数 一 本底C P m 均数 ) x Z,上述每组均作 3个平行孔试验。细胞裂解率计算公式细胞裂解率%一器器靛黔黯器丽/ ` “ “ “实 验 结 果实验结果证明,鼻咽癌组织液对 N K 细胞功能有较强烈的抑制作用,癌组织浪经 过eS p hade二 G 20 0层析,发现抑制 N K 细胞活性主要集中在洗脱液的 F 峰。与 此 同 时 用扁桃体组织液作对照,则未见有明显的影响。实验结果如表 ( 1 ) ( 2 ):表 1 N P C 组织液对N K细胞功能的影响例 数 裂 解 率 %对 照 组扁 桃 体 组癌 组 织 液 组5 8。4 2 土 1 35 4。4土 7。5P < 0。0 11 5。9土 7。2OU八V人ù9自,91ú2 期 鼻咽癌免疫抑制因子对N K 细胞功能的影响表 2 N P C 组 织层析液对 N K 细胞功能的影响洗 脱 液 组 份 例 数 细 胞 裂 解 率 %I ( 峰 )!,那5 7。6士 15。25 4。4士 1 3。25 6。士 1 3。4P > 0。0 54 0。3士 1 20óUù00,丈1止1么1人讨 论N K 细胞的活性能被某些因素所增强或抑制。巳知干扰 素、干 扰 素诱生剂 ( P ol yI:C ) 及 B C G、短小棒状杆菌和病毒、真菌、原虫能使小鼠 N K 细胞活 性 增 强。而前列腺素、环磷酞胺和放射线等能使 N K 细 胞活性降低。我们曾报告了从鼻咽癌组织抽提液中发现有一种免疫抑制因子,它能抑制 T淋巴…细胞的转化 〔7 ,。但它对 N K细胞活性有何影响 ? 本文初步报告了这方面的实 验 结 果。从实验结果看,鼻咽癌组织液对正常人的 N K 细胞功能有强烈的抑制作用,28 个输血 员的 N K 细胞功能,以“ ` C r 释放试验为指标,细胞裂解率平均 58.42 士 13 %,加 入 癌 组织液后 N K 细胞功能显著下降,平均细胞裂解率为 15.9 士 7.2 %,但加入相同旦 白 含 量的扁桃体组织液后的细胞裂解率为 5 4.4 士了.5 %。癌组织液经过 eS p ha d e 二 G 20 。层 析后的洗脱液各部份作 N K活性影响试验,实验结果发现第 F 峰显示有抑制作用,靶 细 胞裂解率邮8.4 2士 13 %降为 4 0.3 士 r 2.9% ( P < 0.0 5 )。提示经 Se p h a d e x G Z o o过 柱 洗脱液中免疫抑制因子的活性主要集中在第 W峰。但是 W峰的抑制活性不如原 癌 组 织 液强,这可能是 由于层析过程中抑制活性受到某种 因素的影响或丢失,抑或由于癌组织液中含有多种成份的 抑制物质所致。N K细胞杀伤作用的机制尚未十分清楚,对一些癌症病人 N K细胞活性降低的原因也在探讨中。S et in h a u e r 〔`报告,晚期癌症病人的 N K细胞活性低于早期癌症 病 人 及正常人。然而,无论是早期或晚期病人的 N K细胞数量及单个 N K 细胞对靶细胞的杀伤力与正常人业无差异。他推论可能是由于抑制性细胞或抑制因子的存在,N K 细胞的周 转( er cyc il n g ) 能力受影响之故。我们的实验材料是直接证明了 ( 癌组织液及其经 S e p h一ad ex G 2 0 的分液 ) 鼻咽癌免疫抑制因子对 H K 细胞活性的抑制作用。N K细胞对靶细胞的杀伤作用可分为两步,首先是效应细胞对靶细胞的 识 别 和 结合,最后是对靶细胞的溶解。前一步可能与靶细胞表面某些特殊的识别结构有关,后一2 6 中山医学院学报 5 卷步认为 与细胞溶酶体的释放有关 ,」 。R ode r 几` 。 等认为细胞内c A M P与cG M P的比例对 N K细胞溶解活性起决定性作用, c A M P增强剂前列腺素 E,能抑制 N K细胞裂解靶细胞的活性,而cG M P能激活和增弧 N K 细胞的活性。K a 。z :。 : 也指出,环核普酸在调爷N K细胞活性起着重要的作用。增力口细胞内的c A M P能抑制 N K 细胞的活性,增 加犷箱内的c G M P能增加 N K细胞的活性。对 N K细胞活性的调节作用不是影响 N K细胞对靶细胞的识别和结合,而是影响细胞的溶解活性,他认为可能是通过影响溶酶体酶的释放或效应细胞的周转。K at z 氏在研究 C he ida k一 H i g as ih 综合征患者的 N K 功能缺陷时指出,C.H.S患者 N K 细胞活性降低不是 由于 N K 细胞数量的缺少或与靶细胞结合的缺陷,而是由于病者细胞内c A M P 与 c G M P含最异常的结果,在体外实 验加入cG M P或 c G M P诱生剂后,C.H.S病者 N K细胞功能低下的状态能得以纠正。鼻咽癌免疫抑制因子 N K细胞的活性作用在那一个环节,本实验未能直接证 明。简志瀚 〔“曾报告舆咽癌病人淋巴细胞内和排出的尿液中c A M P含量比正 常人 多。我 们推想,从奥咽癌组织液及其在层析液中提取的免疫抑制 因子对 N K 细 胞活 性 的 抑 制 作用,可能也是通过影 响细胞内c A M P与c G M P的比例,即促进细胞内c A M P含量增多这一环节起免疫抑制作用。本实验结果与我们以往的材料证明,从鼻咽癌组织提取的免疫抑制 因子对 T淋巴 细胞和 N K 细胞的功能都有抑制作用,是非常特异性的。它的存在可能是鼻咽癌病人细 胞免疫功能低下的重要原因。( 本文承蒙室主任 宗永生、陈剑经审阅,张锋讲师提供癌组织,特此致谢 )参 考 文 献[ l 〕 I { e r b e r m a z z R B e t a l:N a t u r a l C e l l一M e d i a t e d I m m u n i t y. a d y.C a n e e r Re s .2 7 : 3 0 5, 1 9 7 8[ 2 」H e r b e r m a n R B e t a l:H a t u r a l K i l l e r C e l l s:T h e i r r o l e i n d e f e n e e s a g a-i n s t d i s e a s e.S e i e n e e。2 1 4: 2 4, 1 9 5 1〔 3 〕 T a r g a n S R:T h e d u a l i n t e r a t i o n o f p r o s t a g l a n d E:( P G E:)a n d i n t e r f-e r o n ( I F N )o nN K I J/t i e a e t i v a t i o n.E n h a n e e d e a p a e i t y o f e f fe e t o r 一 t a r -g e t l了t i e i n t e : a e t i o n s (r e e了e l i n g,) a n d t il e b l o e k a 丁e o f p r e N K r e e r u i t m e-n t。J Im m u n o l 1 2 7: 2 4 2 4, 19 8 1仁4 〕 5 t e i n h a u e r E H e t a i : D e f e e t i v e n a t u r a l e y t o t o x i e i t y i n p a t i e n t s w i t he a n e e r : n o r m a l n u m b e r o f e f f e e t o r e e l l b u t d e e r e a s e d r e e y e l i n g e a p a e i t yi n p a t i e 刀 t s w i t h a d v a n e e d d i s e a s e.J Im m u n o l 1 2 9 : 2 2 5 5, 2 9 8 2〔 5 〕 K a t乙 P e t a l : M e e } l a n i s n : 5 o f h u 几 a n e e l l一 m e d i a t e d e y t o t o 一工 i e i t y之2 期 鼻咽癌免疫抑制因子对N K细胞功能的影响 271.M o d u l a t i o n o f n a t u r a l k i l l e r e e l l a e t i v i t y b y e y e l i e n u e l e o t i d e s·J 工mm u n o l 1 2 9 ( 1 ): 2 8 7 , 1 9 8 211。C o r r e e t i o n o f t h e s e l e e t i v e d e f e e t i n n a t仪 r a l k i l l in g i n t h e e h e d i a k-h i g a s h i s y m d r o m e w i th i n d u e e r s o f I n t r a一 e e l l u l a r C y e l i e G M P。J。Im m u-n o l 1 2 9 ( 1 ): 2 9 7, 2 9 8 2〔 6 〕 简志翰等:鼻咽癌病人脉 巴 细胞、血 浆及尿 中c A M P 含量 的 初 步探 讨。 刀中瘤 2( 6 ), 1 , 1 9 8 2〔 7 〕蔡体育芳:鼻咽瘤 兔疫抑制 因子的研 究。中华医学杂志 61 ( 9 ):51 7, 1 9 8 1〔 8 〕 区大 卫子: 巴 ’C r 释放试验刚 定人 自然杀伤细胞功能的研究 ( 木发衣讨针 )〔 9 〕 陈绍先:细胞介导细胞毒 ( 综述 )。中华医学杂志 6 2 ( 1 2 ): 7 4 7,1 9 8 2〔 2 0 」工之o d e r J C e t a l:T a r g e t一 e f f e e t o r e e l l i n t e r a e t i o n i n t五e 习 a t u r a l k i l-l e r e e l l s 了s t e mV.En e r g y r e g u i r e m e n t s, m e n ; b r a n e i n t e g r i t y a n d t h e p o s s i b l e i n v o l v e m 。-n t o f l y s o s o m a l e n z y m e s.Im m u n o l o g y 吐。: 1 0 7 , 2 9 5 0E 1 1 〕 R o d e r J C e t a l : T a r g e t一 e f f e c t o r e e l l i n t e r a e t i o n 三n t h e n a t u r a l k i l l e r-e e l l s 了s t e m。I犷.M o d u l a t i o n b y e y e l i e n u e l e o t i d e s.J Im tn t n o l 1 2 3 : 2 7 8 5, 19 7 9A S t u d y o n t h e mI mu n o l o g i c a l I n h i b i t o r s i n aNs o p h a r y n g c a lC a n e e r一一 T he N P C Im m u n一o l o g i e a l I n h i b i t o r s F a e t o rE f f e e t o f N K C e l l s F u n e t i o nC a i T i y u o u D a w e i H u a n g D i L i D u a nC il e n A i z h e n C h e n L i e z h e n J i a n Z h i h a n( C a n e e r I n s t i t u t e o f Z h o n g s h a n M e d i e a l C o l l e g e )A b s t r a e tP r e v i o u s r e s e a r e h w o r k o fof the C a n e e r o u s t i s s u e e x t r a e ta u t h o r s il a d s h o w n t h a t t h e I n h i b i t o r y e f f e e tof Pa t i e n t s w i tht i e t r a n s f o r m a t i o n。Ho w e v e r,w h a t 15 e f f ee t t oN P C t o p er i P il e r a l l y nr P h o e y-t h e N K Ce l l t r e a t e d w i t h i n h i-b i t o r 了 fa e t o r s 主sT h i s r e P o r tn o t y e t s o lv e d。“ h o w e d t h e r e s u l t e f f ee t o f N K C e l l s m e d i a t e d e y t o l y s i s t h a t2 8 中山医学院学报 5 卷a g a i。 s t K” 。 ’ ℃e l l s b y“ `C : : e l e a s e a s s a v.T h e e y t o lys i s r a t e o f 2 8 n o r m a l s u b je e t s w a s 5 8.4 2士 2 3%,W he n t Le N P Ct i s s u e e x t r a e t a d d e d t o l y zn p h o e y t e s u s p e n s i o n, t h e e y t o l了5 15 r a t e w a s d e e r e a s-e d fr o m 5 8.4 2士 1 3% t o 2 5.9 土 7.2%.A f t e r t h e N PC t is s u e e x t r a e t w a e f i l t r a t e d b y s e p五a d e x G 2 0 0, o b t a i n i n gt he 那 f r a e t i o n p r o t e i n, t h e e了t o l j s i s r a t e w a s 4 0。3士 1 2 %s h o w n lo w e r ( P <0。0 5 )。Ho w e v e r, u s i n g t o n s i s t i s s u e e x t r a e t, t h e e y t o ly s i s r a t e w a s 5 4,4 士7。5 %,( P > 0.0 5 )。T h es e r e s u l t s w a s s h o w n t h a t t h e N P C i n , m u n o l o g i e a l i n h i b i t o r o f a e t o rm a y i n h i b i t b o t h T C e l l a n d N K C e l l.

鼻咽癌免疫抑制因子对NK细胞功能的影响

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