.

Abstract

Abstract:  Excess dietary n6 polyunsaturated fatty acids (PUFA) affects various reproductive parameters. Objective: to evaluate the effect of diets exceeded in linoleic acid (LA)-n6 on placental vascularization, vitality and fetal growth. Albino swiss mice were fed from gestation day 0.5 (GD 0.5) with diets: control (C, commercial diet, LA=1.6%, n=25) or C with 10% of soybean or sunflower oils (SOD, LA=6.68%, n=24 and SFOD, LA=7.68%, n=26). At GD 16.5, mothers were sacrificed, and the following parameters were assessed: placental and fetal weights, fetal vitality. Placental areas and placental necrosis areas were measured in histological sections with H/E. Immunohistochemistry for nitric oxide synthase III (eNOS) in placental labyrinth was performed. For vascular endothelial delineation and natural killers (NK) cell labelling, histochemical analysis was performed with lectins: BSA-I and DBA, respectively. The labelled area and staining intensity were quantified through reciprocal intensity and number of NK cells, using FIJI software. Statistics: ANOVA, Kruskall-Wallis and Chi-square, p≤0.05. SFOD placentas were significantly lighter than SOD and C (SFOD=0.13±0.02 vs SOD=0.14±0.02 and C=0.15±0.02, p≤0.005). Significantly lower fetal weights in treated females (SOD=0.59±0.01, n=84 and SFOD=0.68±0.01, n=115 vs C=0.72±0.02, n=52; p≤0.005). Lower foetal vitality in treated females: SFOD= 69.59% and SOD=73.95% vs C=92.86%; p≤0.05. No significant differences in placental areas. Greater area of necrosis in decidua of SFOD placentas (SFOD=122.05µm2±32.38 vs SOD=52.39µm2±28.59 and C=35.78µm2±11.91; p≤0.05). No significant differences in eNOS-labelled area. However, staining intensity was lower in SFOD (SFOD=78.44±3.80 vs SOD=110.61±9.07 and C=100.21±4.76; p≤0.05). The labelled area with BSA-I was significantly greater in the treated females (SFOD=87.37µm2±0.88 and SOD=88.47µm2±2.07 vs C=80.01µm2±2.47; p≤0.05); however, the staining intensity was higher in the control group (C=98.33±2.4 vs SFOD=67.43±3.6 and SOD=73.83±7.69; p≤0.05). No significant differences in NK quantification. The lower staining intensity of eNOS and BSA-I staining demonstrates alterations in vascularization in group SFOD, which contains more n6. These changes would reduce nutrients supply to the foetus, affecting its growth and vitality. Further determinations will be made in order to study NK cells involved in placental angiogenesis and trophoblast development.Resumen:  El exceso de n6 dietario afecta diversos parámetros reproductivos. Nos propusimos evaluar el efecto de dietas excedidas en ácido linoleico (AL)-n6 sobre la vascularización placentaria, la vitalidad y el crecimiento fetal. Ratones Albino swiss se alimentaron desde el día de gestación (DG 0,5) 0,5 con dietas: control (C, dieta comercial, AL=1,6%, n=25) o C con 10% de aceites de soja o girasol (S, AL=6,68%, n=24 y G, AL=7,68%, n=26). Al DG 16,5 se evaluó: pesos placentario y fetal, vitalidad fetal. Se midieron áreas placentarias y áreas de necrosis en cortes histológicos de placentas con H/E. Se realizó inmunohistoquímica para sintasa de óxido nítrico III (eNOS) en laberinto placentario. Para la delimitación del endotelio vascular y la marcación de células natural killers (NK) se realizó análisis histoquímico con lectinas:BSA-I y DBA, respectivamente. Se cuantificaron área marcada e intensidad de tinción a través de intensidad recíproca y número de NK, con programa FIJI. Estadística: ANOVA, Kruskall-Wallis, Chi-cuadrado, p≤0,05. Las placentas G fueron significativamente más livianas que S y C (G=0,13±0,02 vs S=0,14±0,02 y C=0,15±0,02; p≤0,005). Pesos fetales significativamente menores en hembras tratadas (S=0,59±0,01; n=84; G=0,68±0,01;n=115 y C=0,72±0,02;n=52; p≤0,005). Vitalidad fetal menor en hembras tratadas: G= 69,59% y S=73,95% vs C=92,86%; p≤0,05. Sin diferencias en las áreas placentarias. Mayor área de necrosis en deciduas de hembras G (G=122,05µm2±32,38 vs S=52,39µm2±28,59 y C=35,78µm2±11,91; p≤0,05). Sin diferencias significativas en el área marcada con eNOS. Sin embargo, la intensidad de tinción fue menor en G (G=78,44±3,80 vs S=110,61±9,07 y C=100,21±4,76; p≤0,05). El área marcada con BSA-I fue significativamente mayor en las hembras tratadas (G=87,37µm2±0,88 y S=88,47µm2±2,07 vs C=80,01µm2±2,47; p≤0,05); sin embargo, la intensidad de tinción fue mayor en el grupo control (C=98,33±2,4 vs G=67,43±3,6 y S=73,83±7,69; p≤0,05). Sin diferencias significativas en la cuantificación de NK. La menor intensidad de tinción con eNOS y BSA-I demuestran alteraciones en la vascularización en el grupo G, que contiene mayor cantidad de n6. Estos cambios reducirían el aporte de nutrientes al feto, afectando su crecimiento y vitalidad.  Se realizarán más determinaciones a fin de estudiar con profundidad las NK, células implicadas en la angiogénesis placentaria y el desarrollo trofoblástico.