Benhammouda, Sara

Campeau, Philippe

Gatti, Priya

Germain, Marc

Rousseau, Justine

Dépôt numérique de UQTR

N2A WT N2A TBC1D24-KOSara Benhammouda1,3,4, Priya Gatti1,3,4, Justine Rousseau2,3, Philippe Campeau2,3, Marc Germain1,3,41 Département de biologie médicale et groupe de recherche en signalisation cellulaire, UQTR;2 Centre de recherche de l'Hôpital Ste-Justine, Université de Montréal; 3 Centre d'excellence en recherche sur les maladies orphelines-Fondation Courtois (CERMO FC);4 Réseau intersectoriel de recherche en santé de l'Université du Québec.IntroductionNormale FragmentéTOM20 DAPIFigure 1 : Effet des mutations TBC1D24 sur la longueur des mitochondries. A) Images confocales représentatives dela structure mitochondriale dans les cellules primaires. B) Quantification de la longueur mitochondriale par Momito.A)Les mutations dans la protéine TBC1D24 induisent des altérations structurelles mitochondrialesB)FragmentéeNormaleFigure 2 : Effet du KO et siRNA-TBC1D24 sur la longueur des mitochondries. A) Cellules neuronales WT etTBC1D24-KO colorées avec TOM20 (vert) et un marqueur du noyau : DAPI (bleu). B) Graphique rapportant laquantification du % de cellules avec des mitochondries normales et fragmentées. C) Fibroblastes des souris (MEFS)contrôle et Sirna-TBC1D24 colorées avec TOM20 (rouge). D) Quantification de la longueur mitochondriale dans lesMEFS à l'aide de Momito.Les mutations dans la protéine TBC1D24 induisent des altérations structurelles du réseau tubulaire du réticulum endoplasmique (RE)A)Figure 3 : L'effet des mutations TBC1D24 sur la structure du réseau tubulaire du RE. A) Phénotypes observés dans lesfibroblastes primaires témoins et mutantes colorées avec RTN4 (RE-rouge), HSP70 (Mitochondries-vert) et DAPI(noyau-bleu). B) Graphique rapportant la quantification du % du nombre de cellules avec un réseau tubulaire altéré.B)Conclusion et PerspectivesRésultatsSara.Benhammouda@uqtr.caTBC1D24 favorise-t-elle la fonction mitochondriale ?MéthodologieLes mutations dans la protéine TBC1D24 induisent des altérations fonctionnelles mitochondrialesTOM20 DAPIFragmentéeNormaleTBC1D24-KO et siRNA-TBC1D24 induit des changement structurels mitochondrialesA)B)Figure 1 : Effet des mutations TBC1D24 sur la fonction des mitochondries. A) Graphique rapportant la quantificationdu niveau d’ATP dans les cellules primaires . B) Quantification de l'intensité de fluorescence du TMRM avant et aprèsle traitement avec CCCP dans les cellules primaires.RéférencesNormale TorsadéRTN4 HSP70 DAPISirnaTBC1D24NGTOM20C)D)B)A)❖ Déterminer les voies dans les quelle la protéine TBC1D24 est impliquée.❖ Déterminez l'effet de chaque mutation en fonction uniquement de sa nature et de sa localisation sur la protéine TBC1D24.Augmentation de l'interaction TOM20-Calnexine dans les mutants TBC1D24A)B)D)C)Figure 5:Interaction TOM20-Calnexine observée par PLA. A)- C) PLA pour l'interaction TOM20-Calnexine dans les cellulesprimaire (A) et dans les lignées neuronales (C). B) Quantification des spots PLA dans les cellules primaire (B) et dans les lignéesneuronales (D).1. Danarti, R., Rahmayani, S., Wirohadidjojo, Y. W. & Chen, W. Deafness, onychodystrophy, osteodystrophy, mental retardation, and seizures (DOORS) syndrome: a new case report from Indonesia and review of the literature. European Journal of Dermatology 30,404-407 (2020).2. Finelli, M. J. et al. The epilepsy-associated protein TBC1D24 is required for normal development, survival and vesicle trafficking in mammalian neurons. Human molecular genetics 28, 584-597 (2019).3. Nguyen, N. T. K., Ohbayashi, N., Kanaho, Y. & Funakoshi, Y. TBC1D24 regulates recycling of clathrin-independent cargo proteinsmediated by tubular recycling endosomes. Biochemical and biophysical research communications 528, 220-226 (2020).PLA    DAPIMutantWT

Effet de mutations dans la protéine TBC1D24 associée au syndrome DOORS sur la dynamique mitochondriale

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