Dominique C.K. Sohounhloué

Edwige Ahoussi

Félicien Avlessi

Guy Alitonou

Innocent Bokossa

Justine Dangou

Comptes Rendus Chimie

Mémoire / Full paperComposition chimique et activités biologiquesde l’huile essentielle de Lantana camara Linn.Guy Alitonou, Félicien Avlessi, Innocent Bokossa, Edwige Ahoussi,Justine Dangou, Dominique C.K. Sohounhloué *Laboratoire de recherche en chimie et biologie appliquées, École polytechnique d’Abomey-Calavi, université d’Abomey-Calavi,01 BP 2009 Cotonou, république du BéninReçu le 8 novembre 2003 ; accepté le 21 novembre 2003Disponible sur internet le 09 septembre 2004RésuméLa composition chimique de l’huile essentielle extraite des feuilles fraîches de Lantana camara Linn. récoltées sur le campusd’Abomey-Calavi (Bénin) a été étudiée par chromatographie en phase gazeuse couplée avec la spectrométrie de masse (CG etCG/SM). Quarante et un constituants, représentant 94,76 % de l’huile essentielle de Lantana camara, ont été identifiés. Lescomposés majoritaires sont : b-caryophyllène 18,5 % ; sabinène 13,1 % ; a-humulène 10 % ; 1,8-cinéole 9 % ; d-guaiene 5,0 %.Cette huile, testée sur des microorganismes (bactéries et champignons) et les tiques (Amblyoma variegatum), s’est révélée trèsefficace. Pour citer cet article : G. Alitonou et al., C. R. Chimie 7 (2004).© 2004 Académie des sciences. Publié par Elsevier SAS. Tous droits réservés.AbstractChemical composition and biological activities of essential oil from Lantana camara Linn. The hydrodistilled essentialoils of fresh aerial parts of Lantana camara Linn. have been analysed by GC and GC/MS. Forty-one compounds, representing94.7% of Lantana camara oil’s composition, were identified. The major constituents are: b-caryophyllene 18.5%, sabinene13.1%, a-humulene 10.0%, 1,8-cineole 9.0%, d-guaiene 5.0%. This oil exhibited significant antimicrobial properties andbiological activity against tics. To cite this article: G. Alitonou et al., C. R. Chimie 7 (2004).© 2004 Académie des sciences. Publié par Elsevier SAS. Tous droits réservés.Mots clés : Lantana camara ; Verbenaceae ; Composition chimique de l’huile essentielle ; Activités antimicrobiennes ; Amblyoma variegatumKeywords: Lantana camara; Verbenaceae; Essential oil composition; Antimicrobial activities; Amblyomma variegatum* Auteur correspondant.Adresse e-mail : ksohoun@bj.refer.org (D.C.K. Sohounhloué).C. R. Chimie 7 (2004) 1101–11051631-0748/$ - see front matter © 2004 Académie des sciences. Publié par Elsevier SAS. Tous droits réservés.doi:10.1016/j.crci.2003.11.0171. IntroductionDepuis l’Antiquité, les extraits volatils des plantesaromatiques sont recherchés, non seulement pour l’as-saisonnement des cuissons et pour rendre plus agréa-bles les bains et l’eau de toilette, mais également etsurtout en raison de leurs pouvoirs antiseptique et dé-sinfectant.À la suite des travaux fondamentaux de Morel etRochaux [1], qui tentèrent d’établir une méthode com-parative pour la connaissance systématique du pouvoirantimicrobien des huiles essentielles, de nombreusesrecherches ont été consacrées à l’étude de la composi-tion chimique des huiles essentielles.Schweisheinmer a démontré que les huiles essen-tielles, dont les esters sont le constituant principal, semontrent particulièrement actives. Elles sont suiviespar les hydrocarbures aromatiques, les oxydes, les phé-nols, les aldéhydes, les cétones et les alcools [2].Weenem et al. [3] ont rapporté que Lantana camaraLinn. (Verbenaceae), arbuste aromatique poussantdans les régions tropicales et subtropicales, est recher-ché pour la lutte contre le paludisme en Inde.Les premières études faites par Avadhoot [4] etSharma [5] sur l’huile essentielle extraite des grainesde cette plante ont révélé d’intéressantes propriétésantiseptiques et antifongiques.Au Bénin, les feuilles de cette plante aromatiquesont souvent utilisées en pharmacopée traditionnellepour le traitement des affections de la peau chez lesanimaux domestiques, affections pour lesquelles lestiques jouent le rôle le plus important, aussi bien dansl’évolution de la maladie que dans sa transmission.En raison de l’effet néfaste des dermatoses bovinessur le développement du cheptel national, on a souventeu recours aux antibiotiques de synthèse dans le traite-ment de ces pathologies. Malheureusement, ce traite-ment très onéreux semble peu efficace, puisque lamaladie réapparaît presque toujours pendant la saisondes pluies [6].Face aux résultats mitigés obtenus avec les produitsde synthèse, il est urgent de rechercher de nouvellessources naturelles de produits antimicrobiens. Dans cetordre d’idées, il nous a paru fondé d’étudier la compo-sition chimique de l’huile essentielle extraite desfeuilles de Lantana camara Linn. récoltées au Bénin,et d’élucider son action sur les bactéries et tiques.Le présent travail présente les résultats de cetteétude.2. Partie expérimentale2.1. Extraction et analyse des huiles essentielles2.1.1. Extraction des huiles essentiellesLes huiles essentielles ont été obtenues par hydro-distillation de tiges feuillées (feuilles de Lantana ca-mara Linn.) par fractions de 250 g pendant une duréede 3 h, en utilisant un extracteur de type Clevenger. Lesessences moins denses que l’eau sont recueillies parsimple décantation et séchées sur sulfate de sodiumanhydre avant analyse.2.1.2. Analyse des huiles essentiellesL’analyse des huiles essentielles a été effectuée parchromatographie en phase gazeuse couplée à la spec-trométrie de masse (CPG-SM). Le couplage a été ef-fectué sur un appareil Hewlett-Packard modèle 5970(système de détection quadripolaire), équipé d’une co-lonne capillaire en silice fondue de 2 mm × 0,23 mm detype DB1 ; programmation de température de 50 °C à200 °C, avec un gradient de 5 °C min–1. Les indices derétention ont été déterminés par chromatographie enphase gazeuse sur deux colonnes capillaires en silicefondue (25 m × 0,25 mm) de type OV-101 et Cabowax20 M, avec une programmation de température identi-que à celle utilisée pour le couplage (appareil ShimatzuGC-14A équipé d’un détecteur à ionisation de flammeet d’un intégrateur modèle C-R4A).2.2. Milieux de culture2.2.1. Préparation des milieux de cultureDeux milieux de culture, notés M1 et M2, ont étépréparés :• milieu M1 : 45,5 g de Sabouraud sont dissous dans1 l d’eau distillée ; le pH est ajusté à 6,8 ;• milieu M2 : 17 g d’agar-agar sont dissous dans500 ml de moût de bière ; on ajoute ensuite 500 mld’eau distillée stérilisée ; le pH du milieu est ajusté à6,8.Ces milieux de culture sont ensuite stérilisés àl’autoclave à 120 °C pendant 20 min.2.2.2. Culture et isolement des microorganismes2.2.2.1. Culture des microorganismes. La techniqueutilisée est celle de dilution en série géométrique de lasolution mère S0 par la méthode d’Agar [7].1102 G. Alitonou et al. / C. R. Chimie 7 (2004) 1101–11052.2.2.2. Obtention et isolement des souches pu-res. Après fusion des milieux M1 et M2, on a procédé àleur coulage à chaud dans des boîtes de Pétri. Cesdernières sont laissées à la température ambiante pen-dant 48 h. On procède ensuite au repiquage de la zoned’inhibition. Cette opération, répétée trois fois, a per-mis d’obtenir des souches pures.2.2.3. Test d’activité antimicrobienne avec les huilesessentielles2.2.3.1. Obtention de suspensions. Ces souches puresobtenues sont ensemencées dans les tubes à essaicontenant les milieux M1 et M2. À partir de ces tubes,on réalise des suspensions pour les divers tests.2.3. Matériel animalLes tiques (Amblyoma variegatum) ont été préle-vées sur les bovins élevés sur les fermes du Cenou(Campus d’Abomey-Calavi) et de Kpinnou (départe-ment du Mono). Elles sont conservées dans des boîtesen plastique stériles, avec trois à quatre trous d’aéra-tion, avec du coton imbibé d’eau.L’expérience consiste à mettre un nombre variablede tiques femelles ou mâles, préalablement séparées,dans différentes boîtes de pétri. On y ajoute 1 µl dechaque huile essentielle à l’aide d’une micropipette. Ladurée de vie des tiques est suivie à l’aide d’un chrono-mètre.3. Résultats et discussions3.1. Composition chimique des huiles essentiellesde Lantana camara LinnLe rendement en huile essentielle est de 0,22 %. Sacomposition chimique, reportée sur le Tableau 1, com-prend comme composés majoritaires le b-caryo-phyllène (18,5 %), le sabinène (13,1 %), l’a-humulène(10,0 %), le 1,8-cinéole (9,0 %) et le d-guaiène 5,0 %.Cette huile est caractérisée par un taux élevé desesquiterpènes hydrocarbonés (42,2 %), suivis par desmonoterpènes hydrocarbonés (31,0 %), des sesquiter-pènes oxygénés (14,1 %), des monocarbones oxygénés(5,5 %) et des composés aliphatiques (1,9 %).Tableau 1Composition chimique de l’huile essentielle extraite des feuilles deLantana camara Linn. récoltées sur le campus d’Abomey-Calavi(Bénin)Composants IKoV101 Pourcentagea-Thujène 924 0,2a-Pinène 934 1,5Camphène 946 0,7Octène-3-ol 965 0,6Sabinène 968 13,1b-Pinène 975 1,6Myrcène 983 1,5a-Phellandrène 994 1,0d-3-Carène 1004 1,6a-Terpinène 1012 0,2p-Cymène 1016 0,21,8-cinéole 1020 9,0(Z)-b-Ocimène 1028 0,6(E)-b-Ocimène 1039 0,8c-Terpinène 1051 0,5Hydrate de sabinène (trans) 1062 0,7Terpinolène 1082 0,4Linalol 1086 0,7Camphre 1129 1,3Bornéol 1151 0,6Terpinène-4-ol 1163 1,5a-Terpinéol 1180 0,7a-Copaène 1376 0,5b-Élémène 1387 0,8b-caryophyllène 1419 18,5Aromadendrène 1434 0,7a-Humulène 1451 10,0c-Muurolène 1472 0,4d-Guaiene 1495 5,0Germacrène D 1478 2,0c-Cadinène 1506 0,6d-Cadinène 1514 0,4Davadone (I) 1538 1,5Davadone (II) 1544 1,6trans-Nérolidol 1549 4,0Davadone (III) 1562 0,8Spathulénol 1565 1,0Oxyde de caryophyllène I (trans) 1570 0,8Oxyde d’humulène 1594 1,2Torreyol 1630 0,9T-muurolol 1639 2,3N.I.(3) 1651 1,4N.I.(5) 1745 1,3Total 94,7Monoterpènes hydrocarbonés 31,0Monoterpènes oxygénés 5,5Sesquiterpènes hydrocarbonés 42,2Sesquiterpènes oxygénés 14,1Composés aliphatiques 1,9Composés non identifiés 2,71103G. Alitonou et al. / C. R. Chimie 7 (2004) 1101–11053.2. Action sur les microorganismesLa Fig. 1 nous donne le résultat du dénombrementdes colonies en fonction de la concentration desbouillons de culture.De l’analyse de cette courbe, il ressort que la dimi-nution du nombre de microorganismes se fait selon ladilution.Les résultats du dénombrement regroupés dans leTableau 2 montrent les zones de croissance retardéequi sont représentées par des signes « plus » (++).Le signe « moins » (–) indique que les huiles essen-tielles n’ont pas d’action sur les microorganismescontenus dans ces boîtes de Pétri.L’examen de ce tableau montre que l’huile essen-tielle de Lantana camara Linn. possède un pouvoirinhibiteur fort et assez étendu sur les microorganismesétudiés.Après repiquage de la zone de croissance retardée,on a constaté l’apparition des colonies dans certainesboîtes de Pétri. L’identification des microorganismes apermis de constituer le Tableau 3 et de procéder à lavérification des propriétés antimicrobiennes.3.3. Action sur les tiques (Amblyomma variegatum)Les Figs. 2 et 3 illustrent l’action des huiles essen-tielles sur les tiques mâles et femelles.L’examen de ces figures montre que les tiques fe-melles résistent davantage à l’action destructrice del’huile essentielle de L. camara Linn. que les tiquesmâles. Toutes les tiques mâles sont détruites après45 min, alors que les tiques femelles ont résisté jusqu’à325 min.4. ConclusionDe l’analyse de la composition chimique des huilesessentielles, il ressort que l’essence de Lantana ca-mara Linn. a pour composés majoritaires leb-caryophyllène (18,5 %), le sabinène (13,1 %), l’a-humulène (10,0 %), le 1,8-cinéole (9,0 %) et led-guaiène (5,0 %).Tableau 2Effets inhibiteurs des substances actives des huiles essentielles surles microorganismesN° des boîtes de Pétri Lantana camara Linn.1 –2 ++3 –4 –5 +++6 –7 +++8 +++Fig. 1. Nombre de colonies dénombrées par boîte de Pétri.1104 G. Alitonou et al. / C. R. Chimie 7 (2004) 1101–1105L’étude de l’action de l’huile essentielle de Lantanacamara Linn. sur les microorganismes testés a révéléqu’elle possède des propriétés fongicides (elle détruitcomplètement le Saccharomyces spp. et le Sporobolo-myces), bactéricides (elle détruit complètement le Co-rynebacteriaceae spp.) et fongiostatiques (elle inhibela croissance de Torulopsis, candida ou de Hanse-nula).L’huile essentielle de Lantana camara Linn. exerceune action destructrice sur les tiques (Amblyoma varie-gatum). Il est à noter que les tiques femelles résistentdavantage à cette huile que les mâles.Références[1] A. Morel, A. Rochaix, Parf. Mod. 18 (1925) 261.[2] W. Schweisheiner, SM SAV 8 (4) (1965) 171.[3] H. Weenen, H.H.M. Nkunya, H.D. Bray, B.L. Mwasumbi,S.L. Kinabo, B.E.A.V. Kilimali, Planta Med. 56 (4) (1990)368.[4] Y. Avadhoot, C.K. Varma, Indian Drugs Pharm. Ind. 15 (1)(1980) 19.[5] K.S. Sharma, P.V. Singh, Indian Drugs Pharm. Ind. 14 (1)(1979) 3.[6] M. Keskitalo, A. Pohto, M.L. Savela, J.P.T. Valkonen,J. Simon, E. Pehu, Ann. Appl. Biol. 133 (1998) 281.[7] P.W. Waterworth, Laboratory method in antimicrobial chemo-therapy, 1st ed., Churchill Livingstone, Édimbourg, Royaume-Uni, 1978, p. 38.Tableau 3Propriétés antimicrobiennes des huiles essentielles de Lantana camara LinnNo desBoîtes dePétriDescription Genre Lantana camara Linn.Effet aprèsrepiquagePropriétés2 Levures isolées grosses de formes ovoïdes et lenticulaires Saccharomyces spp. destructeur fongicide5 Bactéries Gram (+) corynéformes Corynebacteriaceae spp. destructeur bactéricide6 Levures encapsulées Sporobolomyces destructeur fongicide7 Levures en chaîne ou en amas Torulopsis candida inhibiteur fongiostatique8 Levures ovoïdes et lenticulaires Hansenula spp. inhibiteur fongiostatiqueFig. 2. Action destructrice de l’huile essentielle de Lantana camaraLinn. sur les mâles d’Amblyomma variegatum.Fig. 3. Action destructrice de l’huile essentielle de Lantana camaraLinn. sur les femelles d’Amblyomma variegatum.1105G. Alitonou et al. / C. R. Chimie 7 (2004) 1101–1105

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