由于胰脉外分泌系统的解剖特点,在科研工作中直接引流人或动物的胰液存在很多困难。从十二指肠内则难获得纯净的胰液,因此利用外科技术引流动物胰液已成为胰腺外分泌研究的主要方法之一.大鼠是研究胰外分泌的理想动物。50年代以来收集大鼠胰液的技术屡有报道,但据认为真正满意者甚少,而且过去不少介绍方法学的文献对技术细节不加描述,有的未附示意图,较难掌握。本文经反复实践,博采前人工作的长处,总结出一种容易掌握,比较可靠的收集清醒大鼠胰液的方法。为了检验本法的可靠性和稳定性,本文对清醒大鼠隔日24小时胰分外泌情况及术后第6日24小时期间胰外分泌的动态变化进行了初步观察

王贵喜

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第 5卷 第 2期 中 山 医 学 院 学 报1 9 8 4年 A C T A A C A D E M工A E M E D工C工N A E Z H O N G S H A NV o l.5 , N O Z1 9 8 4清醒大鼠胰液收集改良法王贵喜.候 灿( 病理生理教研室 )由于胰脉外分泌系统的解剖特点,在科研工作中直接引流人或动物的胰液存在很多困难。从十二指肠内则难获得纯净的胰液,因此利用外科技术引流动物胰液巳成为胰腺外分泌研究的主要方法之一。大鼠是研究胰外分泌的理想动物。50 年代以来收集大鼠胰液的技术屡有报道,但据认为真正满意者甚少 〔` , 乞〕 , 而且过去不少介绍方法学的文献对技术细节不加描述,有的未附示意图,较难掌握。本文经反复实践,博采前人工作的长处,总结出一种容易掌握,比较可靠的收集清醒大鼠胰液的方法。为了检验本法的可靠性和稳定性,本文对清醒大鼠隔 日24 小时胰分外泌情况及术后第 6 日 2 4小时期间胰外分泌的动态变化进行了初步观察。材 料 和 方 法实验选用健康成年大白鼠,体重 2 。~ 2 80 克。手术方法 在 C ol w el l和赵连根等方法的基础上修改而成 〔“ , ` 〕。术前禁食 1 2小时以上,可自由饮水。腹腔注射戊巴比妥钠 ( 5 毫克 / 1 0 0 克体重 ) 麻醉动物后仰卧固定于手术 台上,无菌原则下行胰管造痰术 ( 图 1 )。腹正中切口,从剑突向下延伸约 4 ~ 5厘图 1 胰外分泌标本各导管位置米。进入腹腔后找到十二指肠,将其向左下翻转,寻找并辨认胆胰管。在紧靠十二指肠璧处分离胆胰管约 2 ~ 3毫米 ( 此处血管包绕甚密,分离时极易出血.,故须十分小心 ),.研 究生DOI : 10. 13471 /j . cnki . j . sun. yat -sen. univ (med. sci ) . 1984. 00292期 清醒大鼠胰液收集改 良法自胆胰管下方穿 2条O 号丝线,结扎紧靠十二指肠壁一端胆胰管,暂时保留线头。用眼科剪在紧靠结扎线上方的胆胰管壁上剪一斜形小 口,此时可见胆、胰混合液流出。以无菌纱布吸去外流的胆胰液,将一条去芯的电线外皮导管 ( 直径约 0.8毫米左右 ) 一 端剪成斜形,插管时斜面向下,插入约 2 ~ 3毫米后,以预先穿入的另一条线结扎固定。以第一条结扎线残留的线头将胆胰管再绑扎固定一次。上述步骤完成后,在距肝胆管分支以远约 5 毫米处分离并双重结扎胆总管,在结扎线近端肝脏一侧的管壁上剪口并如前法向歼脏方向插管,结扎固定。在十二指肠第二部血管拌之间缝一荷包,引流胆汁的导管远端壁上剪 1 ~ 2个侧孔,插入十二指肠腔部分的导管 以 1厘米左右为宜,结扎固定荷包缝线。在十二指肠第一部插入一条适 当长度的电线外皮导耸。导管插入端不要剪成斜形,也在靠近末端的管壁上剪 1 ~ 2个侧孔,插入深度以 1.5厘米左右为宜,荷 包 缝扎固定。胰主导管插管及十二指肠插管分别向右下和左上穿过腹壁肌层。穿出部位根据不同大鼠胃肠位置变异性情况灵活掌握,以顺为度。出 口处以 丝线悬 吊固定。胰主导管插管经皮下从靠近尾巴根部约 1。5厘米处的背部穿出体外; 十二指肠插管也经皮下 自 肩脚骨之间的背中线穿出,每鼠腹腔内放置青霉素粉末 10 万单位,分层连续缝合腹部切 口。两条导管穿出皮肤处亦需缝扎悬吊固定。以金属接管 ( 用7或 8号注射针头制得 ) 接通胰主导管插管与十二指肠插管,使胰液经体外返回十二指肠。最后沿导管在背部缝扎固定两处,以防动物咬断或撕脱 ( 图 2 )。属崔奋图2 背部导管固定术后护理 动物术后置于特别的 鼠笼内。该笼系 用铁丝网将一般鼠笼隔开,每格宽约 5 、 6 厘米,高约 20 匣米,长约厘 40 米,短格一 鼠。动物在笼内可前后走动或站立转身,但咬不到背部导管,动物清醒后即可进食、饮水,逐 日观察粪便与饮食情况。映液收攘 将大鼠置于改良的 Bol ma n大鼠笼内。拔开金属接管,经胆胰管自然流7 6 中山医学院学报 5卷出的胰液直接滴入预先称重的离心管管底。收集 24 小时胰液时,还应将离心管冰浴,并使胰液流入液体石蜡之下,以免蒸发。胰液分析 胰液流率,蛋白浓度及排出,碳酸氢盐浓度及排出按赵连根等的方法进行 〔`一。胰液淀粉酶活性测定按广州中医学院生化教研室唾液淀粉酶测定方法稍 加 修改。酶活性单位的定义是:每毫升胰液在 37`C 中保温 15 分钟,在实验条件下水解 1 毫克淀粉至遇碘不呈蓝色为 l 单位。结 果一、清醒大鼠隔日24 小时胰外分泌情况共同动物 23 只,分两批进行实验。术中因麻醉过度死亡 1只,术后 2只无胰浓流出( 原因不明 ),其余20 只全部成功 ( 87 % )。这些动物至少存活 5 天 ( 9 天后未继续观察 )。未见死于休克、出血或肠梗阻者。大部分动物 1 、 2 天内即从手术状态中恢 复,可进饮食,一周内神态良好。1、胰液流率:为避免持续引流胰液造成动物脱水及电解质平衡紊乱等并发症,本实验采取隔天收集胰液的方法。第一批动物于术后第 1、3、5、7、9 天收集 24 小时胰液,第二批动物于术后第 2、4、6、8天收集,结果总结于表 1和图 3。:百! {崖王l `: }奋姻彻卜目自.《留书、与血尽留盆相同)下.自铆.t争占竹叫鸣城讨诚豁书ǎ座牛\2仑一·浑à公 一 才一~ 一任玄矢 ,图 3 清醒大鼠隔 日 2 4小时胰液流量 ( X士 S D )2 、 各项生化分析结果总结于表 1、图 4、图 5和图 6。2 期 清醒大鼠胰液收集改良法 7 7场0.I+仍.MO。aN0.I+[。工NO州仲闪仪16.“利丙。.的。境卜工洲0.O。1l+门协.娇利0勺仍。卜的。双引。。工多 O )H-境.闪1O匀 口匀仍。.0钊妈抽。们。仪l+。.闪凶目。的引“.璐0.雳tl+。.蕊们口.“l+1;叫七、卜08.。引价N。O0.2刹囚目“-力引6-的0.的目衬I+080.`1+,.“z卜6利的。6闪刹8.囚月七O 《力宾冬盛|瞬介8,的户哪尸Z公称戚常6户卜尹尸T今形汤。.0+l6“.卜.N刹8叫闪O。仲引口.心。.“门+l卜.呼卜。工妈利;”,户 三。0.+l卜灼ea .。+I寸。门N的。“+l卜.。L.协以1刹卜.09伪的.匀+I80.入引“的工卜.+I?工-阅矛 宫。0.0引9伙,O。91”0.+I8哪.的+l8留,。。哭1。时,.付+Iao?的利N.8。“荆目11,.卜。1+IO。哪”.l,口“闪。璐I的0“.卜利1丙。.祠+lL.的1。一引目O。.2+t8.1的。工I叫.卜O。I.的 宫O之 三ǎ翎恺琢书献袋降à嵘职侧胃牟州圳衅眺训令岔堪踢蒸叮麒醒只陇胆宫ǎ言令对Z\咖翻碱à书鸽娜艰嘀昭(常\纲翻耐碱)侧说渊喊嗯娜ǎ学锌长à恐班治奈澳八蓄·ō、哪之碱艰)书头妈公咖ǎ卞耐\碱è码洪岭屯咖ǎ含·ū,哪之卞崛è价嘱彩公常命*娜l邢以中山医学院学报一一一 ~ ~ ~ 一一一一- - 一一一一一.一一5卷~一一一一- 一.一一一一一一一蛋白排出ǎ毫克/24小时è蛋白浓度ǎ毫克/升)图 4 清醒大 炙隔 日 2 4小 时胰腺蛋 白分泌情况 ( X 士 S D )一l魂二̀土丁l且东̀那占份.百德`,里工节像下落娜澡冬注工一兮资番.扭̀.上T.里瓜t未叮犷才甲̀.f卜飞子,工t.二犷爱去动飞注性J,滋1皿“ l幼淀扮酶单位ǎ万)0 了图 5 清醒大 氛隔 日 2 4小时脆液淀汾薛分泌情况 ( X土 S D )口OC3 1排出ǎ毫当量24/小时è国CO3 ,浓度ǎ毫当量/升à图 6清醒 大 鼠隔 日 2 4小时腹赚 H C O3 一分泌情况 ( X 士 S D )2 期 清醒大鼠胰液收集改良法 79二、清醒大鼠24 小时期间胰外分泌动态观察 8只动物,术后第 6天进行实验,每小时1 份标本,共 24 份。收集胰液期间每隔 4小时经 B ol l ma m 笼前孔喂饮生理盐水 l次,除 1只动物因中途挣扎致导管拔脱外,其余 7 只均顺利完成全部实验,结果见图 7。图 7 清醒大 鼠姨液量、蛋白、H C O3 一浓度 24 小时动态 变化 ( X 士 S D )国CO3 .浓度ǎ毫当量/升à蛋白浓度ǎ一佗克/升à流率八毫/小时讨 论一、关于方法学综合文献报道各种方法的优点,我们在实践中体会到下列几个问题是胰管造痰术成败的关键,1.导管:以软、韧、管壁薄及内腔光滑最为理想。目前国外多使用聚乙烯导管 ( P ol-y o t h y l e n e t u b e ) 或聚乙烯化合物的导 管 ( Po l y v i n y l t u b e )。我们曾用市售管径 2毫米的聚乙烯导管在沸水浴中拉制成适当粗细,用以引流大鼠胰液。这种管有壁薄,内面光沿,抗腐蚀性张等优点。缺点是质地较硬,韧性差而易撕裂 ( 国外同类产品是否无上述缺点尚需核实 )。本实验选用赵连根等介绍的电线外皮导管,质地软韧引流效果较好,但这种导管在十二指肠内 3 ~ 5天就会变色,变硬,还可能有一定毒性,故只适宜于短期内的实验,因此有待于选择更理想的导管。2.从主导管插管部位及方向:文献中描述的主要有下列几种情况:( l ) 从距肝 门约 5毫米处胆总管向胆胰管内顺行插入 之” ) 。( 2 ) 切开十二指肠,自十二指肠乳 头 插入一 “ 。( 3 ) 开腹后将十二指肠向右翻转,使胆胰管的行程位于幽门部之后,十二指肠内侧,然后从靠近十二指肠壁的胆姨管插管一` 」 。本实验采用 Co l w e l 法的 插 管 部位,所不同的是原法中欲主导管插管行程较短,向后下进入“人工胆囊” , 而本实验中主导管较长,直接从右下腹壁穿出。实践证明此法暴露良好,解剖位置清楚,操 作 方便,胆汁改道再通管的走向与十二指肠降部平行且无压迫之虞,效果比较满意,缺点是十二指肠球部稍有扭曲,但不影响胃内容物向肠内排放。80 中山医学院学报 5卷3.姨主导管起始段的固定:除插入胆胰管内的导管部分需结扎固定外,利用结扎胆胰管末端残留的线头再将胰主导管插管结扎固定一次可减少导管与胆胰管成角、管 口贴壁。4.肠内段导管侧孔:我们在胆汁改道再通管的远端及十二指肠插管的起始端剪 1~ 2个侧孔,以防止动物改变体位时导管顶端与十二指肠壁粘贴造成引流不畅,实践证明是可行的。5.导管穿出肌层和皮肤处的固定:两条引出体外的导管穿出肌层和皮肤处均需结扎固定,但应 当有缓冲余地,使动物在伸展或蜷缩时不至于拉脱导管或拓裂管壁。6.导管在背部的固定:背部缝扎固定导管比用胶布枯贴更方便,可靠。7.护理:术后动物常常撕扯、咬断导管,即使从背部引出也不能完全进免。我们将一般鼠笼分隔成适当大小,既防止了 B ol l ma n笼内完全制动的弊病,又克服了动物 撕咬导管的缺点,实践证明效果良好。二、清心大眼的姨臃外分泌1.隔 日2 4小时胰腺外分泌情况流率:术后 2 4小时内越液流率相当低,随着动物从手术打击 中恢复肤液流率也逐渐升高,绝大多数动物于术后第三天流率稳定在较高水平,因此对于胰腺外分泌的研究在术后第三天开始为宜,这与 C ol we l 的报道墓本一致叹 “ 」 。单日收集胰液的 1 只 动 物中有 3只于第9天仍保持 良好的流率,与 P e dr azzol i等报道的 2 0% 相近、 ’」。蛋白浓度:文献中关于胰液蛋自浓度的报道差 别很大。本文结 果 比 La o g i o r、 ” 〕G r o S 5 m a n 户·B o u r r y`报告的高,比 P e t o r s en 等的低 之. , 与国内赵连根等的结果相近一 ` .有人认为姨液蛋 白浓度的差异与动物品系有关 〔’ 士。与 Pe d r a z z 。 h 等的发现不同,本实验在术后 1~ 9夭内蛋自浓度无明显增高趋势,其原因可能与动物品系差异以及实验期间动物的营养有关。户淀粉酶:由于测定方法与文献报道的不 同,所得结果难以比较。D o w ae 瓦等发现大鼠胰液的慢性引流可导致肤腺消化酶的不平行分泌,胰蛋白酶元,糜蛋 白酶元,狡基从酶 B及脂肪酶的浓度逐渐升高,而淀粉酶的浓度则逐渐下降 〔` 。 。本实验也观察到 术后 2 ~ 9天内蛋 白浓度基本保持稳定,而淀粉酶活性则有逐渐下降趋势。造成这种结果的原因可能就是腆液内各种酶的比例发生了变化。碳酸氢盐浓度文献报道结果相差很大,本文结果与 S ha w等报道的相近一 ’ ` ’2.2 4小时期间胰外分泌动态观察文献中未见 24 小时期间胰外分泌动态观察的报道。从本文少量动物结果来看, 2 4小时期间胰液流率、蛋白及碳酸氢盐浓度基本保持稳定。有实验证明胰液和胆汁的丢失会因取消了胰酶对腺细胞、导管细胞的负反馈作用而出现胰液量增多和姨酶活性增高。因此许多学者在实验过程中同时进行了胰液的再循环,即将另一只动物或已收集沟本身的姨液以流率相等的速度输回十二指肠内 卜” , ` “ 一 ’ 。由于条件所限,本文未进行胰液再循2 期 清醒大鼠胰液收集改良法 8 l1 .环,但流率及蛋 白浓度并无明显变化,因此实验期间胰液再循环是否绝对必要有待进一步探讨。萝考小1、本文对收集清醒大 以胰液的全过程作了较详细的描述。对文献中有不同描述的次主导管插管,术后护理和 B ol l二a 二笼等作了修改,对文献中未提及的几个技术细节作了补充:( 1 ) 胰主导管插管起始段的固定; ( 2.) 十二指肠插管、胆汁改道再通管肠内段侧孔 , ( 3 ) 引出体外的导管在穿出肌层和皮肤处的固定, ( 4 ) 背部导管的固定。2、术后 第 1~ 9天隔 2 4小时胰外分泌情况及术后 第 6日 24 小时期间胰外分 泌 动态规察结果提示,用本法进行清醒大 鼠胰外分泌研究的时机选择以手术第 3 夭后,平衡 3。~6 0分钟开始为宜。( 木 法在摸索过程 中曾得列 天津市急腹症研 完所一赵连根老师 的指 导,行此致渐 )参 考 文 献〔1〕 P e d r a z z o l l 5 e t a l:T e o h o i q u e f o r e o l l o e t i o n o f p a n e r e a t i e j o i e e f : o mr a t s。王之e 且 d G a s t r o o n t 。 : 0 1 7: 3 1 , 1 9 7 5〔2〕 工工a b e : i c l 、 F 丁 e t a l:P l: y s i o l o g i e a l s t u d i o s o f e x o e r i n e P a n e r e a t i e s e e-r e t i o n i n e o 且 s e i o u s r a t s。1.C o m m u n i e a t i o n:S u r g i e a l me t h o d s a n dr e g i s t r a t i o n t e e h n i q : 1 0 5.2 G a s t r o e n t o r o l 1 8: 4 2 7一 1 9 8 0〔3〕 C o l w e l l A 尺:C o l l e e t i o n o f p a n e r e a t i e j u i e e f r o m r a t s a n d e o o s e q u e n e e so f i t s e o n t i n u e d 10 5 5.A m J P h y s i o l 1 6 4: 8 22, 1 9 5 1〔4〕 赵连根等:清脆汤 1 号对大 鼠咬腺外分泌功能的影响。中由 医 结合 杂 会 1 ( 2 ): 9 8 , 1 9 8 1〔5〕 L o v e J W:A m e t h o d f o r t h e a s s a y o f s o e r e t i o n, u s i n g r a t s。Q u a r t JE x p p h y s i o l 4 2: 2 7 9 , 1 9 5 7〔6〕 L a u g i e r R, e t a l:A e t i o n o f o l e i e a e i d o 且 t h e e x o e r i n e p a n e r e a t i es e e r e t i o n o f t h e e o n s e i o u s : a t: e v i d e n e e f o r a n a n t i一 e h o l e e y s t o k i n i n-p a l c r e o z y m i n f a c t o 1’.J P h y s i o l 2 7 1,8 1, 2 9 7 7〔7〕 G r o s s m a n M l:P a n e r e a t i e s e e r e t i o n i n t h e : a t.A 扛 2 J P h ys i o l 1 9 4:5 3 5, 1 9 5 8〔8〕 B o u r r y J e t a l:S e e i·e t o r y p a t t e : n a n d p a t h o l o g i e a ls t u d y o f t h e p a n e r-e a o o f s t e r o i d一 t : e a t e d : a t s.A 皿 J D i g D i s 2 3 ( 5 ): ` 2 3, 1 0 7 8〔9〕 P o t e r s e n H e t a l:P a n e r e a t i e e x o e r i且 e s e e r e t王o n i n a n e s t h e t i z e d a n dc o n s c i o u S r a t s.A m J P h y s i o l 2 3 3 ( 6 ):E 5 3 0, 1 9 7 7妙珍J户8 2 中山医学院学报 5 卷〔 10〕 D e W a e l e B e t a l:N o n一p a r a l l e ls o e r o t i o n o f p a n e r e a t i e o n z y 皿 。 5,E f f e e t o f p a r e n t o r a l a m i u o a e i d a d皿 i n i s t r a t i o : a n 、王 i n t e s t i n a l r e i n f u-5 i o n o f b i l三。 一 p a n e r e a t i e jo i e e。D i g e s t i。 : : 2 9 ( 1 ): 1 5 , 1 9 7 9〔1 1〕 S }l a w H M e t a l : T h e s i g n i f i e a n e e o f l、 o r m o n e s , b i l e s a l t s , a n df e e d i n g i n t五e r e g u l a t i o 且 o f b i l e a n d o t l e r d i g e s t i v e s e e : e t三o n o i n r a t.A u s t J B i o l s e i。2 5: 1 4 7, 19 7 2〔1 2〕 G r e 。 。 G M e t a l : P r o t e i n a s a r e g u l a t o r o f P a n e r e a t i e e n z 了m e s o c r e -t i o n i n t h e r a t.P r o e S o e E x p B i o l Mo d 1 4 2: 2 2 6 2,1 9 7 3A n Im 1P’ o v e d P or ce d u祀 fo r C ol 把 ct io n 哎 P a n cr ea it cJ u i e e f r o m C o x: s e i o l泛5 R a t sWa n g G u i x i 王_; o u C a 且( D o p a r t m e n t o f P a t h o p h y s i o l o g y,Z h o n g s h a n M e d i e a l C o l l e g e )A b st ar cti甩 P : o v e dd e s e r ib e dm o t h o d f o r e o l l e e t i几 9 p a n e r e a t i e j u i e e f r o m C O a S C 10 U Sr a t s i n t h e p r e s e n t s t u d y.I n 几 o v a t i o n w a so f t h e p o s i t i o n a n d d i r e e t i o n o fe s t a b l is h e de a n n u l a i nnS人.1m o 」i艺i c a t沁且p a J: e : c a t i e、 ; u e乞 a s w o l l a s t h e s t r u e t u r et }x e i n s e r t e do f B o l l m a n c a g e。乙 t t e u t i o n l l a s 公 15 0 b e e n p a i d t o t l: e p o s t o p o r a t i v e C a r e - S e v e r a lPa r t i e l : l a rt e e l l n i q : : e :n 。 之 y o t (了c s : : i b 。 : i n t h e l i t e r a t u : 。, s u e ha八 5 o f 价冷 c a n 几泛 a 歇创 : t ! e 犯 ct h c 卫己泣以艳且 a1爪 l1( 1 ib 卜 , C扮 c u al c a n 且 lu a, : 、 e r 。a S产仁、工t h e f i x a t i o n叮。巴扭 g 八九。 f t五e11 0 l e 5d王f f e r`己n t。 且 b o t !:d e t a 三I c二。护a n e r e a t i c c x o e r i且 e 。 。 e r e t i 。 且 竹 孔 : ( 卜: 以·v C di旦 d i c e s i 且 c l u 。: e 、 l t l: e Y o lb i e a r b 。 : 一a t c a : 、工乡1·。 t e i且,: :二 。 ( : n l / 2 1 士1 o r : , 1 1/毛O 1呈卫 ),t l z eIn 3 2乞l l er a t s。人丁。 a s u r e 、 1C`讨比 创三七r a t呈o n ()丈a : l d i灯 仗 r·: n e :·。 a t王e i u i e :.T l 东r c s u l t s s } : 。 、 了二·。 , r o d u e i b i l i t丁t h a t。I七O U r n e 几了a m y l跳 c 鱿 t认孙·oc e d u : e h以 : a t i : f a e t: :·办一:·。 l i a t·王1呈t J a :几成1 5S u g g e s t e d 三n lte s t u d了 d 卜 a cl 扰叭让 姗 代五此s c e r e t i o 且 i n e o n s c i c u s a t s,t l」 et h a tt 12三r F o s t c p e r a t i v c c a Ja St {l ea「n a P p r o l: r i a t e t i皿 。 t o b e g i n w i t h, a n d t l: 。 于a 上 e : e : t i e11 ( u l乙 b e cl ( :i吐 C。 : 二 f e 忱 dC习1 Uf i r s t 3 0 ~ 6 0 n : i攀 。 f e o l le e t i o n 5 1] o u l d b : 己i : e a : d o d。

清醒大鼠胰液收集改良法

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清醒大鼠胰液收集改良法

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