El objetivo del presente proyecto es estudiar los marcadores moleculares como factores pronósticos de riesgo en pacientes pediátricos con diagnóstico de leucemia.CONACYT – Consejo Nacional de Ciencia y TecnologíaPROCIENCI

Ayala Lugo, Ana Ilda

Figueredo, Diego Daniel

Franco, Lady Gabriela

Jolly, Valerie

Samudio, Angélica

Samudio, Margarita

Zelada, Ofelia

Spanish

Repositorio Institucional CONACYT

Panel	de	anticuerpos	utilizadosLLA	tipo	B Anti-CD10,		anti-CD19,	anti-CD20,	anti-CD22,	anti-CD79A,	anti	IgM,	anti	kappa,	anti	LambdaLLA	tipo	T Anti-CD7,		anti-CD2,	anti-CD8,	anti-CD3,	anti-CD5,	anti-CD1aLMA Anti-CD13,		anti-CD33,	anti-CD14,	anti-CD15,	anti-CD65,	anti-CD7.1,		anti-CD61,	anti-mieloperoxidasaOtros Anti-HLA-DR,		anti-TdT,	anti-CD38,	anti-CD34,	anti-CD45,	anti-CD56,	anti-KorsaPACIENTES Y MÉTODOSFueron incluidos pacientes pediátricos con diagnóstico de leucemia que acudieronal Departamento de Hemato-Oncología Pediátrica FCM – UNA entre marzo del2016 julio del 2018. Para el diagnóstico de leucemias se estudio la citomorfologíay el inmunofenotipo utilizando paneles de linaje y anticuerpos específicos de líneamediante citometría de flujo (tabla 1). Para la detección de los marcadoresmoleculares de riesgo en las leucemias linfoblásticas agudas tipo B (LLA B) seestudió la presencia de los rearreglos génicos ETV6-RUNX1, BCR-ABL p190,MLL-AF4 Y E2A-PBX, que corresponden a las translocaciones t(12;21), t(9;22),t(4,11) y t(1;19) respectivamente. Para la detección de marcadores moleculares enlas leucemias de origen mieloide (LMA) se estudió la presencia de los rearreglos:PML-RARA, AML1-ETO, BCR-ABL p210 y CBFB/MYH11, que corresponden a lastranslocaciones t(15;17), t(12;21), t(9;22) e inv (16).RESULTADOS (cont)Ayala-Lugo A2-3, Zelada O1-2, Figueredo D1-2, Jolly V3, Franco L3; Samudio MA1, Samudio A1-21. Fundación Red Nacional de Lucha Contral el Cancer Infantil. RENACI.2. Laboratorio de Citometría de Flujo y Biologia Molecular (HOPE). Hospital de Clínicas. Facultad de Ciencias Médicas. Universidad Nacional de Asunción (FCM – UNA).3. Laboratorio de Genética Molecular. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud, Universidad Nacional de Asunción. San Lorenzo, Paraguay. Montevideo Uruguay.ESTUDIO DE MARCADORES MOLECULARES COMO FACTORES PRONÓSTICOS EN LEUCEMIAS INFANTILES“Este proyecto es financiado por el CONACYT a través del Programa PROCIENCIA con recursos del Fondo para la Excelencia e investigación – FEEI del FONACIDE”PROGRAMA PROCIENCIA – CONVOCATORIA 2013 – PROYECTO 14-INV-327INTRODUCCIÓNLa leucemia es el cáncer más común en pediatría. A nivel mundial representaaproximadamente el 35% de todos los tipos de cáncer en menores de 15 años. Seoriginan debido a mutaciones en las células progenitoras que, según la líneacelular afectada, puede ser de origen mieloide o linfoide. En pediatría lasleucemias linfoblásticas agudas (LLA) constituyen el 75 a 80% de los casos.Actualmente el tratamiento de las leucemias pediátricas está fundamentado en laestratificación de los pacientes en grupos de riesgo de acuerdo a parámetrosclínicos y biológicos presentes al momento del diagnóstico y a la respuesta altratamiento. Entre los parámetros biológicos de mayor importancia se encuentra lapresencia de anomalías genéticas que se utilizan como marcadores moleculares,constituyéndose estas como uno de los factores pronósticos mas consistentes ydecisivos para el tratamiento del paciente.OBJETIVOEl objetivo del presente proyecto es estudiar los marcadores moleculares comofactores pronósticos de riesgo en pacientes pediátricos con diagnóstico deleucemia.Tabla 1. Panel de anticuerpos utilizadosFueron incluidos 100 pacientes pediátricos con diagnóstico de leucemia. Laprocedencia y las características sociodemográficas de los pacientes presentanen la fig. 1 y tabla 1.El 85% de los pacientes presentaron diagnóstico de LLA B, 14% de LMA y 1% deLMC. En la fig. 2 se observa los diferentes tipos de leucemias presentes en lospacientes determinados por inmunofenotipo mediante citometría de flujo.RESULTADOS En relación al estudio de los marcadores moleculares el 38% de la poblaciónestudiada era portador de algún marcador molecular. En el caso de las LLA B el36.5% (31/85), en las LMAs el 47% (7/15) y en el caso de la LMC (1/1). En la figura3 se observan diferentes frecuencias y distribuciones de los marcadoresmoleculares.La técnica utilizada fue RT-PCR(Reverse Transcription PolymeraseChain Reaction) a partir de ARNextraído de células de médula ósea(en EDTA), con posterior reveladoen geles de agarosa al 2% y tincióncon sybrgreen . Se utilizó como gencontrol de calidad de la muestra elestudio del gen ABL.Las características clínicas al momento del diagnóstico en relación a la presenciade los diferentes marcadores moleculares se observa en la tabla 3.Fig 2. Tipos de leucemia en la población estudiada. Fig 3. Distribución y frecuencias de los marcadores moleculares encontrados de acuerdo al tipo de leucemia. DISCUSIÓNLos avances en las técnicas de diagnóstico, y en particular en la biologíamolecular, han permitido identificar mutaciones en las células leucémicaspresentes al momento del diagnóstico. Estas mutaciones se han asociado alpronóstico del paciente y, consecuentemente, han permitido su estratificación engrupos de riesgo para su tratamiento. Los resultados del presente proyectoidentificaron la presencia de 9 marcadores moleculares en los diferentes tipos deleucemias. Siendo marcadores de buen pronóstico ETV6-RUNX1 y PML-RARA yde alto riesgo (mal pronóstico): BCR-ABL, MLL-AF4, RUNX1-RUNX1T1 y E2A-PBX. Cabe mencionar que el estudio por técnicas de biologia molecular es de vitalimportancia debido a la existencia de mutaciones crípticas, como el caso de lat(12;21) que no pueden ser visualizadas por técnicas de citogenética.CONCLUSIÓNEl presente trabajo pretende estudiar marcadores moleculares de riesgo enaproximadamente 100 casos de leucemia infantil de novo en pacientes que acudanal HOPe para su diagnóstico y tratamiento. Esperamos que su desarrollocontribuya a la implementación de protocolos clínicos de tratamiento donde ladeterminación de las alteraciones genéticas al momento del diagnóstico, facilite laestratificación de los pacientes en grupos de riesgo y, consecuentemente, eltratamiento del paciente. Esperamos también que contribuya para delinear lasbases para protocolos nacionales de tratamiento de la leucemia infantil,considerando que es el primero que incluye estos marcadores.

Estudio de marcadores moleculares como factores pronósticos en leucemias infantiles

http://repositorio.conacyt.gov.py/bitstream/20.500.14066/2552/1/14-INV-173.pdf

Estudio de marcadores moleculares como factores pronósticos en leucemias infantiles

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