The multiplex PCR assay has been used to diagnose different diseases in livestock in Vietnam; however, this method has not been well-applied to sheep diseases. This study developed a multiplex PCR assay to detect the two main agents, Pasteurella multocida and Mannheimia haemolytica, causing Pasteurellosis in sheep. By using two pairs of specific primers, with the optimum concentration of each primer being 5 pM, this method successfully amplified the kmt1 gene from P. multocida and the gcp gene from M. haemolytica in the same reaction containing DNA of P. multocida and M. haemolytica at the lowest concentration of 0.1 ng each. Moreover, this multiplex PCR reaction is not affected by the artificial presence of some other bacterial DNA. In particular, this multiplex PCR showed 100% confidence in a stability test on a small scale with 20 raw DNA samples obtained from direct heat treatment or enrichment before heat treatment of 10 field samples. This is the first study in Vietnam on diagnosing P. multocida and M. haemolytica by multiplex PCR. This method is valuable for detecting P. multocida and M. haemolytica in sheep and serves as a reference for detecting these bacteria in other household animal.Ở Việt Nam, kỹ thuật multiplex PCR đã được sử dụng để chẩn đoán nhiều bệnh trên vật nuôi nhưng kỹ thuật này hiện nay chưa được áp dụng để chẩn đoán bệnh trên cừu. Trong nghiên cứu này, chúng tôi đã phát triển một kỹ thuật multiplex PCR để phát hiện đồng thời hai tác nhân chính gây tụ huyết trùng trên cừu Phan Rang là Pasteurella multocida và Mannheimia haemolytica. Bằng cách sử dụng hai cặp mồi đặc hiệu, với nồng độ tối ưu của mỗi mồi là 5 pM, phương pháp này đã nhân thành công đoạn gen kmt1 từ P. multocida và gcp từ M. haemolytica trong cùng một phản ứng chứa hỗn hợp DNA tổng số của hai vi khuẩn này ở nồng độ thấp nhất là 0,1 ng mỗi loại. Thêm vào đó, phản ứng multiplex PCR này không bị ảnh hưởng bởi sự có mặt nhân tạo của một số DNA từ vi khuẩn khác. Đặc biệt, phương pháp multiplex PCR này có độ ổn định đạt 100% khi thử nghiệm trên quy mô nhỏ với 20 mẫu DNA thô thu được từ phương pháp xử lý nhiệt trực tiếp hay xử lý nhiệt sau khi làm giàu 10 mẫu thực địa. Đây là nghiên cứu đầu tiên ở Việt Nam về việc chẩn đoán tụ huyết trùng trên cừu bằng kỹ thuật multiplex PCR, kỹ thuật không chỉ có giá trị để phát hiện vi khuẩn P. multocida và M. haemolytica ở cừu mà còn có vai trò tham khảo để chẩn đoán những vi khuẩn này trong các đối tượng vật nuôi khác
