Dominique C.K. Sohounhloué

Edwige Ahoussi

Félicien Avlessi

Guy Alitonou

J. Dangou

Valentin D. Wotto

Comptes Rendus Chimie

Mémoire / Full paperComposition chimique, propriétés antimicrobiennes et activitéssur les tiques de l’huile essentielle d’Eucalyptus tereticornis SmGuy Alitonou, Félicien Avlessi, Valentin D. Wotto, Edwige Ahoussi,J. Dangou, Dominique C.K. Sohounhloué *Laboratoire de recherche en chimie et biologie appliquées, École polytechnique d’Abomey-Calavi, université d’Abomey-Calavi,01 BP 2009 Cotonou, république du BéninReçu le 8 novembre 2003 ; accepté le 21 novembre 2003Disponible sur internet le 02 septembre 2004RésuméLa composition chimique de l’huile essentielle extraite des feuilles fraîches d’Eucalyptus tereticornis Sm. récoltées àSèmè-kpodji (Bénin) a été étudiée par chromatographie en phase gazeuse et chromatographie en phase gazeuse couplée avec laspectrométrie de masse. Vingt-trois composés, représentant 91 % de l’huile, ont été identifiés. Les constituants majoritaires sontle p-cimène (31,4 %), le b-phellandrène (9,77 %), le spathulénol (8,13 %), le c-terpinène (7,03 %) et le a-phellandrène (6,78 %).Cette essence présente des activités antimicrobiennes et une activité biologique très accentuée contre les tiques. Pour citer cetarticle : G. Alitonou et al., C. R. Chimie 7 (2004).© 2004 Académie des sciences. Publié par Elsevier SAS. Tous droits réservés.AbstractChemical composition, antimicrobial properties and activities against tics of the essential oil from Eucalyptustereticornis Sm. The chemical composition of the leaf oil of Eucalyptus tereticornis Sm. was determined by high-resolution GCand GC/MS. Twenty-three compounds, representing 91.0% of the oil, were determined. The major components were: p-cimene(31.4%), b-phellandrene (9.77%), spathulenol (8.13%), c-terpinene (7.03%), and a-phellandrene (6.78%). The essential oil ofEucalyptus tereticornis Sm. exhibited antimicrobial activities. This oil was tested for antiviral activity against tics. To cite thisarticle: G. Alitonou et al., C. R. Chimie 7 (2004).© 2004 Académie des sciences. Publié par Elsevier SAS. Tous droits réservés.Mots clés : Eucalyptus tereticornis ; Myrtaceae ; Composition de l’huile essentielle ; Propriétés antimicrobiennes ; Activité biologique contre lestiquesKeywords: Eucalyptus tereticornis; Myrtaceae; Essential oil composition; Antimicrobial properties; Biological activity against tics* Auteur correspondant.Adresse e-mail : ksohoun@bj.refer.org (D.C.K. Sohounhloué).C. R. Chimie 7 (2004) 1051–10551631-0748/$ - see front matter © 2004 Académie des sciences. Publié par Elsevier SAS. Tous droits réservés.doi:10.1016/j.crci.2003.11.0141. IntroductionLes extraits volatiles des plantes aromatiques sontrecherchés depuis l’antiquité pour leurs propriétés bio-logiques [1]. Au nombre de celles-ci, on reconnaît lespropriétés antibactériennes [2] et antifongiques [3]ainsi que l’activité contre les tiques (Amblyomma va-riegatum).Dans la littérature, on rapporte que les feuillesd’Eucalyptus tereticornis Sm. sont recherchées en mé-decine traditionnelle pour leurs propriétés aromatiqueset pharmaceutiques, et le pollen des fleurs de cetteplante butinée par les abeilles donne un miel très nour-rissant et à arôme particulièrement agréable [4].Sohounhloué et al. [5] ont montré que les huilesessentielles de Clausena anisata, d’Ocimum basili-cum et d’Eucalyptus camadulensis ont freiné la proli-fération du Prostephanus truncatus (Horn).Au cours des dix dernières années, de nombreusesétudes ont tenté de démontrer la synergie d’action desconstituants d’huile essentielle sur les différentes sor-tes de cellules végétales ou animales dans le but devaincre les réticences que suscite encore l’applicationde ces essences en pharmacologie et dans les essaiscliniques [6–8]. À cet égard, l’utilisation de ces subs-tances naturelles présente un avantage certain sur lesproduits de synthèse, qui se révèlent toxiques et parfoismême cancérigènes, aussi bien pour les cellules anima-les que végétales [9].C’est dans le souci de valoriser ses ressources natu-relles que nous avons jugé important d’étudier, dans lecadre du présent travail, la composition chimique del’huile essentielle d’Eucalyptus tereticornis Sm. pro-duite au Bénin, ses propriétés antibactériennes et anti-fongiques ainsi que son activité contre les tiques.2. Partie expérimentale2.1. Matériel et méthode2.1.1. Matériel végétal et extraction de l’huileL’huile essentielle est extraite des feuilles d’Euca-lyptus tereticornis Sm récoltées à Sèmè-kpodji en mars2002 par hydrodistillation sur un appareil de type Cle-venger.2.1.2. Analyse de l’huile essentielleL’analyse des huiles essentielles a été effectuée parchromatographie en phase gazeuse couplée à la spec-trométrie de masse (CPG–SM). Le couplage a étéeffectué sur un appareil Hewlett Packard modèle 5970(système de détection quadripolaire) équipé d’une co-lonne capillaire en silice fondue de 2 mm × 0,23 mm detype DB1 ; programmation de température de 50 °C et200 °C, avec un gradient de 5 °C/min. Les indices derétention ont été déterminés par chromatographie enphase gazeuse sur deux colonnes capillaires en silicefondue (25 m × 0,25 mm) de type OV-101 et Cabowax20 M avec une programmation de température identi-que à celle utilisée par le couplage (appareil ShimatzuGC-14A équipé d’un détecteur à ionisation de flammeet d’un intégrateur modèle C-R4A).2.2. Milieux de culture2.2.1. Préparation des milieux de cultureDeux milieux de culture notés M1 et M2 sont prépa-rés.Milieu M1 : 45,5 g de Sabouraud sont dissous dans1 l d’eau distillée. Le pH est ajusté à 6,8.Milieu M2 : 17 g d’agar-agar sont dissous dans500 ml de moût de bière. On ajoute ensuite 500 mld’eau distillée stérilisée. Le pH du milieu est ajusté à6,8.Ces milieux de culture sont ensuite stérilisés àl’autoclave à 120 °C pendant 20 min.2.2.2. Culture et isolation des microorganismes2.2.2.1. Culture des microorganismes. La techniqueutilisée est celle de dilution en série géométrique de lasolution mère S0 par la méthode d’Agar [10].2.2.2.2. Obtention et isolation des souches pu-res. Après fusion des milieux M1 et M2, on a procédé àleur coulage à chaud dans des boîtes de Pétri. Cesdernières sont laissées à la température ambiante pen-dant 48 h. On procède ensuite au repiquage de la zoned’inhibition. Cette opération, répétée trois fois, a per-mis d’obtenir des souches pures.2.2.3. Test d’activité antimicrobienne avec les huilesessentielles2.2.3.1. Obtention de suspensions. Les souches puresainsi obtenues sont ensemencées dans les tubes à essaicontenant les milieux M1 et M2. À partir de ces tubes,on réalise des suspensions pour les divers tests.1052 G. Alitonou et al. / C. R. Chimie 7 (2004) 1051–10552.3. Matériel animalLes tiques (Amblyoma variegatum) ont été préle-vées sur les bovins élevés sur les fermes du Cenou(Campus d’Abomey-Calavi) et de Kpinnou (départe-ment du Mono). Elles sont conservées dans des boîtesen plastique stériles, avec trois à quatre trous d’aéra-tion, avec du coton imbibé d’eau.L’expérience consiste à mettre un nombre variablede tiques femelles ou mâles préalablement séparéesdans différentes boîtes de pétri. On y ajoute 1 µl dechaque huile essentielle à l’aide d’une micropipette. Ladurée de vie des tiques est suivie à l’aide d’un chrono-mètre.3. Résultats et discussions3.1. Composition chimique de l’huile essentielled’Eucalyptus tereticornisLes constituants majoritaires (Tableau 1) sont lepara-cimène (31,14 %), le b-phellandrène (9,77 %), lespathulénol (8,13 %), l’a-phellandrène (6,78 %), lec-terpinène (7,03 %), le a-phellandrène (6,78 %), le1,8 cinéole (5,35 %). Cette huile diffère par sa compo-sition de celle extraite des feuilles de la même espècecultivée à Dogbo (Mono) par Sohounhloue et al. [11],dont les constituants majoritaires sont le trans-transfarnésol (58,51 %), le trans-cis farnésol (12,56 %), lecis-cis farnésol (8,42 %) et le b-pinène (7,83 %).Ces résultats indiquent que nous sommes au Béninen présence de deux chémotypes d’Eucalyptus tereti-cornis Sm : le chémotype à farnésol et le chémotype àpara-cymène.3.2. Activité antimicrobienne de l’huile essentielled’Eucalyptus tereticornis SmLa Fig. 1 nous donne le résultat du dénombrementdes colonies en fonction de la concentration desbouillons de culture.Il ressort de l’analyse de cette courbe que la dimi-nution du nombre de microorganismes est fonction dela dilution.Les résultats du dénombrement regroupés dans leTableau 2 montrent les zones de croissance retardée,qui sont représentées par des signes « plus ».Le signe « moins » (–) montre que l’huile essentiellen’a pas d’action sur les microorganismes contenusdans ces boîtes de Pétri.L’examen de ce tableau montre que l’huile essen-tielle d’Eucalyptus tereticornis Sm. a un pouvoir inhi-biteur assez étendu à l’égard des microorganismes étu-diés.Tableau 1Composition chimique de l’huile essentielle extraite de feuillesd’Eucalyptus tereticornis Sm récoltées à Sèmè kpodji (Bénin)No Composants Colonne DB-5IR %1 a-thujène 933 2,102 a-pinène 939 1,513 myrcène 992 0,974 a-phellandrène 1000 6,785 a-terpinène 1016 0,506 p-cimène 1025 31,147 b-phellandrène 1030 9,778 1,8-cinéole 1032 5,359 c-terpinène 1067 7,0310 terpinolène 1098 0,6611 terpin-1-en-4-ol 1177 3,5312 cryptone 1182 2,0513 a-terpinéol 1188 0,7414 non identifié 1276 0,9615 non identifié 1353 0,6816 alloaromadendrène 1461 1,1817 bicyclogermacrène 1499 2,2118 spathulénol 1574 8,1319 oxyde de caryophyllène 1579 2,4920 c-eudesmol 1635 0,9121 b-eudesmol 1647 0,7522 a-eudesmol 1651 0,6823 E-E-farnésol 1733 0,87TOTAL 91,0Tableau 2Effets inhibiteurs des substances actives de l’huile essentielle sur lesmicroorganismesNo des boîtes de Pétri Eucalyptus tereticornis Sm1 –2 –3 –4 –5 ++6 +++7 +++8 +++1053G. Alitonou et al. / C. R. Chimie 7 (2004) 1051–1055Après repiquage d’une zone de croissance retardée,on a constaté l’apparition des colonies dans certainesboîtes de Pétri. L’identification des microorganismes apermis de constituer le Tableau 3 et de procéder à lavérification des propriétés antimicrobiennes de l’huileessentielle.3.3. Activité contre les tiques (Amblyommavariegatum)Les Figs. 2 et 3 illustrent l’action des huiles essen-tielles sur les tiques mâles et femelles.L’examen des Figs. 2 et 3 montre que les tiquesfemelles résistent plus à l’action destructrice de l’huileessentielle d’Eucalyptus tereticornis Sm. que les ti-ques mâles. Toutes les tiques mâles sont détruites après45 min alors que les tiques femelles ont résisté jusqu’à325 min (05 h 25 min).4. ConclusionDe l’analyse de la composition chimique, il ressortque :• l’essence d’Eucalyptus tereticornis Sm. comportecomme composés principaux le p-cimène(31,14 %) ; le b-phellandrène (9,77 %) ; le spathu-lénol (8,13 %) ; le c-terpinène (7,03 %), le a-phel-landrène (6,78 %) et 1,8-cinéole (5,35 %) ;• l’huile essentielle d’Eucalyptus tereticornis Smprésente une activité bactéricide (elle détruit com-plètement Saccharomyces spp., Sporobolomyces etHansenula), fongicide (détruit Corynebacteriaceaespp.) et fongiostatique (inhibe la croissance de To-rulopsis candida), objets de nos investigations ;• l’huile essentielle d’Eucalyptus tereticornis Smexerce une action destructrice sur les tiques (il est ànoter que les tiques femelles résistent davantage àcette essence).Fig. 1. Nombre de colonies dénombrées en fonction de la concentration.Tableau 3Propriétés antimicrobiennes de l’huile essentielle d’Eucalyptus tereticornis SmNo desboîtesde PétriDescription Genre Eucalyptus tereticornis SmEffet après repiquage Propriétés2 levures isolées grosses de formes ovoïdeset lenticulairesSaccharomyces spp. destructeur fongicides5 bactéries Gram (+) corynéformes Corynebacteriaceae spp. destructeur bactéricides6 levures encapsulées Sporobolomyces destructeur fongicides7 levures en chaîne ou en amas Torulopsis candida inhibiteur fongiostatiques8 levures ovoïdes et lenticulaires Hansenula spp. destructeur fongicides1054 G. Alitonou et al. / C. R. Chimie 7 (2004) 1051–1055Références[1] S.G. Deans, P.G. Waterman, in: R.K.M. Hay, P.G. Waterman(Eds.), Volatile oil crops: Their Biology, Biochemistry andProduction, Longman Group, Londres, UK, 1993, p. 113.[2] S.G. Deans, A.I. Kennedy, M.G. Gundidza, S. Mavi,P.G. Waterman, A.I. Gray, Flavour Fragrance J. 9 (1994) 245.[3] R.R. 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