ＨＧＦ与ＣＴＬＡ－４Ｉｇ双基因修饰增强脐带间充质干细胞的免疫抑制和促增殖作用

Abstract

【目的】 探讨人脐带间充质干细胞（ｈＵＣＭＳＣ）经肝细胞生长因子（ＨＧＦ）和细胞毒性Ｔ细胞相关抗原４免疫球蛋白（ＣＴＬＡ４－Ｉｇ）双基因修饰后免疫调节能力的变化及其促进肝细胞增殖作用的影响。【方法】 酶联合消化法提取并鉴定人脐带间充质干细胞；对照组的ｈＵＣＭＳＣ转染携带绿色荧光蛋白（ＥＧＦＰ）基因的Ａｄ５－ＥＧＦＰ，实验组的ｈＵＣＭＳＣ转染携带ＨＧＦ和ＣＴＬＡ－Ｉｇ双基因的腺病毒Ａｄ５－ＨＧＦ／ＣＴＬＡ－４Ｉｇ。流式细胞仪检测对照组ｈＵＣＭＳＣ转染Ａｄ５－ＥＧＦＰ后７２ ｈ表达ＥＧＦＰ细胞比率；实验组Ａｄ５－ＨＧＦ／ＣＴＬＡ－４Ｉｇ转染ｈＵＣＭＳＣ ７２ ｈ后，ＣＣＫ８检测细胞存活率，同时再次检测ｈＵＣＭＳＣ免疫表型和向成骨细胞分化的能力，ＥＬＩＳＡ检测细胞上清中ＨＧＦ含量，Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ检测细胞中ＣＴＬＡ４－Ｉｇ蛋白的表达水平，通过ＣＣＫ８法检测双基因修饰后ｈＵＣＭＳＣ对淋巴细胞增殖的影响及其上清对Ｌ０２细胞增殖的影响。【结果】携带外源基因的腺病毒可有效转染ｈＵＣＭＳＣ，不影响其干细胞特性和多向分化能力，经ＨＧＦ／ＣＴＬＡ－４Ｉｇ基因修饰ｈＵＣＭＳＣ可分泌高浓度ＨＧＦ并高表达ＣＴＬＡ－４Ｉｇ，同时能有效地抑制淋巴细胞增殖，其上清能明显促进肝细胞增殖。【结论】 ｈＵＣＭＳＣ经ＨＧＦ／ＣＴＬＡ－４Ｉｇ基因修饰后生物学特性无明显改变，并能高表达ＨＧＦ和ＣＴＬＡ－４Ｉｇ，其免疫调节及促进肝细胞增殖的能力进一步加强，为肝移植术后存在的肝细胞损伤的保护治疗提供了新思路