Nestin-GFP小鼠胚胎干细胞的建系及体外神经分化

Abstract

【目的】 建立Nestin-GFP转基因小鼠的胚胎干细胞(mESC)系，并观察其示踪ES细胞系的神经分化过程【方法】将E3.5的Nestin-GFP小鼠囊胚接种于小鼠胚胎成纤维细胞上(MEF经γ射线照射失去增殖活性)4 ~ 6 d后将自囊胚长出的内细胞团(ICM)继续培养并传代扩增 ，检测所得细胞Oct-4SSEA-1和AKP等胚胎干细胞特异性标志物的表达及在体内外向三胚层分化的能力；之后，诱导细胞向神经元样细胞及神经胶质样细胞分化，利用免疫荧光检测其标志性抗原【结果】 免疫组化可见Nestin-GFP小鼠胚胎干细胞表达未分化细胞特异性标志Oct-4SSEA-1、AKP染色呈强阳性，并具有向体内外三胚层分化潜能；在体外诱导其向神经分化，第6 d可见到明显的绿色荧光，并与免疫组化Nestin表达部位基本吻合第12 d及第16 d分别可见神经元及神经胶质细胞特异性标志物表达，而此时Nestin的表达较前明显下降【结论】 成功建立了Nestin-GFP小鼠胚胎干细胞系，该细胞具有自我更新的特性及多向分化潜能，并可用于在体外更直观的监测神经分化的阶段性变化并由此进行调