L'angiopoïétine-2 se lie à de multiples sites interactifs au sein du facteur von Willebrand

Abstract

International audienceIntroduction: La biosynthèse du facteur von Willebrand (VWF) dans les cellules endothéliales entraîne la formation d'organites de stockage connus sous le nom de corps de Weibel-Palade (WPB). Les WPB contiennent également plusieurs autres protéines, dont l'angiopoïétine-2 (Ang-2).À l'heure actuelle, la base moléculaire de l'interaction VWF-Ang-2 est mal comprise. Matériels et méthodes: Ici, nous avons utilisé des tests de liaison par immunoadsorption et des fragments de VWF recombinants spécifiques pour analyser les interactions VWF-Ang-2.Résultats: Nous avons constaté que le VWF se liait le plus efficacement à l'Ang-2 immobilisé (liaison semi-maximale à 0,5 ± 0,1 μg/mL) dans des conditions de CaCl2 élevé (10 mM) et de pH légèrement acide (6,4-7,0). Il est intéressant de noter que plusieurs domaines VWF recombinants isolés (A1/Fc, A2/Fc, D4/Fc et D'D3-HPC4) ont montré une liaison dose-dépendante à l'Ang-2 immobilisé. La liaison semble spécifique, car les anticorps contre D'D3, A1 et A2 réduisent significativement la liaison de ces domaines à l'Ang-2. Les complexes entre le FVW et l'Ang-2 dans le plasma ont pu être détectés par des tests d'immunoprécipitation et d'immunoadsorption. De manière inattendue, des expériences de contrôle ont également révélé des complexes entre le VWF et l'angiopoïétine-1 (Ang-1), une protéine structurellement homologue à l'Ang-2. En outre, des études de liaison directe ont montré une liaison dose-dépendante du FVW à l'Ang-1 immobilisé (liaison semi-maximale à 1,8 ± 1,0 μg/mL). Il est intéressant de noter qu'au lieu d'entrer en compétition avec l'Ang-1, l'Ang-2 a multiplié par 3 environ la liaison du FVW à l'Ang-1. Les expériences de compétition ont en outre révélé que la liaison au VWF n'empêche pas l'Ang-1 et l'Ang-2 de se lier à Tie-2.Conclusion: Nos données montrent que l'Ang-1 et l'Ang-2 se lient tous deux au VWF, apparemment en utilisant des sites interactifs différents. L'Ang-2 module la liaison du VWF à l'Ang-1, dont les conséquences (patho)-physiologiques restent à étudier