Análise da expressão do antígeno cutâneo associado ao linfócito e da expressão da selectina-e nas lesões de líquen plano oral através da imunofluorescência

Abstract

O Líquen Plano Oral (LPO) é uma doença autoimune inflamatória crônica, afeta aproximadamente 0,1 a 2% da população, na maioria mulheres, entre a quinta e sexta décadas de vida. Acredita-se que os linfócitos T CD8+ desempenhem um papel fundamental na manifestação da doença. Os antígenos cutâneos associados aos linfócitos (CLA) migram preferencialmente para a pele através da interação com a selectina-E. Possivelmente nas lesões de LPO a maior expressão do CLA está diretamente relacionada a maior expressão da selectina-E. Assim, como a pele é afetada por doenças crônicas autoimunes como o líquen plano, é interessante determinar se os linfócitos T CLA+ são expressos na mucosa oral assim como na pele. Dessa forma, esse trabalho se propõe a analisar a expressão do CLA nas áreas de líquen plano oral e verificar se existe correlação com a expressão da selectina-E através da imunofluorescência. Os pacientes foram selecionados do ambulatório de Diagnóstico Oral do Hospital Universitário Antônio Pedro através de uma abordagem direta, foram informados por escrito dos objetivos do estudo, seus riscos e benefícios e assinaram um termo de consentimento para a participação. Foi preenchido um questionário de anamnese. Todos os pacientes tinham mais de 18 anos de idade e preencheram os critérios clínicos e histopatológicos para LPO. Foram excluídos gestantes, lactantes e os que não preencheram um dos critérios clínicos ou histopatológicos para LPO. Foi realizada uma única biópsia em cada paciente em mucosa jugal, englobando uma área de LPO (GLPO) e uma área clinicamente livre de lesão (GPL). O material obtido foi congelado a -80oC em OCT e posteriormente, obtidas secções de tecido com 6 μm de espessura. A coloração pela hematoxilina e eosina (H&E) foi realizada para o diagnóstico histopatológico bem como avaliar a intensidade do infiltrado inflamatório. Foi realizada a imunofluorescência utilizando os seguintes anticorpos: CD3, CD4, CD8, CD62E e CLA. Foi utilizado o programa Image J para análise da imunomarcação CD3, CD4, CD8 e CLA, e uma contagem visual para CD62E. A análise estatística foi realizada através do programa SPSS 17.0 e análise descritiva para os dados demográficos e características clínicas. Foram selecionados 11 pacientes do total de 37, na maioria mulheres (90,9%), idade média 52,2 anos, e 54,2% eram pardos. Os sítios mais acometidos foram mucosa jugal (100%) e língua (80%). Os padrões clínicos mais comuns foram o reticulado (100%) e o placa (90%). A histopatologia demonstrou em todos os casos infiltrado inflamatório em faixa, degeneração hidrópica da camada basal e ausência de displasia. A imunofluorescência demonstrou no GLPO em relação ao GC um predomínio de células CD3+CD8+ (p=0,003), CD8+CLA+ (p=0,004) e de CD62E (p=0,003). No GLPO houve um predomínio de CD3+CD8+ (p=0,01) e ligeiro predomínio de CD8+CLA+(p>0,05). As correlações entre CD3+ ou CLA e o CD62E foi fraca (p>0,05). A correlação entre o CLA e o CD62E foi fraca, não apresentando significância estatística. Os resultados indicam que tanto o CLA como a selectina-E parecem estar envolvidas e são importantes no mecanismo etiopatogênico do LPO porém uma outra molécula de adesão vascular pode ter importância na emigração destes linfócitosOral lichen planus (OLP) is a chronic inflammatory and autoimmune disease, affecting approximately 0,1 to 2% of the population, mainly females, and most frequently during the fifth and sixth decades of life. It is believed that the T CD8+ lymphocytes play a fundamental role in its manifestation. The cutaneous lymphocyte-associated antigen (CLA) appears to migrate preferentially into skin by interacting with E-selectin on vascular endothelium. In lichen planus it is possible a directly relationship with a higher expression of CLA and a higher expression of E-selectin. Since the mouth may be affected by chronic immune-inflammatory dermatoses such as lichen planus it is interesting to investigate if the CLA is expressed on oral mucosa as it is expressed in the skin. The aim of this work is to analyze the CLA expression in oral lichen planus area and to verify if there is a correlation with the E-selectin expression by using immunofluorescence stain. The samples were selected from Oral Diagnostic Clinic of Hospital Universitario Antonio Pedro. All patients were informed about the study, their risks and benefits and a consent form were signed in order to participate of the study. A questionnaire was filled out with all patients’ data. All patients were over 18 years old and clinical and histopathological criteria for OLP were considered. Pregnant and nursering mothers were excluded and those who clinical and histopathological criteria for OLP were not found. A biopsy was obtained from each patient from buccal mucosa, an area with OLP (GOLP) and without OLP (GPL). The obtained samples were frozen at -80oC in OCT for a 6 μm cut. Samples were stained for Hematoxylin and Eosin (HE) for inflammatory intensity evaluation and for histopathologic diagnosis. An immunofluorescence stain was performed using CD3, CD4, CD8, CD62E and CLA antibodies. An Image J program was used for immune stain analysis of CD3, CD4, CD8 and CLA and a visual count was performed for CD62E stain. Statistical analysis was performed for SPSS 17.0 package and descriptive analysis for clinical features and demographic data were performed. It was selected 11 patients from 37, the majority was female (90,9%), median age 52,2 years old, and 54,2% were brown. Buccal mucosa (100%) and the tongue (80%) were the sites most affected. Reticular (100%) and plaque (80%) pattern were the most common. In all cases histopathology demonstrated a band inflammatory infiltrate, basal layer hidropic degeneration and no dysplasia. The comparison of GOLP with CG an immunofluorescence demonstrated a predominance of CD3+CD8+ (p=0,003), CD8+CLA+ (p=0,004) and CD62E (p=0,003) in favor of GOLP. In GOLP was observed a predominance of CD3+CD8+ (p=0,01) and slightly predominance with regard to CD8+CLA+(p>0,05). The correlation among CD3+ or CLA and CD62E were weak. The correlation between CLA and CD62E was weak with no statistical significance was found. The results indicated that both CLA and E-selectin seems to envolved and are importants in the etiopatogenic mechanism of OLP however other vascular adhesion molecules could be enrolled and important into these lymphocytes emigration136 f