胞浆基质结构性(Structuredness of thecytoplasmic matrix-SCM)指的是细胞胞浆基质在分子水平的一种物理状态,它反映了大小分子间的作用力,亦即反映了胞浆基质的微环境的粘度(microviscosity)。当有丝分裂原如:PHA,con,肿瘤抗原如:CaBp(肿瘤硷性蛋白)或肿瘤组织小块等刺激淋巴细胞时,胞浆基质结构性亦即微粘度会发生改变。由于胞浆内荧光分子的偏振光的改变与其微环境的粘度有关,因而可用荧光偏振技术测定SCM的改变,Cercek等称其为胞浆基质结构性试验(SCM test)。淋巴细胞

刘庆伦

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中山医学院学报 1 9 8 5年第 6卷第 1期胞 浆 基 质 结 构 性 试 验在鼻咽癌诊断上的应用刘庆伦 王园 李端 播伟雄 区大卫 简志瀚肿瘤研究所免疫室 )胞 浆 基 质结构 性 (s t r u e tu r e d n e s s o f t h ec y t o p la sm ic m a t r ix一S cM ) 指的是细胞胞浆基质在分子水平的一种物理状态,它反映了大小分子间的作用力,亦即反映了胞浆基质的微环境的粘度 ( m i c r o v is e o s i t y )。 、当有丝分裂原如: P H A,co n A,肿瘤抗 原如: C a B p ( 肿瘤硷性蛋白 ) 或肿瘤 组 织小 块等刺激淋巴细胞时,胞浆基质结构性亦即微粘度会发生改变。由于胞浆内荧光分子的偏振光的改变与其微环境的粘度有关,因而可用荧光偏振技术测定 s C M 的改变,C er ce k 等称其为胞浆基质结构性试验 ( S C M et st )。淋巴细胞处于 G。或 G:期时的荧光偏振值 P 最大,当进入S 期后,P 值可降至最低值。淋巴细胞受相应抗原刺激后,P 值发生上述相似的改变,他们认为,s CM 的改变和淋巴细胞的活化 有 关,可能反映了淋巴细胞对抗原刺激的应答的早期的反应〔 ` , 艺’ 。当用 P H A 及 C“ B p 或肿瘤组织块刺激 末口稍血淋巴细胞时,正常人与肿瘤患者反应类型是不 同的。来自肿瘤患者的反应淋巴细胞 ( s CMr e s p o n d i n g l y m p h o c y t e s ) 对 p H A 刺激表 现为偏振值 P 不变,而对 ca B p 刺激表现为 P 值下降。正常人的反应淋巴细胞的变化正好相反。因而 s CM t se t ( 胞浆基质结构性 试 验 ) 可 用于诊断肿瘤患者。本文对将此法用于诊断鼻咽癌 ( N P C )患者的结果作了初步报道。材 杆 与 方 法一、主要器材:日立 M P -F 4 荧光分光 光度计,配备有恒温样品托架。二、主要试荆:双醋酸荧光素 ( F D A ) ( k 。-eh一l i g h t l t d )用时配成 2.4 X 10一 。M 浓度。P H A:( 广州市医药工业研 究 所 ) 每 10毫克以 4 毫升生理盐水稀释。拨基铁粉 ( S I G M Ae h e m i e a l e o m p a n y )三、淋巴细胞制备:新鲜肝素抗凝血 5 毫升,以拨基铁粉法除去单核吞噬细胞,并用淋巴细胞分离液常规分离淋巴细胞,)涂片染色观察其淋巴细胞纯度可达 98 % 以上 ),以 16 4 0培液配成 4 x 10“个细胞 /毫升的悬液。四、弃咽瘩低分化上皮细胞株:中科院病毒所建株。洗三次,56 ℃水浴 45 分 钟 将 酶灭活,配成 1 义 功”个细胞 /毫升,每个样本使 用o·I X 1 0”个细胞。五、实验对象:.1 正常人:健康献血员1.初诊鼻咽癌 ( N P C )患者:指初次经病理学确诊而未作过任何抗癌治疗的患者。3.复发 N P C 患者:指临床治愈一年 左 右再经临床确诊为复发的,且取血样前三月 以上( 大部分一年 以上 ) 未作放疗、化疗的患者。4.无复发患者:指治愈一年 以上,临床上确诊无复发,取血样前三个月 以上 ( 绝大部分一年以上 ) 未作放疗、化疗的患者。5.头颈其他肿瘤患者:指经病理学证实为除鼻咽癌外的头颈部其他肿瘤患者,未经任何抗癌治疗。六、操作:取 5毫升离心管二支,每管加入 O·5 毫 升同一样本的淋 巴细胞悬液,然后、一竹加鼻咽癌上皮细胞悬液。.1毫升,另 一 竹 加 P H A 功 川及 1 6 4 0培养液 0.1毫升,37 ℃孵育拓 分钟,取DOI : 10. 13471 /j . cnki . j . sun. yat -sen. univ (med. sci ) . 1985. 0002出冷至 27 ℃加入 2.5毫升 27 ℃ F DA 溶液、混匀。于 2 7℃恒温样品托架上测定胞浆基质荧光偏振 度 (激发光波长: 4 7 0 n m , 裂隙 20 n m。发射光波长 5 10 n m,裂隙 10 n m ) 共测定 6分钟,用外推法计算:S C M 反应率: R R smn二P瘩细胞p P H A式中 P序细胞 代表用 0.1 nI l 鼻咽癌上皮细胞悬液刺激后测得的偏振度P P只A 代表用 P H A 刺激后测得的偏振 度。偏振度按公 式: P = 一粤l1日一 0 I-J十 G -L求出〔` ’结 果表 1 各 实 验 组 与 对 照 组 R Rs二 值R R s e M值分布平均 R R s e日 合符诊断率0。9 5yr { 1。0 5~一一一3 ! 30初诊 N P C 患者复发 N P C 患者无复发 N P C 患者头颈其他肿瘤患者3336231 71。2 1 士 0。1 70。8 6 士 0。1 10。9 1 士 0一181。0 9土 O。2 21。0 2 士 0一1 21 0 0%8 9%吕3 9石乏; 7%8 2%注:诊断符合率系指根 据 S CM et st 结 果进行 N P C 诊断与临床确诊相符的 比率。本文以 R R “二值低于 0.95 为下 界,拟 诊 时,R R~值低于 0.95 表明用鼻咽癌上皮细胞刺激后 P 值有较明显下降,因而可视为 N P C 患者。R R。值为 0.邪~ 1.05 之间时表明对 P H A 及鼻 咽癌上皮细胞的刺激, P 值均无明显变化,这与除N P C 以外的其他肿瘤者的情况 相 符,而 1.05以上则表明经 P A A刺激后, P 值有较 明显 下降,这与健康人及非癌患者的改变相符,因而R RS。值 0.95 以上则可视为不是鼻咽癌 患 者。讨 论一、关于 S CM et st 的特异性C e r “ ke 等分别报道了用肿瘤组织小块 ( 即所谓肿瘤组织相关抗原一 t o u m o u r t ss s ue a s s-o c i a t e d a n t i s e n ) 作为抗原刺激,进行 s c M 试验来诊断同一组织来源 的肿瘤患者并取得满意的结果〔3,巴 J ,他们发现仅同一组织来源的肿患者的 S C M 反应淋 巴细胞与该组织的肿瘤 小块共同孵育时,才起应答反应而发 生 SC M 的改变并认为这是由于这些淋巴细胞在体内曾经遇到过相似于该肿瘤组织所具有的某种抗原。如:结肠癌患者的淋巴细胞仅对结肠癌组织起反应,其他肿瘤患者,非癌患者及正常人的淋巴细胞则不对结肠癌组织起反应,因为它们原先在体内未遇到过这类抗原。欣 r c ek 还报道,当用 P H A 刺激时,正常人 4 5~ 54 %的淋巴 细胞起反应,肿瘤患者仅 15 ~ 23 % 淋巴细胞起反应而发生 S C M 值下 降,当用 C a B p 刺激 时,- , - 一护 谧`丈` 气议 艺 代、儿 , `中 , 哭 矿趋又 之沙嚼佗扮枯告 汤正常人仅 3 ~ 5 %而肿瘤患者则 3 6一 45 %的淋.口月,吐j皿甘.记“日,户`曰沪目甩公碑滩ǐ山..古甘目ó即不佬口月直甲:,ei-。.0卜西山」…怕乍七琴:.价…ù。.ǔ0,7一东}州六城娜恤! 一 l了犷尸蕊 } : }二正耳 人,咽 {肠 去毛图 R R sc m 值频率分布图·0 1·巴细胞起反应而 SC M值下降闭,可见肿瘤 患者的 S C M 反应淋巴细胞产生质或量的改 变,亦即淋巴细胞受某些特定抗原刺激而活化的功能有某些缺陷。本文用低分化的鼻咽癌上皮细胞作抗原进行 S CM 试验,正常人诊断 符合率为 1 0 0%,初诊鼻咽癌患者符合率 为 89 %。所以该试验在诊断肿瘤方面是有参考价值的。头颈其他肿瘤患者由于其 S CM 反应 淋 巴细胞缺乏对 P H A 及 N P C 细胞株的反应, s CM值无 明显改变因而 R R就。接近于 1.0。必 R aj sa et er 认为,用肿瘤组织作抗 原 时可能有某些交叉反应存在。本文头颈其他肿瘤组中 3 例假阳性可能就是由于交叉反应所致。因而如能采用更纯,更特异的肿瘤抗原时,相信会减少假阳性结果。二、关于复发及疗效估计ce cr ek 报道,复发的肿瘤患者 的 S C M 试验的表现与肿瘤患者一样,而手术成功彻底地摘除肿瘤后 24 小时内患者淋巴细胞 对 C匕B p 反应消失,继而恢复对 P H A 的反应,两周 内其S C M 试验的结果与正常人相同。本 文 中 87 %复发 N p c 患者 R Rs 。二与 N p c 患者相符。5 3%无复发的 O P C 患者 R凡c。与正常人相符,亦表该明方法在估计疗效与复发方面有一定意义。三、关于早期诊断eC cr ek 将艾氏腹水癌细胞注入正常鼠体内1 ~ 2 小时后,其 S C M 试验的改变即与患 肿瘤鼠的变化一样。他还通过注输不同量的癌细胞入鼠体后测 S C M 的方法推测,当人体 癌 细胞达 1 0。个时即可由 S C M 试验检测出来〔` ’ 。事实上子宫颈癌,胃癌等均可在临床的早期 ( 尚未累及粘膜下层时 ) 用 S CM 试验检测出来〔 7 ’ 。本实验中,初诊 N P C 患者绝大部分为早 期 患者,其 S CM 试验结果亦是阳性。无 复 发组中3 例阳性是属于假阳性还是临床上尚未发现复发尚在继续追踪观察之中。四、关于 SC M反应淋巴细胞必 R aj as et er 观察到用 P H A 刺激时,T 淋巴细胞表现为 P 值下降、非 T 细胞 表现 为 P值升高,他认为 T 淋巴细胞即是 s C M 反应细胞〔 3 ’ 。虽然这方面知道得不多,但如 能 制 备更纯的反应细胞,肯定会使 s C M 试验更敏感更特异。s C M 试验用于肿瘤诊断目前还是一 种 较新的方法,如能严格控制实验条件,其结果还是比较满意的。( 承蒙中山医学院肿瘤医院门诊鼻咽癌科,头颈科,放疗科医生协助提供病例,一并致谢 )参 考 文 献〔1 ] C e r e e k L a n d C e r e e k B : A P Pl i e a t i o n o !t h e P h en o功 en o n o f e h a n g e s i n s t r u e t u r e-d n e s s o f e y t o Pl a sm i e m a t r i x (S C M ) i n t h ed i a g n o s i s o f m a l i g n a n t d i s o r d e r s.E u or PJ C a n C e r 1 3: 903,19 77[ 2〕 K r e u l z m a n n H V e t a l.F l u o r e s e e n c e P o l a,r j Z a t io n c h幼 s e s i n m o n o n cu l e a r b l o o dl e u e o e y t e s a f t e r P H A i n e u b a t lo n : d i f f e·r e n e e s i n e e il s f拍 m Pa t i e n t s w i t h . n dw i t h o u t n e o Pl a s i公.B r J C a n e e r 3 7 ( 5) :7 97,1 9 78〔3〕 C e r e e k L a n d C e r e ek B : C h a n g e s i n t h es t ut e t u r e dn e s o f c y tOP l a s m i e m a t r三x ( S C M )i n h u m a n I ym P h o ey t e , i n d u e e d b y P H Aa n d e a n e e r b a s i e Por t e i n a s m e a阅 r e d I ns i n g l e e e l! 5.B r J C a n e e r 3 3: 5 3 9,1 9 7 6[ 4〕 小r ja s a e t e r H e t a l.R e s Po n s e o f T l y m P·h o妙 t e s t o 户y to五a ema g g l u t i n i n (P H A ) a n dt o e a n e e r、t i s s u e一a s s o e i a t e d a n t i s e n s.m e a·s u r ed b y t h e i n t r a e e ll u l a r f l u o r e s c e n e e P O-l a r i z a t i o n t e e h n i q u e (S C M t e s t ).B r J C a n-e e r 4 0 ( 4 ) : 62 8.1 9 7 9〔5 ] C e r e e k L a n d C e r e e k B : A P Pa r e n t t u m o u rs P e e i f ie s t y w i t h t h e S C M t e s t.B r J C a n-C e t 3 1: 2 52,1 9 75[ 6〕 C e r e ek L a n d C e r d e k B : C h a n g e s i n S CM·r e sP o n s e s o丈 l y m P h o e y t e s I n m i e e a f t e rim P la n t a t i o n w i t h E hlr i e h, 5 a s o i t e s e e ll s.E u r o P J C a n e e r 1 7 : 1 67,198 1[7 ] T a k ak u F e t a l: U s e f u l n e吕5 o f t h e S CMt e s t i n t h e d i叱 n o s is o f s a s t r ic e a n e e r·B了 J C a e e r 36 : 8 1 0,19 77一1 1 `〔 s ] B la k e sl e e D e t al : M i t o g e n一In d u e e d e h a n g己in th e f lu o r e s e ne e e OP la ri z a t ino o f f ul o·r e s e e n 至n n o仙a l h u m a n yl m P ho e y te s: am em b r幼e e v e n t? JN C I 6 3: 3 2 5,1 97 9[ 9〕 B al d i n g P e t a l : R e s Po n s e o f h u m a n ly m,Ph o e y t e s t o P H A a n d t u m o u r一 a s s o e i a t e da n t i g e n s a s d e t e e t e d b y f l u o r e s e e n e P e o l a ri z a t i o n.B r J C a n e e r 4 1 : 73,1 98 0〔1 0〕 P ir e e il a r e l j a v a n d S u t h e ir a n d W H :yL mPh o e y t e r e SP o n s e t o a n t i g e s t im u l a t i o na s m e a s u r e d b y f l u or e s e e n e e P o l a r j z二t i o n(S C M te s t ).B r J C a n e e r 38 : 3 3 9,1 9 7 8〔11」H a s h i刃Q Oor Y e t a l: D i f f e r e n t i a t i o n b e t-w e e n P a t i e n t s w i t h m a li g n a n t d i s e a s e sa n d n o n一m碰 gn a n t d i s e a s e s o r h e a l th yd o n o sr byc h a n g e s o f f lu o r e s e e n o e P o l a r主-z a r i o n i n t h e e y t o P l a s m o f e i r e u l a t i n gly m Ph o e y t es.G a n n 6 9: 1 4 5.1 9 78〔12〕 董志伟等:健康人,非癌患者及癌患者外周血淋巴细胞荧光偏振度的测定。生物化学与生物物理学进展 :3 34, 1 98 3〔13〕 张人德:胞浆基质结构性 (S CM ).生物化学与生物物理学进展.5 : 1, 1 98 3〔 1 4」 C e r e e k L a n d C er e e k B : C h a n g e s i n t h eS C M r e SP o n s e ar t io n ( R R s e 州) a f t e r s u r·g i e a l r e mo va lo f m a l i g n a n t t i s u e.B r JC a n e e r 3 1 : 2 50,19 75A P l i e a it o h o f S CM 介s t in t h e D ia gno s i s o f N P CL i u Qi n g l u n W a n Y ue n L i D u a n P a n W e i x i o n gO U D a w e i J i a n Z h i h a n(C a ne e r R e e e a r e h i n s t i t u t e,Z h o n g s h a n M e d i e a l e o l l e g e )A b s tr a C ts t r u e t u r e d n e s s o f e y t o p l a s m i e 尔 a t r i x (S CM ) t es t w a s u s e d t o s t u d y th e : 。 s p o n s o o fh u m 成n l y m Ph o c y 忱5 t o P H A a n d t o t u m o u r e e l l s.L y m Ph cQ y t e s f r o m h e a l t h y d o n o r s r e s P o n d e d t o p H A w i t h a d e e r e a s e i n t h e Po l a r i·z i t i o n v a l u e ( P ),a n d g a v e n o r e s P o n s e t o N P C e e l l s,t h e e o r r亡s p o n d i n ge a n e e r i n d i c e s-R R s e M (m e a n 士 s·e ) w e re 1.2 1 士 0.1 7.L y m p h o e y t e s f r o m p a t i e n t s w i t h d i fCr e n t e a n e e ro f t h e h e a d a n d n e c k (e xe e p t fo r N p C ) g a v e n o r e s p o n s e t o e i t h e r p H A 匕r N P Cc e l l s,t h e e o r r e s P o n d i n g e a n e e r i n d i e e s w e r e 1.0 2 士 0.1 2.L y m P h o e y t e s f r o m N P C P a t ie n t sr e s P o n d e d t o N P C e e l l s w i t h a d e e r e a s e i n t h e P o l a r i z a t i o n v a l u e a n d g a v e on r e s P o n s et o P H A,t h e e o r r s P 0 n d i n g e a n e e r i n d i e e s w e r e 0.8 6士 0.1 1.T he R Rs e M o f N p C p a t i e n t s w e r e s i g n i f i e a n t d i f f e r e n t f r o m t h a t o f p a t i e n t s w i t h o u tN P C a n d h e a l t h y d o n o r s.S C M t e s r m a y o f fe r a n e w m e tho d f o r d i a g n o s i s a n d m o n i t o r i n g o f e a ne e r.

胞浆基质结构性试验在鼻咽癌诊断上的应用

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