α７ｎＡＣｈＲ激动剂对血管紧张素Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞增殖和胶原合成的影响及其分子机制

Abstract

摘 要： 【目的】 探讨α７烟碱乙酰胆碱受体（α７ ｎＡｃｈＲ）激动剂对血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇⅡ）诱导的心肌成纤维细胞增殖和胶原合成的影响及其分子机制。【方法】 培养出生２～３ｄ大鼠心肌成纤维细胞（ＣＦ），取传代２ ～ ４代细胞，分为①空白对照组（ｃｏｎｔｒｏｌ）；②模型组（ＡｎｇⅡ１０－７ ｍｏｌ／Ｌ）；③ＡＣｈ预处理组：ＡＣｈ ＋ ＡｎｇⅡ组（ＡＣｈ １０－４ ｍｏｌ／Ｌ ＋ ＡｎｇⅡ１０－７ ｍｏｌ／Ｌ）；④α７ｎＡＣｈＲ激动剂组：α７ｎＡＣｈＲ激动剂＋ ＡｎｇⅡ组（ＰＮＵ－２８２９８７ ５ × １０－６ ｍｏｌ／Ｌ ＋ ＡｎｇⅡ１０－７ ｍｏｌ／Ｌ）；⑤α７ｎＡＣｈＲ拮抗剂组：ＡＣｈ＋甲基牛扁碱柠檬酸盐（ＭＬＡ）＋ ＡｎｇⅡ组（ＡＣｈ １０－４ ｍｏｌ／Ｌ ＋ ＡｎｇⅡ１０－７ ｍｏｌ／Ｌ ＋ ＭＬＡ １×１０－６ ｍｏｌ／Ｌ）。干预２４ ｈ后，应用ＣＣＫ－８试剂盒检测ＣＦ的增殖能力，ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ检测胶原蛋白Ι、α－ＳＭＡ、α７烟碱乙酰胆碱受体（α７ｎＡＣｈＲ）、核中ｐ６５蛋白表达；Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ ＰＣＲ检测α７ｎＡＣｈＲ 的ｍＲＮＡ表达。【结果】 ＡｎｇⅡ干预２４ｈ，ＣＦ增殖显著提高，胶原蛋白Ι、α－ＳＭＡ、核中ｐ６５蛋白的表达明显升高，α７ｎＡＣｈＲ的ｍＲＮＡ和蛋白水平均表达降低；Ａｃｈ、α７ｎＡＣｈＲ激动剂预处理后抑制ＣＦ增殖，胶原蛋白Ι、α－ＳＭＡ和核中ｐ６５蛋白的表达降低，α７ｎＡＣｈＲ的ｍＲＮＡ和蛋白水平均表达升高；Ａｃｈ＋ＭＬＡ预处理， ＣＦ增殖再次提高，胶原蛋白Ι、纤维化因子α－ＳＭＡ、核中ｐ６５蛋白的表达再次明显升高，α７ｎＡＣｈＲ的ｍＲＮＡ和蛋白水平均表达降低。【结论】 α７ｎＡＣｈＲ激动剂抑制ＡｎｇⅡ诱导的心肌成纤维细胞的增殖和胶原合成，其机制可能与ＮＦ－κＢ信号通路有关