Se realizó el trabajo de investigación con el objetivo de identificar los hongos presentes en las muestras de yerba mate compuesta de distintas marcas comerciales.CONACYT – Consejo Nacional de Ciencia y TecnologíaPROCIENCI

Arriola Almada

Arriola Almada, Herminia Manuela

Chávez, Diana

Quintana, Lidia Augusta

Spanish

Repositorio Institucional CONACYT

Revista sobre estudios e investigaciones del saber académico, 14 (14), enero /diciembre de 2020 ISSN: 2078-5577   e-ISSN: 2078-7928   3     Herminia Manuela Arriola Almada1    https://orcid.org/0000-0003-3566-6593 1Universidad Nacional de Itapúa. Dirección de Investigación y Ambiente. Facultad de Ciencias Agropecuarias y Forestales, Encarnación, Paraguay, arriola.manuela@gmail.com Diana Patricia Chavez Pereira2  https://orcid.org/0000-0003-3662-837X 2Universidad Nacional de Itapúa Facultad de Ciencias Agropecuarias y Forestales, Encarnación, Paraguay, dchavez@facaf.uni.edu.py Lidia Quintana3   https://orcid.org/0000-0002-8889-0970 3Universidad Nacional de Itapúa Facultad de Ciencias Agropecuarias y Forestales, Encarnación, Paraguay, lviedmaq@gmail.com  Resumen   El consumo de la yerba mate en el Paraguay es tradicional y su demanda cada vez es mayor considerando que es un producto básico que forma parte del consumo alimenticio de las familias paraguayas. La yerba mate es un producto muy expuesto al ataque de microorganismos contaminantes, principalmente por los hongos que se encuentran en el producto elaborado, alterando su contenido. Teniendo en cuenta esta problemática se realizó el trabajo de investigación con el objetivo de identificar los hongos presentes en las muestras de yerba mate compuesta de distintas marcas comerciales. La investigación se llevó acabo en el Laboratorio de Fitopatología de la Facultad de Ciencias Agropecuarias y Forestales de la Universidad Nacional de Itapúa, sede General Artigas. Se utilizó el diseño completamente al azar con 15 tratamientos que consistieron en muestras de yerba mate compuesta de distintas marcas provenientes del Departamento de Itapúa. El recuento de hongos se realizó empleando el método de diseminación en superficie en agar–cloranfenicol de acuerdo con la metodología propuesta en la Norma IRAM 20517: 2004 y 2007. Se identificaron géneros de hongos asociados a la yerba mate compuesta mediante la observación directa en microscopio de las estructuras fúngicas. Los resultados indican mayor incidencia de los géneros de Aspergillus, Penicillium y Fusarium en la yerba mate tipo compuesta, registrándose valores dentro de los criterios establecidos en la Norma Paraguaya para yerba mate compuesta NP 3500201 (5000 UFC/g).    Palabras clave: Illex paraguariensis, inocuidad alimentaria, cuantificación de microorganismos contaminantes Abstract  Human consumption of yerba mate in Paraguay is traditional and its demand is increasing, considering that it is a basic product of the food consumption of Paraguayan families. Yerba mate is a product highly exposed to the attack of contaminating microorganisms, mainly by the fungi found in the elaborated product, altering its content. Considering this problem, the research work was carried out with the aim of identifying the fungi present in the yerba mate samples composed of different commercial brands. The research was carried out in the Plant Pathology Laboratory of the Faculty of Agricultural and Forestry Sciences at the National University of Itapúa. A completely randomized design was used with 15 treatments that consisted of yerba mate samples of different brands. The fungus count was carried out using the surface dissemination method in chloramphenicol agar according to the methodology proposed in IRAM Standard 20517: 2004 and 2007. As a result, three genera associated with the yerba mate compound were identified: Aspergillus, Penicillium and Fusarium, all of them with incidence within the criteria established in the Paraguayan Standard for compound yerba mate NP 3500201 (5,000 CFU / g).  Keywords: Illex paraguariensis, Food safety, quantification of contaminating microorganisms.         Área del conocimiento: Ciencias Agrarias  Correo de Correspondencia: arriola.manuela@gmail.com Conflictos de Interés: Los autores declaran no tener conflictos de intereses          Este es un artículo publicado en acceso abierto bajo una licencia Creative Commons CC-BY   Fecha de recepción:   08/10/2019   Fecha de Aprobación:04/09/2020      Página Web: http://publicaciones.uni.edu.py/index.php/rseisa  Citación recomendada: Arriola Almada, H. M., Chavez Pereira D. P., Quintana, L., (2020). Incidencia de hongos en muestras de yerba mate compuesta en el departamento de Itapúa. Revista sobre estudios e investigaciones del saber académico (Encarnación), 14(14): 03-06  Incidencia de hongos en muestras de yerba mate compuesta en el departamento de Itapúa Incidence of fungi in samples yerba mate in the department of Itapúa Artículo de investigación Revista sobre estudios e investigaciones del saber académico  Arriola Almada, H. M., Chavez Pereira D. P., Quintana, L. Incidencia de hongos en muestras de yerba mate compuesta en el departamento de Itapúa.  4   Revista sobre estudios e investigaciones del saber académico, 14 (14), enero /diciembre de 2020 ISSN: 2078-5577   e-ISSN: 2078-7928  Introducción  La yerba mate (Illex paraguariensis Saint Hilaire) forma parte del consumo básico alimenticio de las familias paraguayas y su producción ha demandado importancia agrícola, económica y social por formar parte de la cultura nacional. Se puede afirmar asimismo que es un cultivo estratégico para el sector productivo, industrial y comercial teniendo en cuenta que forma parte de la cadena de valor de la yerba mate.  Las principales zonas agroecológicas están localizadas en los departamentos de Itapúa, Alto Paraná, Guairá, Caazapá, San Pedro y Canindeyú, donde se concentra la mano de obra productiva nacional (Masloff, 2013)   La yerba mate posee propiedades nutricionales para el organismo del ser humano incrementando de esta manera el equilibrio y balance de sus elementos. Entre sus propiedades se destaca el efecto que produce sobre el nivel de pH en el organismo del ser humano, creando una zona alcalina, estimulando el sistema nervioso y contribuyendo con nutrientes que ayudan a la claridad mental que es la principal propiedad de la cafeína (USAID, 2006). Desde el punto de vista sanitario, la yerba es un producto muy expuesto al ataque de microorganismos contaminantes, principalmente por los hongos que se encuentran en el ambiente durante el procesamiento y almacenamiento del producto elaborado alterando su contenido, ya sea de la yerba mate compuesta o la tradicional.   Algunos de los hongos filamentosos encontrados en muestras de yerba son los géneros Aspergillus, Penicillium y Fusarium, constituyéndose algunas especies en productores potenciales de micotoxinas que al ser ingeridas como alimento de animales y humanos causan alteraciones biológicas perjudiciales para la salud (Castrillo et al., 2013).   Jerke et al. (2009) determinaron altos niveles de incidencia de géneros de hongos micotoxigénicos como Aspergillus (83%), Penicillium (26%) Fusarium (15%) en muestras de yerba mate en la Provincia de Misiones, Argentina. Estudios realizados en nuestro país por Pérez et al. (2013) sobre perfil micológico de la yerba mate mostraron que no todas las muestras analizadas cumplen con los criterios establecidos en la Norma Paraguaya para yerba mate compuesta NP 3500201 (5000 UFC/g).  Ante esta problemática, el objetivo del presente trabajo fue identificar y cuantificar los principales géneros de hongos presentes en muestras de yerba mate compuesta de las distintas marcas comerciales provenientes del Departamento de Itapúa, teniendo en cuenta que es una zona considerada de alta humedad en el ambiente.  Materiales y Métodos  La investigación se realizó en el Laboratorio de Fitopatología de la Facultad de Ciencias Agropecuarias y Forestales de la Universidad Nacional de Itapúa sede General Artigas, Itapúa, ubicado en el casco urbano de la ciudad (26°56´03,09´´S 56°1340,01). El periodo de ejecución del trabajo de investigación, desde la recolección de muestras hasta el análisis de los resultados, abarcó desde marzo del 2018 hasta octubre del 2019.   Se utilizó el diseño completamente al azar con 15 tratamientos, que consistieron en muestras de yerba mate compuesta de distintas marcas provenientes de los centros de distribución del Departamento de Itapúa. Para el estudio se utilizaron las muestras comercializadas en envases de plástico sellados. Inmediatamente después de su recolección las muestras fueron analizadas.  El recuento se realizó empleando el método de diseminación en superficie en agar–cloranfenicol de acuerdo con la metodología propuesta en la Norma IRAM 20517: 2004 y 2007. El procedimiento consistió en el pesaje de 10 g de las muestras y luego la dilución en 90 ml de solución fisiológica peptonada, obteniendo así la dilución 1/10 y a partir de la cual se obtuvieron las sucesivas diluciones decimales. Luego se inocularon cada una de las diluciones en placas de Petri contenidas con medio de cultivo y se procedió a la diseminación del inóculo con una espátula. Todas las placas fueron incubadas en estufa de cultivo a una temperatura de 25ºC por siete días.  La identificación de géneros de hongos se realizó observando directamente las estructuras de los hongos al microscopio (400 x) y se compararon con manuales de identificación de géneros de hongos de almacenamiento (Singh et al., 1991; Barnett, 1998)    Recuento de los principales géneros de hongos  El recuento fúngico total por medio de Unidades Formadoras de Colonias (UFC) por gramo de medio de cultivo se obtuvo aplicando la siguiente fórmula 𝑈𝐹𝐶/𝑔 =∑𝑛  [𝑓𝑎 + 𝑓𝑏𝑥(0,1) + 𝑓𝑐 𝑥 (0,01)]. 𝑑. 𝑣  En donde el numerador es el sumatorio total de las colonias y en el denominador: Fa: número de placas de la primera dilución  Fb: Número de placas de la segunda dilución Fc: Número de placas de la tercera dilución Teniendo en cuenta que son tres diluciones, se consideró  d: Valor de la primera dilución v: Volumen de siembra  Luego los datos obtenidos fueron sometidos al análisis de varianza de acuerdo al diseño utilizado, mediante el paquete estadístico InfoStat (Di Rienzo et al. 2011). Para las medias que resultaron con diferencias se utilizó el test de Duncan al 5% de probabilidad de error. Antes de someter los datos al análisis de varianza se realizó un análisis exploratorio de los mismos para verificar si cumplen con los supuestos del ANAVA, usando la Prueba de Shapiro-Wilks para normalidad de residuos.   Arriola Almada, H. M., Chavez Pereira D. P., Quintana, L. Incidencia de hongos en muestras de yerba mate compuesta en el departamento de Itapúa.  Revista sobre estudios e investigaciones del saber académico, 14 (14), enero /diciembre de 2020          ISSN: 2078-5577   e-ISSN: 2078-7928   5   Tabla 1.  Descripción de los Tratamientos evaluados correspondientes a la yerba mate compuesta en el trabajo de investigación.   Tratamientos Código de la Muestra Distritos muestreados T1 M1YMC General Artigas  T2 M2YMC Carmen del Paraná  T3 M3YMC San Pedro del Paraná T4 M4YMC Encarnación T5 M5YMC La Paz T6 M6YMC Fram T7 M7YMC Alto Vera T8 M8YMC Bella Vista T9 M9YMC Hohenau T10 M10YMC San Cosme T11 M11YMC Coronel Bogado T12 M12YMC Capitán Miranda T13 M13YMC Trinidad T14 M14YMC General Delgado T15 M15YMC Leandro Oviedo  Resultados y discusión En la tabla 2 se presentan los resultados de las medias de unidades formadoras de colonias de los principales géneros de hongos identificados.   Tabla 2.  Medias de las unidades formadoras de colonias (UFC/g) de los diferentes géneros obtenidas de las muestras de yerba mate compuesta.   Tratamientos Aspergillus sp.  Penicillum sp.  Fusarium sp.  T1 YMC 334,33 G 230,92 E F 0,00 G T2 YMC 461,56 E 342,14 C 24,02 E T3 YMC 136,63 K 114,41 G 27,82 DE T4 YMC 266,96 H 271,77 DE 28,44 DE T5 YMC 517,51 BCD 286,48 D 71,07 A T6 YMC 583,78 A 480,88 B 54,25 B T7 YMC 215,81 I 32,34 H 1,00 G T8 YMC 540,84 ABC 155,95 G 31,32 D T9 YMC 157,55 JK 144,54 G 12,71 F T10 YMC 401,19 F 275,57 DE 24,02 E T11 YMC 569,16 AB 528,92 A 67,46 A T12 YMC 177,87 J 362,66 C 39,84 C T13 YMC 506,00 CD 267,66 DE 27,12 DE T14 YMC 474,37 DE 358,95 C 27,72 DE T15 YMC 538,83 ABC  200,19 F 16,71 F Promedio 392,16  270,23  30,23  FC 155,00**  78,88**  120,58**  CV (%) 3,20  9,63  6,43  FC = F calculada; CV = Coeficiente de variación. ** Significativo al 1% de probabilidad de error por la prueba de F. Medias con una letra común no son significativamente diferentes.   Los valores obtenidos para los tres géneros de hongos se encuentran en el rango de 0 a 583 UFC/g, por debajo de los criterios establecidos en la Norma Paraguaya para yerba mate compuesta NP 3500201 (5000 UFC/g).  Los mayores valores de incidencia del género Aspergillus, por encima de las 500 UFC/g, se observaron en el 40% de las localidades evaluadas; sin embargo, para el género Penicillum, solamente la muestra proveniente de una localidad mostró valores superiores a 500 UFC/g. El género Fusarium registró valores muy por debajo con relación a los otros tipos de géneros, llegando incluso a observarse nula incidencia.    La incidencia de los géneros Aspergillus sp. y Penicillum sp.  pudo ser favorecida por la facilidad de crecimiento de los hongos en condiciones predisponentes como la presencia de humedad en el almacenamiento. Estos resultados coinciden con los obtenidos por Sapper et al. (2011) quienes cuantificaron los géneros de hongos presentes en mayor frecuencia en 120 muestras de yerba mate compuesta, encontrando los géneros Aspergillus, Absidia, Penicillium, Mucor, Rhizopus, Fusarium y Alternaria como los más comunes en 5 marcas comerciales.   En la figura 1 se presenta la estructura microscópica de los géneros Fusarium, Penicillium y Aspergillus provenientes de 15 muestras de yerba colectadas en el departamento de Itapúa  Figura 1. Características morfológicas de 3 géneros de hongos en muestras de yerba mate compuesta.    Las características morfológicas de los tres géneros identificados se describen a continuación:  El género Aspergillus denota la presencia de la cabeza aspergilar, estípite, métulas o fiálides y conidios. El género Aspergillus es un hongo filamentoso hialino y de fácil crecimiento.    El género Penicillium está conformado por la presencia de conidios, fiálides, métulas y conidióforo, estructuras importantes para la identificación del hongo, el género Penicillum es   un hongo filamentoso que presenta conidióforos tabicados e hialinos.  El género Fusarium tiene micelio hialino tabicado con presencia de conidios hialinos tabicados con prominente célula pie. Algunas especies presentan macro y microconidios.   Las características descritas son similares a lo reportado en la literatura internacional (Singh et al. 1991; Barnett, 1998) para los géneros de hongos estudiados.  Conclusión  En muestras de yerba mate compuesta del departamento de Itapúa se identificaron 3 géneros de hongos, de los cuales Aspergillus sp. y Penicillium sp. presentaron mayor incidencia con relación al género Fusarium sp. registró un bajo nivel de incidencia.  Las muestras analizadas se encuentran dentro de las referencias establecida por las Normas Paraguayas (NP).  Agradecimientos   A la Universidad Nacional de Itapúa y Facultad de Ciencias Agropecuarias y Forestales por el acompañamiento constante en el desarrollo del trabajo. Al Consejo Nacional de Ciencia y Tecnología Arriola Almada, H. M., Chavez Pereira D. P., Quintana, L. Incidencia de hongos en muestras de yerba mate compuesta en el departamento de Itapúa.  6   Revista sobre estudios e investigaciones del saber académico, 14 (14), enero /diciembre de 2020 ISSN: 2078-5577   e-ISSN: 2078-7928  (CONACYT) por el financiamiento del proyecto de investigación “Determinación del estado sanitario de la yerba mate elaborada de las distintas marcas comerciales existentes en el departamento de Itapúa”  Referencias Bibliográficas Barnett, H.L. (1998). Illustrated GeneraImperfect Fungi.  4 ed. Saint Paul, MN,  APS press, 218 p.   Castrillo, M.L., Horianski, M.A., Jerke, G. (2013). Aislamiento de cepas de Aspergillus sección Nigri en la yerba mate comercializada en Posadas (Misiones, Argentina) y evaluación de su potencial ocratoxigénico. Revista Argentina de Microbiología 45(2), 110–113 Di Rienzo, J.A., Casanove, F., Balgarini, M.G., Gonzales, L., Tablada, M. y Robledo, C.W. (2013). Info Stat versión 2011. Grupo InfoStat, FCA, Universidad Nacional de Córdoba, URL. http://www.InfoStat.com.ar  González, C.E., Albrecht, M., Sapper, M., Reckziegel, Y., Fretes, R., Samaniego, J. y Paredes, C. (2012).  Recuento y caracterización de hongos en yerba mate compuesta con hierbas arómaticas. Revista sobre Estudios e Investigaciones del Saber Académico, Encarnación, PY. 6:44-48.    Jerke, G., Horianski, M.A. y Salvatierra K.A. (2009). Evaluación de géneros micotoxigénicos en yerba mate elaborada. Revista Cienc. Tecnol, Posadas 11: 41–45 Masloff, V. (2013). Yerba Mate. Compendio de Experiencias en la recuperación de agroecosistemas yerbateros. Encarnación, Paraguay. 93 pág.  Pérez Paiva, J., Piris Morales, L., Ulke Mayans G., Arias Villalba M., Mendoza de Arbo, L y Sánchez Bernal, S. (2013). Evaluación del perfil micológico de la yerba mate durante el proceso productivo y producto final en establecimientos yerbateros. Paraguay 2012. Rev. Salud Publica 3: 8–13. Sapper, M., Fretes, R., Paredes, C., Reckziegel, Y., Samaniego, J., González, C. (2011). Recuento y caracterización de hongos en yerba mate compuesta con hierbas aromáticas. Universidad Nacional de Itapúa Facultad de Ciencias y Tecnología. Encarnación, Itapúa, Paraguay. http://www.uni.edu.py/admin/revistas/Cientifica%202012.pdf  Singh, K., Frisvad, J.C., Thrame, U. y Mathur, S.B. (1991). An Illustrated Manual on Identificationn of some Seed-borne Aspergilli, Fusaria, Penicillia and their Mycotoxins. Department of Biotechnology. The Technical University of Denmark. 133 p. 

Incidencia de hongos en muestras de yerba mate compuesta en el departamento de Itapúa = Incidence of fungi in samples yerba mate in the department of Itapúa

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