重组pDC316-MCMV／hNIS真核表达质粒的构建及在肿瘤细胞的功能

Abstract

【目的】克隆人的钠／碘同向转运体（hNIS）基因可编码序列，并研究其在非甲状腺肿瘤细胞内的功能表达。【方法】利用逆转录和聚合酶链反应（RT-PCR）从毒性弥漫性甲状腺肿（又称Graves病）病人的甲状腺组织中扩增得到NIS的可编码区基因，并克隆到T载体，测序后亚克隆到腺病毒载体穿梭质粒pDC316载体上，获得重组真核表达质粒载体pDC316-MCMV／hNIS。采用脂质体转染的方法，把pDC316-MCMV／hNIS重组质粒（实验组）或pDC316空质粒（对照组）分别导人到胰腺癌细胞株CAPAN-Ⅱ细胞、PANC-1细胞和卵巢癌细胞株SK-OV-3细胞，转染后48h采用RT-PCR方法检测转染细胞内的hNISmRNA水平，转染后第2、3、4天分别检测肿瘤细胞对^125I的吸收功能。【结果】序列分析结果证实克隆片段与文献报道的hNIS基因eDNA序列完全一致。实验组转染后48h，在CAPAN-Ⅱ细胞、PANC-1细胞及SK-OV-3细胞内均能检测到hNISmRNA高水平表达，对照组基本无hNISmRNA表达。转染后第3天细胞吸碘达到高峰，实验组CAPAN-Ⅱ细胞、PANC-1细胞和SK-OV-3细胞对^125I的吸收量分别比对照组高24倍、17倍和13倍。【结论】从Graves病人的甲状腺组织中克隆的hNIS基因转染肿瘤细胞后，能使肿瘤细胞发挥高水平吸碘功能，为进一步运用放射性核素体内靶向治疗非甲状腺肿瘤奠定了基础