The rare base 4-thiouridine (s4U), present in various transfer RNA (tRNA) molecules from Escherichia coli, occupies usually the strategically important 8 th position between the double helices of the acceptor and the dihydrouridine stems of the cloverleaf. This unusual base is largely used as an intrinsic build-in probe for RNA conformational and RNA(DNA)–protein interaction studies through triplet excited state photochemistry related to covalent adducts formation. Here, by applying laser transient absorption saturation spectroscopy, we measured the intersystem crossing yield ϕST and the excited triplet state absorption εT−T of s4U within tRNA. While the incorporation of s4U in tRNA induced appreciable changes in the latter, no important variation of the intersystem crossing yield was observed, which is in contrasts with the published data.Rijetka baza 4-thiouridine (s4U), koju nalazimo u raznim prijenosnim molekulama RNA (tRNA) Escherichie coli, obično uzima strateški važan 8. položaj između dviju zavojnica primatelja i dihidrouridinskih stapki lista djeteline. Ta se neobična baza najviše rabi kao unutarnja ugradbena proba za proučavanje interakcija konformalne RNA s RNA(DNA)–proteinima preko fotokemije tripletnog uzbuđenog stanja, povezanog sa stvaranjem kovalentnih adukata. U ovom smo radu primjenom laserske prijelazne apsorpcijske spektroskopije sa zasićenjem mjerili prinos međusustavnih prijelaza ϕST i apsorpciju tripletnog stanja εT−T s 4U u tRNA. Dok ugrađivanje s4U u tRNA uzrokuje prilične promjene u tRNA, nismo opazili promjene prinosa međusustavnih prijelaza, što nije u skladu s objavljenim rezultatima