Maestría en Ciencias con Énfasis en Genética Humana
Doi
Abstract
La insuficiencia ovárica primaria (IOP) es una enfermedad frecuente que se caracteriza por amenorrea antes de los 40 años y niveles elevados de gonadotropinas. En un estudio previo, efectuado mediante secuenciación de siguiente generación (NGS) en 70 genes candidatos, se identificó la mutación c.2960C>T (p.Ser987Phe) en el gen BMPR2. La mutación estaba localizada en el dominio C-terminal, lo que podría modificar su plegamiento y su interacción con otras proteínas. Por lo tanto, se evaluó el potencial efecto patogénico de la mutación BMPR2-p.Ser987Phe a nivel de la localización subcelular. Las formas silvestre y mutante de BMPR2, clonadas en fase con GFP en un plásmido de expresión, fueron transfectadas en las células CHO. Las células fueron tratadas con un marcador de localización del retículo endoplásmico (RE) y visualizadas en un microscopio de fluorescencia para su caracterización y conteo. El conteo celular permitió observar en las células transfectadas con la versión mutante, un aumento estadísticamente significativo de agregados localizados en el RE. La falta de biodisponibilidad potencial de BMPR2 en la membrana celular, debido a la retención proteica producida por la mutación p.Ser987Phe, podría perturbar las vías de señalización intracelular. Por lo tanto, se propuso una relación funcional entre la mutación c.2960C>T y la etiología de la IOP. Además, se realizó un tamizaje de las potenciales proteínas de interacción con BMPR2, mediante el ensayo de doble híbrido en levaduras (Y2H), utilizando una librería de ovario de ratón. Se identificaron cuatro proteínas con una muy alta probabilidad de interacción: Limk1, Ctnnd1, Fasn y Fn1
