Se describe una nueva técnica para el estudio de la secreción biliar en pollos anestesiados y no anestesiados que permite la recogida simultánea de la bilis segregada por los dos conductos biliares de esta especie, junto con el mantenimiento de la circulación enterohepática de sales biliares. Se discuten por primera vez, de forma conjunta, los resultados de la secreción de bilis en condiciones basales por el conducto hepático y vesicular. Igualmente se discuten las diferencias en la secreción biliar entre animales anestesiados y no anestesiados.A new experimental technique to study the biliary secretion in anaesthetized and unanaesthetized chicken that allows the simultaneous collection of the bile secreted through the two bile ducts of this species, tog,ether 
wtth the maintenance of the enterohepatic circulation of bile salts is 
described. The results of biliary secretion in basals conditions through 
the hepatic and vesicular ducts are discussed in conjunction for the first 
time. Equally differences in biliary secretion between anaesthetized and 
unanaesthetized animals are discussed

Esteller, A.

Hidalgo, F.

Lisbona, F.

López, M. A.

Ars Pharmaceutica (Internet)

Spanish

Repositorio Institucional Universidad de Granada

DEPARTAMENTO INTERFACULTATIVO DE FISIOLOGIA ANIMAL SECRECION BILIAR EN EL POLLO ANESTESIADO Y NO ANESTESIADO: NUEVA TECNICA EXPERIMENTAL F. LrsBoNA, F. HIDALGO, A. ESTELLER y M. A. LOPE!l RESUMEN Se describe una nueva técnica para el estudio de la se.creción biliar en pollos anestesiados y no anestesiados, que permite la recogida simul­tánea de la biUs segreg.ada por los dos conductos biliares de esta especie, junto Con el manten.imiento de la circulación enterohepática de sales biliares. Se discuteri por primera vez, de forma conjunta, los resultados de la secreción de bilis en condi,ciones basales por el conducto hepático y vesicular. Igualmente se discuten l.as dif,erencias en la secreción biliar entre animales anestesiados y no anestesiados. SUMMARY A new experimental technique to study the biliary secretion in anaes­thetizeQ and unanaesthetized chicken that allows the simultaneous colle,c­tion of the bile secreted through the two bile ducts of this species, tog,ether wtth the maintenance of the enterohepatic circulation of bile salts is described. The results of biliary secretion in basals conditions through the hepatic and vesicular ducts are discussed in conjunction for the first time. Equally differences in biliary secretion between anaesthetized and unanaesthetized animals are discussed. Existen un pequeño número de publicaciones acerca de la fisiología de la Secreción Biliar en el pollo. Este hecho es lla­mativo dada la peculiar anatomía del árbol biliar extrahepá­tico de esta especie, con un conducto hepático directo, desde el lóbulo izquierdo del hígado hasta el duodeno, y otro, vesicu-Ars Pharmaceutica. Tomo XXI, Núm, 3, 1980. 280 ARS PHARMACEUTICA lar, que partiendo de una vesícula biliar, que a su vez recibe una serie de pequeños conductos que provienen del lóbulo de­recho, va a parar al duodeno independientemente del hepático. Esta peculiar topografía biliar, hacía en principio pensar que el pollo era una especie de elección para estudiar, de forma separada, la acción de factores coleréticos y colagogos. Sin embargo, la independencia de los dos sistemas, hepático y vesicular, es tan solo aparente, pues intrahepáticamente exis­ten una serie de conductos que permiten la fácil y rápida mez­cla de la bilis de ambos lóbulos, y que fueron puestas de mani­fiesto por PURTON (14) por técnicas histológicas y por LIN et al. (11) por técnicas fisiológicas. La posibilidad de que la bilis que fluye normalmente por un conducto, pase al otro tras obstrucción del primero y vice­versa, complica extraordinariamente la interpretación de los resultados obtenidos. Así en los trabajos publicados hasta la fecha, o bien se trabajo con solo un conducto (11, 3, 12, 7) o bien se tratan independientemente (1). En el presente trabajo, no sólo se exponen las técnicas quirúrgicas, que permiten recoger bilis por ambos sistemas de conductos, en las condiciones más próximas a las fisiológicas, tanto en animal anestesiado como en animal no anestesiado con fistul acrónica, así como el tratamiento postoperatorio que facilita el correcto manten·imiento fisiológico de las últimas, sino también se propone por primera vez un método para ex­poner e interpretar conjuntamente los resultados obtenidos, en cuanto a la bilis que fluye por ambos conductos. MATERIAL Y METODOS Se han utilizado un total de 50 pollos Broiler con un peso comprendido entre 2 y 4 kg. procedentes del Servicio de Anima­les de Laboratorio de la Universidad de Granada. A todos los animales se les retiraba la comida, pero no el agua. 20-24 horas ?utes de la intervención. Experimentos agudos Los animales se sedaron con benzodiacepan (Valium N.R.) administrado intramuscularmente, en dosis que oscilaron entre ARS PHARMACEUTICA 281 los 20 Y 60 mg/kg. La anestesia se completó con la adminis­tración endovenosa de etil-uretano (1 mg/kg). La profundidad de la anestesia se controló a través de los reflejos plantar y oculoparpebral. Se disecó la vena yugular derecha, en la que se introdujo una cánula de polivinilo hasta que su extremo quedó situado en la vena cava descendente; esta cánula se utilizó para la anes­tesia e inyección de diferentes sustancias; en la arteria carótida derecha se introdujo otra cánula de manera que su extremo llegara al cayado aórtico, lo que nos permitió el registro de presión arterial sin interrupción de flujo. En todos los casos se practicó traqueotomía de rutina con el fin de reducir al mínimo las dificultades respiratorias; sin embargo, no fue necesario recurrir a la respiración artificial. A continuación se realizó laparotomía lateral derecha a través de la cual se ligó el píloro y se disecaron ambos conductos bi­liares, que se canularon con tubos de polivinilo del tamaño adecuado; la herida se cubrió con gasas humedecidas con solu­ción salina 0,9 % a 37°C. La bilis que fluye por ambos conductos se recoge en viales, tras pasar por unos transductores Drop-Counter A978 que fun­cionan por un efecto piezoeléctrico. Estos sistemas nos cuanti­fican las gotas de secreción, lo que puede convertirse fácilmente en flujo conocido el peso de cada gota. La bilis recogida se reingresa en duodeno cada 60 minutos, tras guardar una pe­queña parte para los análisis, con lo que se mantiene intacta la C.E.H. de sales biliares. Para registro de la presión arterial conectamos la cánula carotídea a un transductor Statham P23Db, que a su vez se conecta a un polígrafo physiograph E & M a través de un carrier preamplificador. Experimentos crónicos Durante los dos días previos a la intervención quirúrgica se les inyectó a los animales por vía intramuscular 100 mg de Vito C y una dosis preventiva de antibióticos. El procedimiento seguido para la sedación fue similar al descrito en los experimentos agudos, sin que en ningún caso se administrara anestésico, sino únicamente benzodiacepan por 282 ARS PHARMACEUTICA vía intramuscular, lo que condujo a una sedación suficiente dada la escasa duración de la intervención. Tras laparotomía lateral derecha se procede a la localiza­ción del asa duodenal. Se disecan los dos conductos biliares y se realizan incisiones en cada uno de ellos por las que se in­troducen sendas cánulas de goma siliconada, asegurándose dichas cánulas con ligaduras dobles de lino. En el duodeno y a unos 15 cm del píloro se implanta una cánula en "T" de poli­vinilo que se fija con una sutura en bolsa de tabaco. Las tres cánulas se exteriorizan a través de la pared abdominal derecha, cuidando siempre de mantener la posición inicial de los con­ductos así como la del duodeno. Las dos cánulas biliares nos permiten la recogida de la bilis y la duodenal el reingreso de la misma y la administración de nutrientes y otras sustancias utilizadas en nuestros ensayos. La herida abdominal se cierra por planos con sutura con­tinua de lino del n.O O. Se impregna la cicatriz y las zonas de afloramiento de las cánulas con un aerosol de cloranfenicol y violeta de genciana. A las 12 horas de la operación se facilita a los animales el acceso al agua y a las 36 horas a la comida. Finalizado el perío­do postoperatorio que normalmente tiene una duración de 48 a 72 horas. La recuperación del animal es total y sus condiciones fisiológicas normales permiten el comienzo de los experimentos. Cada animal se aloja en una jaula especial de 0,25 x 0,4 m. situada a 1 metro del suelo en una habitación termorregu1ada. En ningún animal se presentaron alteraciones del funcio­nalismo hepático. Sin embargo, y debido a la alta viscosidad de la bilis vesicular y al bajo flujo existente en este conducto, con cierta frecuencia se producían tapones que lo obturaban pro­gresivamente; si este estado se prolongaba (más de seis horas), se procedía a sacrificar al animal para evitar que el posible estasis biliar indujera daños hepáticos con la consecuente mo­dificación de los resultados. A todos los animales se les extirpó el hígado, y se tomaron muestras para su ulterior examen histológico. Para la recogida de las muestras de bilis, se conectaban a la pieza plástica de las cánulas, bolsas de polietileno previa­mente taradas. El volumen de bilis se calculó por diferencia de pesada, considerando la densidad de la bilis igual a la unidad. ARS PHARMACEUTICA 283 Una vez determinado el flujo, una muestra homogénea de bilis se guardaba en frascos de vidrio, los cuales se mantenían a _20°C para su posterior análisis, y el resto de la bilis se rein­yectaba en duodeno. Las sales biliares se analizaron por un método colorimétrico (10), los Cl se cuantificaron por un mé-� . todo potenciométrico y el Na+ y el Ka+ por espectrofotometría de absorción atómica. RESULTADOS La Fig. 1 recoge los valores medios de flujo y concentración de sales biliares y Cl-, tanto en animales anestesiados como no anestesiados, en diferentes condiciones experimentales. " ANESTeS/A.DOS ¡.JO AN/;.-STE'SII. DOS IICPATIC(J HEPAT"�. YEj¡lV'AR VESICIILAR L/fADO HE"PATICO HE PA7JeD¡ I/rS"I.ILAR VE S""LAR �I "ROO I ' 9  9 8 8 9 9 , '" b ( ri. e l ' It i " (! If J2 8 6  !/ J2 3f A 8 ,  O F F'" (o H I  Fig. l.-Flujo de bilis, concentración de ácido cólico y de cloruro en pollos, en diferentes condiciones basales. o � lf@ Flujo de bilis Concentración de ácido cólico Concentración de cloruro a -- A P < 0.001 b -- B P < 0.01 h -- H P < 0.001 i -- 1 P < 0.001 284 ARS PHARMACEUTICA La Fig. 2 nos muestra la correlación existente entre la con­centración de el y la de ácido cólico en la bilis recogida en el conducto hepático, en el conducto vesicular y en la vesícula de pollos anestesiados. a :  b /20 Bilis c.ondu.cto hepa.tico � J : -I.91x • 121. " vesi,ulo" - y" -0.78 � ./03 el/. vesúJLLa. - j-= - 0.53)< + 65 r- - 0.712 P < O.M r = - O. 943 P < o.oo� ro:. -O.14?I p ( 00/ 40 b O�-----r-----'2-0-----T----���O----�------�60 o Ac.cólho m€'1/l. Fig. 2.-Correlación entre concentración de ácido cólico y cloruro en la bilis del conducto hepático, conducto vesicular y vesí.cula biliar de pollos anestesiados. ARS PHARMACEUTICA 285 La Fig. 3 ilustra las variantes de flujo y de concentración de sales biliares y Cl- en la bilis que fluye por el conducto hepático de pollos no anestesiados, con el conducto vesicular ligado y la circulación enterohepática de sales biliares intacta. y la Fig. 4 las variaciones de los mismos parámetros y además las de flujo total (suma del hepático más el vesicular) en simi­lares condiciones a la de la figura 3 . .-.; /eo 1 � � I � � 80 o " .... :o " � � o ito o 'i' 20 � o o I 2 4 6 8 /0 Fig. 3.-Secreción biliar en pollos no anestesiados. C.E.H. intacta. Conducto vesicular ligado. 11:3 t(hr.) 286 ARS PHARMACEUTICA El registro 1, recoge las variaciones de preslOn arterial (parte superior) y de flujo por el conducto vesicular hepático en un animal anestesiado al que se pinzó alternativamente los conductos hepático y vesicular. r] \,.) 100 o z i 10 11, n= J 12 /1, t (hr) Fig. 4.-Secreción biliar en pOllos no anestesiados. C.E.H. intacta. (T x FlUjo total, suma del recogido en conducto hepático y conducto vesicular. H x Conducto hepático). ARS PHARMACEUTICA 287 (.v,.'".I., _______ L-....L_..L-_.l..-.JIl.-JI--1.I--JL-...!.I-:IL-IL..JIL----(.,.,.,,, -:H+---+--,l-I--t!+1:----------------:I!��4--+!-t!: ,,, PII't,A/."O (O"D�HI �, ...  ,," I , .• ,)II" J ICS,'�¿'" .... , ..... , _ ---------'--,--------r---------:---,- - -----'-'-+-'-I · Registro 1.-Efecto del pinzamiento alternativo de los conductos hepáti,cos y vesicular sobre el fiujo de bilis en pollo anestesiado. DISCUSION Sobre la secreción en reposo en animal anestesiado En nuestras condiciones experimentales, en pollos de peso comprendido entre 2 y 3 kg., el ft.ujo medio de bilis por el con­ducto hepático es de 39± 4 (n = 10) ¡..¡.l/min. (Fig. 1), lo que equivale aproximadamente a 33 ¡..¡.l/g. hígado/hora. El ft.ujo por el conducto vesicular es variable y mucho más reducido, con un valor medio de 7 ± 2 ¡..¡.l/min. En consecuen­cia, el ft.ujo total de bilis en el pollo anestesiado es elevado, inferior al del conejo (2) (9), la rata (2) (9) (15) Y el cobaya (2), y superior al del perro (2) (8), monos (6), hombre (2) y ga­to (13); en nuestros experimentos se obtiene un ft.ujo del mismo orden que el descrito en la bibliografía (11), para esta especie, en semejantes condiciones. En los animales con el conducto vesicular ligado (Fig. 1) el flujo de bilis por el conducto hepático es análogo al de los ani­males con dicho conducto libre, no existiendo diferencia signi­ficativa entre ambos grupos. En este sentido estamos de acuerdo con LIN y col. (11), quienes observan hechos similares, y de­ducen la existencia de anastomosis a nivel intrahepático entre los dos sistemas de conductos presentes en el árbol biliar de esta especie, anastomosis que también se han estudiado desde el punto de vista morfológico (14). Más aún, en los ensayos realizados por nosotros pinzando alternativamente el conducto hepático y el vesicular (registro 1) se comprueba que, siempre 288 ARS PHARMACEUTICA que uno de los conductos está pinzado, la cantidad de bilis que fluya por el otro es sensiblemente idéntica al flujo total en­contrado en condiciones basales. La composición de la bilis hepática en los principales elec­trolitos es muy semejante a la de los líquidos extracelulares, con unos valores medios de 164± 8 mEq/l para el Na+, 5± 0,4 mEq/l para el K + Y 101 ± 2 mEq/l para el Cl- (Fig. 1). La con­centración de sales biliares es de 12 ± 1 mEq/l, expresada como ácido cólico, siendo estos valores del mismo orden que en los ma­míferos cuyo flujo biliar es alto, y más bajos que en aquellos que presentan una secreción biliar reducida. Al estudiar la com­posición de la bilis vesicular, es preciso tener en cuenta que la vesícula biliar del pollo no es homóloga de la de mamíferos, ya que se trata de un simple ensanchamiento del conducto ve­sicular, a través del cual la bilis fluye de manera continua; por ello no es de extrañar que se aprecien diferencias entre la bilis recogida del conducto vesicular y la extraida directa­mente de la vesícula. La bilis del conducto vesicular (Fig. 1) presenta una concentración en sales biliares, muy superior a la de la bilis hepática, y asimismo se encuentran aumentadas, aunque en menor cuantía, las proporciones de Na y K hasta va­lores de 177 ± 9 y 8± 2 mEq/l, respectivamente; la elevación de la concentración de sales biliares se compensa por un descenso del mismo orden en la de Cl." En la bilis extra ida de la vesícula la situación es similar, pero más acusada, llegando la concen­tración de sales biliares a sextuplicar la de la bilis hepática, y de la Cl- 26± 4 (n = 15), a ser una cuarta parte de la encon­trada en dicha bilis hepática. Tanto en la bilis del conducto vesicular, como en la extraida de la vesícula, existe correlación negativa (Fig. 2), estadísticamente significativa (P < 0,01), entre la concenración de sales biliares y la de Cl-, lo que ya había sido puesto de manifiesto por ESTELLER y col. en un tra­bajo previo (5). Todo lo anteriormente indicado demuestra que la vesícula biliar del pollo, pese a las diferencias morfológicas, se comporta funcionalmente de modo análogo a la de mamí­feros, teniendo lugar en la misma una reabsorción de agua y Cl- y concentrándose en consecuencia los ácidos biliares y los cationes. ARS PHARMACEUTICA 289 Sobre la secreción en reposo en animal no anestesiado El flujo de bilis por el conducto hepático en pollos no anes­tesiados (Fig. 1) es de 22 ± 1 ¡.d/min. significativamente menor (P < 0,001) que el obtenido en las preparaciones agudas, y lo mismo ocurre cuando el conducto vesicular está ligado (Fig. 1), aunque en este caso no hay significación estadística, debido a la gran dispersión de los resultados. La concentración de sales biliares es siempre significativamente superior en los animales no anestesiados, y en cambio es inferior a la de Cl- (Fig. 1); por lo que se refiere a la bilis recogida del codnucto vesicular, no hay diferencias entre ambos grupos de animales. Existen varias explicaciones posibles para las variaciones encontradas, entre las que podemos mencionar las siguientes: un efecto positivo de la anestesia sobre el flujo de bilis, un compo­nente mecánico debido al distinto procedimiento de recogida (ver Método), una hipersecreción por el estímulo físico propor­cionado por la cánula en los períodos iniciales, cambios en los procesos de reabsorción de agua en el sistema de conductos a causa de la anestesia, etc. No estamos en condiciones de diluci­dar cuál de estas explicaciones es la correcta, o cuál es la con­tribución real de cada uno de estos mecanismos. En todo caso es preciso destacar que las diferencias en flujo se acompañan siempre de cambios en composición, de forma que, a mayor flujo menor concentración de sales biliares, tendiendo la pro­ducción de las mismas a mantenerse constante, y, a mayor concentración de sales biliares, menor concentración de Cl. En ausencia de estímulos, y cuando la circulación enterohe­pática (CEH) de sales biliares se mantiene intacta, la secreción de bilis en pollos no anestesiados es notablemente constante, tanto en flujo como en composición (Figs. 3 y 4). La contribu­ción vesicular nuevamente es escasa como se deduce de la com­paración entre el flujo por el conducto hepático y el flujo total (Fig. 3) Y entre los flujos hepáticos cuando el conducto vesi­cular está ligado o no (Fig. 3 Y Fig. 4). La constancia de los datos obtenidos a lo largo del tiempo (hasta tres meses) en animales no anestesiados, así como la ausencia de síntomas de alteraciones hepáticas en los controles histológicos postmortem, indican que la preparación quirúrgico­experimental empleada por nosotros es aceptable desde el punto 290 ARS PHARMACEUTICA de vista fisiológico. Por otra parte, la presentación y discusión de nuestros resultados en pollos anestesiados o no, por la no­vedad que supone el tratamiento conjunto de la secreción a través de ambos conductos, resulta de interés para estudios pos­teriores en especies animales con este tipo de disposición ana­tómica en su árbol biliar intra y extrahepático. BIBLIOG RAFIA l.-ANGELUCc'[, L., BALDIERI, M. & LINARI, G.: Eur. J. Pharmac., 11, 217-232, 1970. 2.-CHENDEROVITCH, J.: Am. J. Physiol., 214, 86-93, 1968. 3.-CLARKSON, T. B., KING, J. S. & WARNOCK, N. H.: Am. J. Veto Res., 18, 187-190, 1957. 4.-CLARKSON, M. J. & RICHARDS, T. G.: The liver with spe,cial reference to bile formation. In: Physi.ology and Biochemistry of the Domestic Fowl. Ed. by D. J. Bell and B. M. Freeman. Vol. 2, 1085-1114. New York. Academic Press. 5.-EsTELLER, A., DE LA HIGUERA, M., LOPEz, M. A., ZAMORA, S. & MURILLO, A.: Rev. Esp. Fisiol., 31, 91-94, 1975. 6.-EsTELLER, A., LISBONA, F., MARTINEZ DE VICTORIA, E. & MURILLO, A.: Rev. 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Secreción biliar en el pollo anestesiado y no anestesiado: Nueva técnica experimental

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