Resumo: no diabetes mellitus tipo 2, hÃ¡ evidÃªncias de que a ausÃªncia de uma ou mais formas de GST estejam associadas Ã  diminuiÃ§Ã£o da produÃ§Ã£o de insulina e disfunÃ§Ã£o das cÃ©lulas â?? de Langerhans. Este estudo caso-controle visou analisar a associaÃ§Ã£o entre o polimorfismo de deleÃ§Ã£o dos genes GSTM1 e GSTT1 com a susceptibilidade a DM2. A anÃ¡lise do perfil genotÃ­pico de 120 pacientes e 147 controles permitiu inferir que nÃ£o hÃ¡ associaÃ§Ã£o da deleÃ§Ã£o de GSTM1 com a susceptibilidade a DM2, porÃ©m a deleÃ§Ã£o de GSTT1 pode levar a um risco aumentado para o desenvolvimento da doenÃ§a na populaÃ§Ã£o analisada.
Palavras-chave: Diabetes mellitus. Susceptibilidade genÃ©tica. Polimorfismo. GSTM1 e GSTT1

Ghendini, Paulo César

Mundim, Cláudia Aparecida

Pinheiro, Denise da Silva

Reis, Ãngela Adamski Silva

Rocha Filho, César Ramos

Ulhoa, Cirano José

Portuguese

Portal de Periódicos Científicos da PUC Goiás

estudos, Goiânia,. 39, n. 3, p. 331-336, jul./set. 2012.DENISE DA SILVA PINHEIRO, CÉSAR RAMOS ROCHA FILHOA, CLÁUDIA APARECIDA MUNDIM, CIRANO JOSÉ ULHOA, PAULO CÉSAR GHENDINI, ÂNGELA ADAMSKI SILVA REISResumo: no diabetes mellitus tipo 2, há evidências de que a ausência de uma ou mais formas de GST estejam associadas à diminuição da produção de insulina e disfunção das células — de Langerhans. Este estudo caso-controle visou analisar a associação entre o polimorfismo de deleção dos genes GSTM1 e GSTT1 com a susceptibilidade a DM2. A análise do perfil genotípico de 120 pacientes e 147 controles permitiu inferir que não há associação da deleção de GSTM1 com a susceptibilidade a DM2, porém a deleção de GSTT1 pode levar a um risco aumentado para o desenvolvimento da doença na população analisada.Palavras-chave: Diabetes mellitus. Susceptibilidade genética. Polimorfis-mo. GSTM1 e GSTT1.D iabetes mellitus tipo 2 (DM2) é uma doença multifatorial caracter-izada por hiperglicemia crônica associada a complicações metabóli-cas, clínicas e sociais, decorrentes do envelhecimento precoce da população, da urbanização crescente e da adoção de estilos de vida pouco saudáveis como o sedentarismo, dieta inadequada e, sobretudo a obesidade (LERARIO et al., 2008). Além do estilo de vida e da exposição ambiental, a susceptibilidade genética é um fator importante no desenvolvimento de DM2.Vários polimorfismos de genes responsáveis pela codificação de enzimas envolvidas na biotransformação de xenobióticos podem estar associados com DM2. A Glutationa S-Transferase (GST) atua na detoxificação de xenobióti-cos tóxicos e produtos reativos de processos intracelulares responsáveis pelo stress oxidativo. Há evidências de que a ausência de uma ou mais formas de GST estejam associadas à diminuição da produção de insulina e disfunção das células β de Langerhans (WANG et al., 2010; ROBERTSON et al., 2003).AVALIAÇÃO DO POLIMORFISMODE DELEÇÃO DE GSTM1NA SUSCEPTIBILIDADEAO DIABETES MELLITUSTIPO 2*331estudos, Goiânia, .v . 39, n. 3, p. 331-336, jul./set. 2012.332Têm sido conduzidos vários estudos quanto ao papel do polimorfismo do sistema GST em diversas patologias, com destaque para o câncer, no entanto poucos estudos avaliaram a influência deste polimorfismo no DM2 (AMER et al., 2011). O polimorfismo de deleção de GSTT1 e GSTM1, que está relacionado à ausência de atividade enzimática para estas isoformas (LONDON et al., 2000), têm apresentado uma correlação positiva com DM2 em estudos rea-lizados em vários outros países (WANG et al., 2006; HORI et al., 2007; AMER et al., 2011).Este estudo caso-controle visou analisar a associação entre o polimorfismo de dele-ção dos genes GSTM1 e GSTT1 com a susceptibilidade a DM2 a fim de contribuir com o conhecimento sobre as bases genéticas da doença na população brasileira.MATERIAL E MÉTODOSAmostrasO grupo caso foi composto de 120 pacientes com DM2 diagnosticados e acompa-nhados pelo Serviço de Endocrinologia do Hospital das Clínicas da Universidade Federal de Goiás, que foram comparados a um grupo controle de 147 indivíduos saudáveis. Foram obtidas amostras de sangue dos pacientes e controles. Em ambos os grupos fo-ram determinados glicemia de jejum e hemoglobina glicada (A1C). Os grupos foram pareados por idade e sexo. O presente trabalho foi aprovado pelo comitê de ética da Universidade Federal de Goiás e todos os indivíduos envolvidos assinaram o termo de consentimento livre e esclarecido.Genotipagem dos genes GSTT1 e GSTM1Foi realizada extração de DNA das amostras utilizando kit comercial próprio para amostras de sangue. Para a análise do polimorfismo de GSTM1 e GSTT1 foram utili-zadas as técnicas de PCR convencional e em tempo real por SYBR Green multiplex, sendo utilizada a amplificação de gene endógeno (RH92600) como controle interno da reação (Figuras 1 e 2).Figura 1: Gel de agarose 1,5% mostrando os genótipos para GSTT1 (480pb) e GSTM1 (219pb). Legenda: MM: Macador 50pb, A1 a A9: amostras, C (+): controle positivo. Nota: Foi utilizado primer RH92600 (banda de 135 pb) como controle endógeno da reaçãoestudos, Goiânia, . v. 39, n. 3, p. 331-336, jul./set. 2012.333Análise EstatísticaFoi empregado o software IBM SPSS Statistics 20. O teste do Qui-quadrado foi utilizado para comparar as frequências genotípicas, tendo sido aplicado o teste exato de Fisher quando necessário; o cálculo de Odds ratio foi utilizado para avaliar o genótipo de risco e susceptibilidade ao DM2. O valor de p < 0,05 foi considerado estatisticamente significante.RESULTADOS E DISCUSSÃOVariáveis ClínicasAs características mais relevantes da população estudada são mostradas na tabela 1. A média de idade nos pacientes do grupo caso foi de 62,05 anos com tempo médio acometimento pela doença de 14,3 anos, sendo o valor médio de glicemia de jejum e Hemoglobina glicada (A1C), 186,2 mg/dL e 9,1%, respectivamente. O grupo con-trole apresentou média de idade de 54,5 anos e valores dentro da normalidade para as variáveis clínicas analisadas. Análises estatísticas relacionadas à distribuição por sexo, idade e hábito de fumar entre os grupos caso e controle não apresentaram dife-renças significativas, indicando que os grupos comparados são homogêneos (dados não mostrados). Figura 2: Curva de melting da qPCR  multiplex (SYBR Green) - GSTM1 (77.5 º C), GSTT1 (82.5 º C) e RH 92600 (74 º C)estudos, Goiânia, .v . 39, n. 3, p. 331-336, jul./set. 2012.334Tabela 1: Características da população estudadaVariáveis Pacientes ControlesNúmero 120 147Idade (anos) 54,5 ± 11,58 62,5 ± 11,87Sexo (%)Masculino 47,5 44,2Feminino 52,5 55,8IMC 27,3 ± 5,65 28,7 ± 5,55Glicemia de Jejum (mg/dL) 186,2 ± 78,08 87,5 ± 8,75Hemoglobina Glicada (%) 9,1 ± 2,7 5,6 ± 2,1Fumantes (%) 12,9 9,4Nota: Dados são reportados como média ± desvio padrão.Distribuição de genótipos GSTT1 e GSTM1Nos pacientes diabéticos, a frequência de GSTT1 nulo e GSTM1 nulo foram de 29,2% e 41,7%, respectivamente, enquanto nos controles as frequências de GSTT1 nulo e GSTM1 nulo foram 12,2 e 43,5, respectivamente (Tabela 2), o que se aproxima das frequências reportadas em países europeus (caucasianos).Caso ControleGenótipo n (%) n (%) X2 GL Valor PGSTM1Presente 70 (58,3) 83 (56,5) 0,095 1 0,7585Nulo 50 (41,7) 64 (43,5)GSTT1Presente 85 (70,8) 129 (87,8) 11.891 1 0.0006 *Nulo 35 (29,2) 18 (12,2)Total 120 (100) 147 (100)Tabela 2: Distribuição dos genótipos para GSTT1 e GSTM1 na população estudadaNota: Análise pelo teste do Qui-quadrado. Legenda: *Diferença significativa entre os grupos.Associação do polimorfismo de GSTT1 e GSTM1 com DM2A distribuição da frequência genotípica para GSTM1 entre grupo caso e grupo controle não apresentou diferenças significativas (p = 0,758). Para a análise de GSTT1 observou-se que a proporção de genótipo GSTT1 nulo nos pacientes diabéticos foi significativamente maior do que nos controles (p < 0,01) (Tabela 2). A análise de risco por Odds Ratio (OR) sugere que o genótipo de risco (nulo) para GSTT1 (p < 0,01) está relacionado a uma maior predisposição ao DM2 (Tabela 3), sendo que o genótipo pre-estudos, Goiânia, . v. 39, n. 3, p. 331-336, jul./set. 2012.335sente confere uma redução de 0,34 vezes no risco de desenvolver a doença em relação ao genótipo nulo.Tabela 3: Relação entre os genótipos GSTT1 e GSTM1 e o risco a DM2GenótipoCasos ControleOR (IC 95%) pGRª GNR b GR a GNR bGSTM1 50 70 64 83 0,93 (0,5687-1,5089) 0,8548GSTT1 35 85 18 129 0,34 (0,1803-0,6369) 0.0010*Nota: Análise por Odds Ratio. Legenda: a Genótipo considerado de risco, b Genótipo não considerado de risco. *Diferença significativa entre os grupos.CONCLUSÃOO DM2 é uma doença multifatorial, que se desenvolve pela interação entre exposição a fatores ambientais de risco e susceptibilidade genética, de forma que os polimorfis-mos genéticos podem influenciar no risco para o desenvolvimento desta patologia. Os resultados sugerem que o polimorfismo de deleção do gene GSTT1 pode desempenhar um papel importante na patogênese do DM2, corroborando com estudos descritos na literatura. A análise da associação de outras variáveis clínicas, como perfil lipídico e níveis pressóricos, com o polimorfismo estudado permitirá inferir se a ausência de GSTT1 e GSTM1 pode contribuir para complicações relacionadas ao DM2, tais como, dislipidemia, nefropatia e hipertensão arterial sistêmica.EVALUATION OF DELETION POLYMORPHISM OF GSTM1 and GSTT1 IN SUSCEPTIBILITY TO TYPE 2 DIABETES MELLITUSAbstract: in type 2 diabetes mellitus, there is evidence that the absence of one or more forms of GST may be associated to decreased insulin production and β-cell dysfunc-tion. This case-control study aimed to analyze the association between the deletion polymorphism of GSTM1 and GSTT1 genes with susceptibility to DM2. The analysis of genotypic profile of 120 patients and 147 controls allowed to infer that there is no association with the deletion of GSTM1 susceptibility to DM2, but the deletion of GSTT1 can lead to an increased risk for the development of disease in the population analyzed.Keywords: Diabetes mellitus. Genetic susceptibility. Polymorphism. GSTM1 e GSTT1.ReferênciasAMER, M. A. et al. Influence of glutathione S-transferase polymorphisms on type-2 diabetes mellitus risk. Genet. Mol. Res., v. 10, n. 4, p. 3722-30, 2011.HORI, M. et al. Combined glutathione S-transferase T1 and M1 positive genotypes afford protection against type 2 diabetes in Japanese. Pharmacogenomics, v. 8, p. 1307-1314, 2007.LERRARIO, A. C. et al. Avaliação da prevalência do Diabetes e da hiperglicemia de estresse no infarto agudo do miocárdio. Arq. Bras. Endocrinol. Met., v. 52, n. 3, p. 465-472, 2008.LONDON, S. J. et al. Isothiocyanates, glutathione S-transferase M1 and T1 polymor-estudos, Goiânia, .v . 39, n. 3, p. 331-336, jul./set. 2012.336phisms, and lung-cancer risk: a prospective study of men in Shanghai, China. Lancet, v. 356, p. 724-729, 2000.REIS, A. F., VELHO, G. Bases genéticas do diabetes mellitus tipo 2. Arq. Bras. Endo-crinol. Metabol., v. 46, p. 426-32, 2002.ROBERTSON, R. P. et al. Glucose toxicity in [beta]-cells: type 2 diabetes, good radicals gone bad, and the glutathione connection. Diabetes, v. 52, p. 581–587, 2003.WANG, G. et al. Genetic polymorphisms of GSTT1, GSTM1, and NQO1 genes and diabetes mellitus risk in Chinese population. Biochem. Biophys. Res. Commun., v. 341, p. 310-313, 2006.* Recebido em: 12.07.2012.  Aprovado em: 22.07.2012. Apoio: Fapeg, Programa de Pós-Graduação em Biologia do ICB/UFG.DENISE DA SILVA PINHEIROMestranda em Biologia pela Universidade Federal de Goiás (UFG), graduada em  Biomedicina pela UFG, Biomédica do Instituto de Ciências Biológicas (ICB) da UFG. E-mail: facasealuz@hotmail.comCÉSAR RAMOS ROCHA FILHO Graduando em Biotecnologia pela UFG.CLÁUDIA APARECIDA MUNDIMMédica Assistente do Serviço de Endocrinologia do Hospital das Clinicas da UFG, Especialista em Clinica Médica pela UFG, graduada em Medicina pela UFG. E-mail: clmundim@gmail.com.CIRANO JOSÉ ULHOADoutor em Genética e Bioquímica de Microorganismos (Nottingham University). Graduado em Ciên-cias Biológicas pela UNB. Departamento de Bioquímica e Biologia Molecular (DBBM) do Instituto de Ciências Biológicas (ICB) da UFG. E-mail: ulhoa@icb.ufg.brPAULO CÉSAR GHENDINIDoutor em Farmacologia pela UNIFESP. Graduado em Farmácia e Bioquímica. Departamento de Ci-ências Fisiológicas do Instituto de Ciências Biológicas (ICB) da UFG. E-mail: pcghedini@gmail.comÂNGELA ADAMSKI SILVA REISDoutora em Biologia Celular e  Molecular pela UFG, graduada em Ciências Biomédicas pela Pontifícia Universidade Católica de Goiás (PUC-GO). Departamento de Bioquímica e Biologia Molecular (DBBM) do Instituto de Ciências Biológicas (ICB) da UFG. E-mail: angeladamski@gmail.com

Avaliação do Polimorfismo de Deleção de GSTM1 na Susceptibilidade ao Diabetes Mellitus Tipo 2

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Avaliação do Polimorfismo de Deleção de GSTM1 na Susceptibilidade ao Diabetes Mellitus Tipo 2

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