自然杀伤(NK)细胞在体内可以抑制肿瘤的发生,发展和转移,是机体执行免疫监视功能的重要效应细胞。NK细胞对肿瘤细胞的杀伤作用受到很多因素影响和调节。最近Brovall等人报告,电离辐射在体外可以抑制人NK细胞的活性。为了解按受放疗的肿瘤病人NK细胞功能的改变,并寻找对这种变化进行调整的办法,我们进行了干扰素对放疗后鼻咽癌病人NK细胞功能影响的初步观察

区大卫

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第 5卷 第 4期 中 山 医 学 院 学 报1 9 8 4年 A C T A A C A D E M IA E M E D I C IN A E Z H O N G S H A NV o l.5 , N o Z1 9 8 4干扰素在体外对放疗后鼻咽癌病人自然杀伤细胞功能的影响区大卫 蔡体育 李 端 陈爱珍 简志瀚( 肿瘤研 究所 )蓝家权 梁培根( 刀中瘤医 院 )自然杀伤 ( N K ) 细胞在体内可以抑制肿瘤的发生,发展和转移,是机体执行 免疫监视功能的重要效应细胞 “。N K 细胞对肿瘤细胞的杀伤作用受到很多因素影响和调节。最近 Br o v a l l等人报告,电离辐射在体外可以抑制人 N K 细胞的活性 〔, 〕。为了解按受放疗的肿瘤病人 N K细胞功能的改变,并寻找对这种变化进行调整的办法,我 们 进行了千扰素对放疗后鼻咽癌病人 N K细胞功能影响的初步观察。材 朴 和 方 法观寮对象 经鼻咽组织活检病理确诊的未治疗鼻咽痛病人。放疗方法( 1 ) 鼻咽部. OC 。 ( 丫线剂量率:68 一 85 R /分 ) 外照射。经双侧耳前辅以 眶下或鼻前野轮流照射,旬天一野剂量 3。。R, 3周内给 15 次。( 2 ) 颈部 Z10 K Y X 线 ( 剂量率: 9 0一 1 1 7R /分 ) 外照射。前后分隔野轮流 照 射,每天一野剂量 25 01 之。3周 内给 15 次。肿右细胞 体外培养的人慢性髓性白血病 I义5 6 2细胞系。培养液 含1 0%小牛血清的 1 6 4。培养液。干扰变注射液 50 万件 /毫升 ( 广州市医药卫生研究所产品,批号 8 3 0 7 0 1 ).淋 巴细胞制备 取鼻咽癌病人静脉血_,按常规的 iFcol 卜 H y pa q u e密度梯度离心 法分离到人外周血单核 自细胞,在培养液中 3 7 C孵育 1小时,用贴壁玻璃法除去单核巨噬细胞,得到欲应淋巴细胞。将细胞浓度调至 5一 10 x l 。”/毫升。效应淋巴 细胞的干扰素处理 用 2x l 0 3 “ /毫升于扰素与效应淋巴细胞 于 37 ℃孵 育 l小时,然后用培养液洗一次,将细胞浓度调至 5 X I 。”/毫升。” ’C r释放试 验一一测定 N K效应淋巴细胞对靶细胞的裂解率 〔“ 〕。( l ) 标记靶细胞:取需要量的 K 5 6 2细胞,洗一次,每 1 x 1 0.瘤细胞加 入 1 0 0协e iDOI : 10. 13471 /j . cnki . j . sun. yat -sen. univ (med. sci ) . 1984. 00232期 干扰素在体外对放疗后鼻咽癌病人自然杀伤细胞功能的影响 41N a: ” c ro`溶液 (科学院原子能所, 1 6.4 m c i/ 毫升 )。再加入含 5%小牛血清的培养液D.5毫升置 37 ℃温箱孵育 1小时,( 每 15 分钟摇动一次 ) 然后洗 3次,用培养 浓 调 至 I X1 0 ` /毫升。( 2 ) 试验方法:取效应细胞和标记靶细胞各 0.1毫升于 40 孔 U 型底培养板孔中 作实验组。加入培养液和标记靶细胞各 0.1毫升为自发释放组。加入 6%聚乙二醇辛基苯基醚和标记的靶细胞各 O。1毫升为最大释放组。经 3 0 x g离心 5分钟后置含 5 % C O:的溯湿空气中, 3 7℃温箱孵育 4小时,再经 6 0 x g离心 10 分钟后每孔吸上清。.1毫升置 10 x 4。毫米塑料试管中用r计数器测定释放到上清的” `C r c p m值,每孔5 `C r 释放实际值为 (测定值c p m均数 一 本底c p m 均数 ) 又 2, 0.1毫升标 记靶细胞的 C P m为总掺入值,上述每组均作 3 个平行孔试验。靶细胞裂解串计算公式:靶细胞裂解串 “实验组c p m 一 自发释放组c p m最大释放组c p m 一 自发释放组c p mx 1 0 0%结 果一、放疗对鼻咽密病人 N K 细胞功能的影响。鼻咽窟病人 54 例,接受第一个疗程放疗前后取血检查 N K 细胞活性。结果故应 细胞与靶细胞比例 E:T为 1 0 0: 1时,N K细胞对靶细胞的催解串放疗前为 64 士 17 ( % ) ),放疗后为 4 士 13 ( 万 ) ( 图 1 )。表明在本治疗条件下,放疗可导致自然杀伤细胞活 性明显降低 ( P < 0.0 0 2 )。图 l 放疗时弃咽癌病人N K 细胞功能 的 影 响。 巴 ’C r 释 放试脸E:T 二 10 0: l 工。放疗前,亚。放疗后;玉下贬耘!:t上纂卜叶盛炸游1菇咋碑中山医学院学报 5 卷二、干拢索对放疗后 鼻咽癌病人 N K细胞功能的影 响。介咽癌病人 34 例,经第一疗程放疗后取血检测干扰素处理对 NK 细胞活性的 影 响。结果当 E:T为 5。 : 1时,对照组 N K 细胞对靶细胞的裂解率为 34 士 1 2 ( % ),干扰 素 处理组为 50 士 18 ( % ) ( 图 2 )。表明干扰素处理可以明显提高放疗后鼻咽癌病人自然杀伤细胞的功能 ( P < 。.0 01 )。图 2 干扰 素对放疗后 弄咽瘾 病人N K 细 胞功 能的影响。 “ `C r释放试验的 E:T 二 50: 1工.对照,互。干扰紊处理 后讨 论电离辐射可以杀伤肿瘤细胞,也可能损害正常的组织和细胞,免疫活性细胞也不例外。1 9 5 1年 以来,陆续有学者报告电离辐射对免疫系统,尤其是 T和 B淋巴细胞功 能 的抑制作用.一毛一 。近年,随着 N K细胞重要功能的发现,电离辐射对 N K细胞活性影响的 研究,逐渐受到重视。H e r b o r fn e 二等人报告用3 5 o R全身照射小鼠后 。一3天,N K活 性 无明显改变,而照射责为 S OOR时,照射后 1一 3天,N K 活性降低 70 % 以上 〔” 〕。S h e 月a 。 等用 50 0 R照射大鼠后三天,N K活性降低 , 照射量为 90 OR,则活性完全丧失 〔. 〕。L a en 等将小鼠暴界于大剂量 X线照射 ( 4 O SR ) 后 4 周,牌细胞失去N K 活性。照射后 8 周 才一观察到恢复,认为活性恢复慢的原因是调节性细胞受到损伤 〔7 。B r o v al l等人 曾用 3 0 0 0rad 剂贡的r射线在体外照射 4 9名健康成人周围血单核白细胞,观察对自然杀伤 细胞活性的渗响,结果女性邪人 中有 3人,男性 26 人 中有 4 人表现出耐受,维持原来活性。照射剂责较低时,如 1 0 ORa d以下,可见对 N K 细胞功能有激活作用 〔2 它。本文观察放疗对 N K活性影响的 54 例病人,除 4例改变不大, 2 例反而有升高外,其余 48 例均降低,N K 活性平均降低为 30 %左右。这些差异反映了不同个体的 N K 细胞对辐射的敏感性不 同。弃2 期 干扰素在体外对放疗后鼻咽癌病人自然杀伤细胞功能的影响 43咽癌病人放疗后,N K 细胞功能降低的原因可能有:( 1 ) 辐射引起 N K 细胞损 伤,使有效 N K细胞数目降低。本文观察的病人放疗后淋巴细胞总数约减至放疗前 的 1 / 2到 1 / 3。( 2 ) 调节 N K细胞再生和恢复的调节性细胞受损害。( 3 ) 肿瘤细胞经辐射破坏 后,释放出某些物质抑制了 N K 细胞功能。我们曾用鼻咽癌组织提取液与正常人 N K 细 胞孵育,结果对 N K 活性有明显抑制作用。( 4 ) 部分骨沈受辐射损伤导致骨髓中N K 细胞前体数目减少。干扰素是一类高活性,具有抗病街、抗肿瘤和调节免疫等多功能的旦白,在体内外对孤K细胞功能均有增强作用,是调节 N K 细胞功能的重要介质。其作用机制 可 能 是:( 1 ) 促进前 N K 细胞分化为成熟的 N l针刚包,.曾强 N K效应细胞的数 目。( 2 ) 激活 N K细胞,增强其对靶细胞的裂解作用。( 3 ) 提高 N K 细胞的周转作用力 〔`二。T or ga n等人报告经干抗素处理过的 N K细 胞对前列脉紊 E:引起的 N K活性抑制作用有耐受性 〔. 〕。5 0 : 和 D u s a m a 分别用干扰素处理肝癌和乳腺癌病人的 N K 细胞,结果增强了N K细胞活性 〔“ ’ 。 。我们 曾观察本文所用的干扰素制剂对正常人 N K 细 胞功能的影响,结果活性浓度为 2 x 10“单位 /毫升时对正常人 N K 细胞活性有明显的激活作用。本 文所观察的 3 4例放疗后 鼻咽癌病人的 N K 细胞 ; 经干扰素处理后,除一例稍为降低外,其余为 有增强作用,说明干扰素对放疗引起的 N K细胞功能损害有调整和增强作用,提示对接 受放疗的奥咽癌病人,可 用干扰素作为综合治疗的一部分,以恢复增强患者 N K细 胞 劝能,提高疗效。参 考 文 献〔1〕 H e r b e r m a n R B e t a l: N a t u r a l k川e r e e l l s: t h e i r r o l e i n d e f e n s . ,a g a i n s t d i s e a s e。S e i e n e e 2 1 4: 2 4, 1 9 8 1〔2〕 B r o v a l l C e t a l : R a d i a t i o n s e n s i t i v i t y e f h u m a n n a t u r a l k i l l e r e e l l :e o u t r o l b y 工一l i n k e d g e n e s。J I m m u n o l 1 2 6: 2 2 3 6 , 1 9 8 1〔3〕 B r u n n e r K T e t a l:T h e” ` C r r o l e a s e a s s a y a s u s e d f o r t h e q u a n-t i t a 七i o n m e a s u r . m e n t o f e e l l一m e d i a t o d e y t o l y s i s 王n v i t r o.I u B a r r y尺 B 10 0 皿 (e d ) “ I n v i t r o nr e t h o (15 i n e e l l m e d i a t e d a n d t u m o ri m m 让 n i t y ”。P瑶2 3 , 1 9 7 6〔4〕 D o r i a G e t a l : S e l e e t i v o e f f e c t s o f 玉o n i z i n g r a d i a t i o n , o n i m口 u o-r e g认 l a t o r y e e l l s。Im m u n o l R e v.6 5 : 2 3 , 1 9 . 2〔5〕 Ll e r b e r m a n R B e t a l:Na t u r a l e e l l一m e d i a t e d i m m u n i t y.A d v i口 C a n -e e r R e s e a r e h。2 7 : 3 0 5 , 1 9 8 7〔6〕 S h e l l a m G R。 t a l:G r o s s一V i r u s一i n d u e e d l了m P h o m a i n t h e r a t.I n t JC a n e e r 1 9: 2 2 5,1 9 7 7〔7〕 C u d k o w i e z G e t a l:D o n a t u r a l k i l l o r e e l l e n g a g e i n r e g u l a t e d r e a t i-4 4 中山医学院学报 5 卷o n s g a i n s t s e l f t o e n s u r e h o m o o s t a s i s ? Im 田 u :: 0 1 R e v 堪4: 2 3 , 2 9 7 9〔8 〕 T a r g a n S R o t a l:T h e d u a l i n t e r r a c t i o n o f p r o s t a g l a n d i n E Z ( I)G E:)a n d i n t e r f o r o n ( I F N ) o n N K l y t i c a e t i v a t i o n.J Im m u n o l l 艺7: 1雀2峨,1 9 8 1〔 , 〕 5 0 :、I反 c t a l:D e p r o s s e d n a t u r a l k i l l o r e c l l a e t i v i t y i n P a t i c : 、 t 、 w i t hh e p a t o一 c e t l u l a r e a r e i n o nr a.C a n e e r 5 0: 2 8 2 2 , 1 9 8 2〔 1 0〕 D u s a n n a C R o t a l:N a t u r a l e y t o t o l i e i t了 o f p e r i p h e r a l b l o o d ! y m p h o-e y t o s a 且 d r e g i o n a l l y m p h n o d e e e 生10 i n b r e a 、 t e a n e e r i n w o m o n.JN a t l C a n e e r I n s t 6 3: 5 8 5 , 1 9 8 1飞,h e E f f e e t o f In t e r f e r o n o n t h e N K C e l l A e t i v i t i e s o f t h eP a t i e n t s w i t h N P C A f t e r R a d i a t i o n e r a p yO u D a w e iC h e n A i z h e nD o n g J i a Q u a n C a i T i y u L i D u a 只L i a n g P e i G e n J i a n Z h i H a n( Ca n e e rIn 、 t i t u t e a n d l { o s p i t a l o f Z h o n g s h a n M e d i e a l C o l l e g c )A b s t r a C tT he i n f l u e n e e s o f t h e r a d i a t i o n t il e r a p y o n t h e N Ke e l l a e t i v i t i e s o f s `p a t i e n t s w i t h n a s o P h a r y n g e a l e a r c i n o m a ( N P C ) w e r e o b s e r v e d.T h e e y t o-1了: 15 a e t i v 主t y o f N K e c l l a g a i n s t K 5 6 2 t a r g e t e e l l w a s 6 4 士 1 7 b e f o r e r a d i-a t 10 0 a n d 4 4士 1 3% a f t e r r a d d i a t i o n ( E:T 二 1 0 0: 1 )。T h e r e s t : I t i n d i e a t e d t h er a d i a t i o n t h e r a p y e o u l d r e d u e e d t h e N K e e l l a e t i v i t y ( P < 0.0 0 2 ).T h ec f f e e t s o f i n t e r f e r o n ( I F N ) o n t h e N K e e l l a e t i v i t i e s o f 3 4 p a t i e n t s w i t hN P C a f t e r r a d i a t i o n t h e r a p y w e r e s t u d i e d.T h e e y t o l y s i s a e t i v i t y o f N Ke e l l a g a i n s t K 5 6 2 ta r g e t e e l l w a s 5 0 士 1 8 ;石 a f t e r t h e t r e a t功 a n t w i t h I F N a n d3魂士 1 2夕石 i n e o n t r o l ( E:T 二 5 0: i ).T h e r e s u l t s u g g o s t e d I F N e o u l d e n il a n e et h e N K e e l l a e t i v i t i e s o f t h e p a t i e n t s w i t h N P C a f t e r r a d i a t i o n t h e r a p y( P ( 0。0 0 1 )。

干扰素在体外对放疗后鼻咽癌病人自然杀伤细胞功能的影响

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干扰素在体外对放疗后鼻咽癌病人自然杀伤细胞功能的影响

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